【正文】 用 75％乙醇進(jìn)行表面消毒，再用無菌解剖刀切斷，抽出白色的菌髓，用尖頭鑷子夾取一小段，接入試管 PDA斜面上，于 23～ 25℃ 下培養(yǎng)。 三、基內(nèi)菌絲分離法 ? 在進(jìn)行食用菌資源調(diào)查中，常會(huì)遇到某些希望得到的子實(shí)體，但卻已經(jīng)腐爛了，或有些子實(shí)體個(gè)體小而薄，或采用組織分離和孢子分離均困難，就可以采用基內(nèi)菌絲分離法。把采集到的耳（菇）木在長子實(shí)體的兩側(cè)，鋸下約 1cm厚的木片，置接種箱里，再從耳或菇基穴的周圍，切取一個(gè)三角塊，浸在％升汞溶液中，表面消毒 30～ 60秒鐘，取出并用無菌水沖洗，再用無菌紗布吸干水分，移至另一塊無菌紗布上，用無菌解剖刀切除樹皮后把木片劈成比火柴梗略粗的小塊，接入試管 PDA斜面培養(yǎng)基上，置22℃ ～ 25℃ 下培養(yǎng)。主要用于土中菇類。但在野外采集時(shí)，如菇類子實(shí)體已腐爛，可采用此法。 ? （ 2）、用無菌水反復(fù)沖洗菌絲束，然后用無菌棉花吸干水分。 ? （ 4）、置于 25℃ 的恒溫箱培養(yǎng)。 第五章 菌種質(zhì)量鑒定 ? 優(yōu)良菌種是食用菌栽培達(dá)到優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的前提，因此在生產(chǎn)中，必須把好菌種質(zhì)量關(guān)?？偟膩砜?，一個(gè)優(yōu)良的菌種應(yīng)該達(dá)到：“純、正、壯、潤、香”的標(biāo)準(zhǔn)。 ? 正：菌絲色澤要純正，多數(shù)種類的菌絲應(yīng)潔白、有光澤。無老化變色現(xiàn)象。接到新的培養(yǎng)基上吃料快、長勢(shì)好、不萎蔫、不衰老、不死亡。 ? 香：具有一定的清香，不得有霉腐氣味。再打開瓶塞，從菌種瓶中部取出小塊菌絲體，觀看顏色，聞其氣味，手捏料塊檢查其含水量，看是否符合上述標(biāo)準(zhǔn)要求。 ? 鏡檢法 選取少量菌絲制片，在顯微鏡下觀察分枝、分隔、鎖狀聯(lián)合及孢子，對(duì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定，但品系之間的差別，鏡檢難以解決。 ? 出菇試驗(yàn) 對(duì)分離或引進(jìn)菌種，在用于生產(chǎn)前必須做出菇試驗(yàn)，根據(jù)條件采用瓶栽、壓塊栽培出菇，觀察出菇能力，做好生物學(xué)記錄，通過產(chǎn)量和質(zhì)量分析，才能推廣應(yīng)用于生產(chǎn)。氣生菌絲爬壁力強(qiáng)，菌絲粗壯、生長整齊、氣生菌絲少、有菇香的為優(yōu)良菌種；氣生菌絲多，形成很厚的菌被將管壁包滿，是老化菌種或多次無性繁殖的菌種，很容易在種塊或管壁上形成原基，不宜擴(kuò)大培養(yǎng)。 ? 香菇 ? （ 1）母種 菌絲潔白、粗壯，呈絨毛狀，平鋪生長。 ? （ 2）原種、栽培種 菌絲粗壯濃密，生長均勻，潔白有光澤，香味濃郁，很少產(chǎn)生厚菌被，容易形成較多的子實(shí)體，菌齡35～ 40天。 ? （ 2）、原種、栽培種 菌絲潔白粗壯，長勢(shì)旺盛，全瓶均勻一致；培養(yǎng)后期（ 40天左右）瓶壁自上而下可見少量菊花或梅花狀的膠質(zhì)原基，顏色是黃褐至黑褐色。 ? 滑菇 ? （ 1）、母種 菌絲棉絨狀，較短，氣生菌絲不繁茂，最初白色，后變?yōu)槟逃忘S色、淡黃色，管壁常出現(xiàn)網(wǎng)狀菌絲束，產(chǎn)生黃褐色色素，生長速度較慢，在適溫下培養(yǎng) 12～ 15天可長滿試管斜面。菌絲雖為白色，但不呈絨毛狀，無彈性，捏碎成小塊或粉狀，培養(yǎng)基呈黃褐色或暗褐色，為菌齡過小的菌種，要繼續(xù)培養(yǎng)；瓶底有黃白色或褐色液體，為老化菌種，不宜使用。一般表現(xiàn)為生長緩慢、菌絲倒伏、顏色變黃等。 ? 菌種老化退化原因 （ 1）多次移接； （ 2）水質(zhì)的影響； （ 3）溫度； （ 4）長期處于逆境； （ 5）自然變異； （ 6）感染病毒。一個(gè)優(yōu)良菌種被選育出來以后，必須保持其優(yōu)良性狀，防止被雜菌污染，才不至于降低生產(chǎn)性能，能長期在生產(chǎn)上使用。 ? 菌種保藏的基本原理是采用干燥、低溫、冷凍、減少氧氣供給等方法，以終止其繁殖，降低代謝速度，使菌絲處于休眠假死狀態(tài)，并保證原種的純度。是常用的最簡便的保藏法，將需要保藏的菌種接種在適宜的斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)到接近成熟后，放在 4℃ ～5℃ 的冰箱中保藏。草菇是高溫性菌種，在 5℃ 以下菌絲體容易死亡，需要提高到 10℃ ～ 13℃ 保藏。 ? 礦油封口 菌種培養(yǎng)成熟后，為減少培養(yǎng)基水分的散失，最好將試管棉塞從管口處剪平，用石蠟封嚴(yán)后，再包扎一層塑料薄膜，以延長保藏時(shí)間。 ? 加酸度中和劑 為防止菌種在保藏過程中產(chǎn)生的酸積累過多在配制保藏培養(yǎng)基時(shí)還需加入 ％～ ％的磷酸二氫鉀或碳酸鈣等緩沖劑，以中和菌種在保藏過程中產(chǎn)生的有機(jī)酸。 ? 定期調(diào)換配方 在菌種保藏過程中，一般應(yīng)每隔一定時(shí)期，調(diào)換 1次培養(yǎng)基配方，以補(bǔ)充營養(yǎng)、水分，消除菌絲體代謝產(chǎn)物的影響，保持菌種正常的生活能力。用此法保藏，不需要太多的設(shè)備，操作簡便，只需在菌苔上灌注一層無菌的液體石蠟，即可使菌種與外界空氣隔絕，達(dá)到防止培養(yǎng)基水分散失，抑制菌種新陳代謝，延長保存時(shí)間的目的。用此法保藏的菌種不必置于冰箱內(nèi)，室內(nèi)保藏即可。然后將棉塞齊口剪平，再用蠟密封管口。也可用接種工具從斜面上取一小塊菌絲先在無菌水中洗滌，然后移接于斜面培養(yǎng)基上即可，余下的種可重新封口繼續(xù)保藏。 ? 冷凍管準(zhǔn)備 選用中性玻璃吹制的 10毫米 100毫米，底端突出球狀的安瓿管，用 /升鹽酸浸泡 8～ 10小時(shí)，沖洗至中性，烘干，在管壁貼上標(biāo)簽，標(biāo)明菌名、日期等，加棉塞，干熱滅菌。分裝時(shí)不要沾污管壁，塞好棉塞。也可將安瓿管置 1:1的干冰和 95％的乙醇組成的凍結(jié)劑內(nèi)，預(yù)凍 3～ 4分鐘。真空度用麥?zhǔn)险婵沼?jì)測(cè)量，要求 30分內(nèi)達(dá)，繼續(xù)抽氣，使真空度維持在 ，經(jīng) 6～ 8小時(shí)后，即可使管內(nèi)水分升華干燥。 ? 保藏和啟用 置 4℃ ～ 6℃ 冰箱內(nèi)或常溫下遮光保藏。然后管內(nèi)注入 ，用接種環(huán)移接入斜面上活化培養(yǎng)。由于超低溫能使代謝水平降到最低限度，用此法保藏的菌種基本上不發(fā)生變異。 ? 保藏方法 采用 10％（體積比）的二甲基亞砜蒸餾水為保護(hù)劑，淹沒料面，輕輕地刮落面料上的菌絲體，使之成菌絲懸浮液，吸取 5～ 8毫升注入已滅菌的安瓿管中，熔封管口，放液氮冷凍器內(nèi)，以每分鐘降低 1℃ 的速度緩慢降溫，在 1小時(shí)內(nèi)使其凍結(jié)到 35℃ ，以后速度不需控制，當(dāng)安瓿管凍結(jié)后，立即放入液氮罐中。 ? 活化培養(yǎng) 在啟用液氮超低溫保藏菌種時(shí)，應(yīng)先將安瓿管置于 35℃ ～ 40℃ 的溫水中，使管中的冰塊迅速溶解，然后再開啟安瓿管，取懸浮的菌絲塊移植于適宜的培養(yǎng)基上活化培養(yǎng)。麥粒保藏法是利用麥粒作培養(yǎng)基，用于保種的麥粒，含水量在 25％左右，這樣的麥粒，在滅菌后種皮不破裂。此法保藏菌絲，經(jīng) 1～ 2年后，再接到培養(yǎng)基上，菌絲生長仍然良好。待菌絲長到培養(yǎng)基 2/3時(shí)，取出用蠟將棉塞封好，包上塑料薄膜，置于 4℃ 冰箱內(nèi)，保藏1～ 2年。此法適用香菇、黑木耳、黃背木耳菌絲保藏。用此法保藏草菇菌種，可達(dá) 1年以上。具體方法如下： ? 第一、取河沙過篩（ 60～ 80目篩子），除去大沙粒，用10％的鹽酸浸泡以除去有機(jī)質(zhì)。浸泡 2～ 4小時(shí)后，倒去鹽酸，用清水沖洗幾次，直到接近中性，置 60℃ ～ 80℃ 烘箱中烘干。如采用干熱滅菌在165℃ 下保持 2～ 3小時(shí)， 1次即可。 ? 第三、用接種環(huán)將收集的孢子接于沙土管中拌勻即可。 ? 第四、將接種后的沙土管置于盛有干燥劑（生石灰、氯化鈣或硅膠）的容器內(nèi)，接上 8小時(shí)，使沙土基本干燥。 ? 濾紙片保藏法 此法適用于蘑菇、金針菇、香菇、黑木耳和猴頭，用濾紙片保藏孢子，可存活。 ? （ 2）、孢子收集 將滅過菌的濾紙片培養(yǎng)皿移入接種箱孢子采集罩內(nèi)，接受孢子。 七、懸液保藏法 ? 生理鹽水保藏法 將保藏的食用菌菌種，在無菌條件下接入馬鈴薯汁蔗糖培養(yǎng)液中，振蕩培養(yǎng)5～ 7天，然后將形成的菌絲球吸入裝有 5毫升無菌生理鹽水的試管中，每管移入 4～ 5個(gè)菌絲球，塞好試管，并蠟封，置于常溫或 4℃ 溫度下保藏。 ? 菌絲體液體保藏法 將保藏的菌種在無菌條件下，取菌塊放入馬鈴薯培養(yǎng)液中，在常溫下靜置培養(yǎng)，其成活率達(dá) 33個(gè)月為 ％， 42個(gè)月為