【正文】 至瓶體的1/3處，加棉塞封口，在 1小時(shí) ,由于高壓蒸汽滅菌常有水蒸氣滲入 ,需放在40℃ 溫箱中烘烤 8～ 10小時(shí) ,使水分蒸發(fā)至石蠟液透明為止 . ? 灌注礦油 用無菌吸管將滅菌石蠟液注入在要保藏的菌種斜面試管內(nèi)，用量以高出斜端 1厘米為宜。 ? 速凍干燥 將安瓿管放在 40℃ ～ 30℃ 低溫冰箱內(nèi)預(yù)凍1小時(shí)，防止抽氣時(shí)產(chǎn)生泡沫外溢。 四、液氮超低溫保藏法 ? 是根據(jù)活細(xì)胞在超低溫下（ 196℃ ）處于休眠狀態(tài)而設(shè)計(jì)的一種長(zhǎng)期保藏菌種的方法。制作方法：先將麥粒浸水 4～ 5小時(shí)，濾去水后晾干麥粒表面的水分，裝入小試管，裝量為試管高度的 1/3，高壓蒸汽滅菌，在 帕壓力下，滅菌 1小時(shí)，冷卻后接入孢子液或菌絲懸浮液，搖勻后置適宜溫度下培養(yǎng)，當(dāng)試管中的麥粒發(fā)滿菌絲后，放入裝有氯化鈣的干燥器內(nèi)，進(jìn)行抽氣干燥 ,干燥后，將干燥器放于 20℃ 以下的溫度保藏。 六、干燥保藏法 ? 沙土管保藏法 ? 此法是將食用菌孢子保藏于干燥的無菌沙土中，保藏期為2～ 10年?；?qū)㈡咦咏佑?5毫升無菌水的試管中，充分搖勻成孢子懸浮液，然后用 1毫升無菌吸管吸取孢子懸浮液加入沙土管中（每管加 ）即可。一般可保藏 1～ 3年。 ? （ 3）、貯藏方法 待孢子彈射上濾紙片后，在無菌條件下，用鑷子將紙片一一移入無菌空試管中，然后將試管封熔保藏在 0℃ ～ 1℃ 冰箱內(nèi)。滅菌后取少許干沙土放入牛肉湯培養(yǎng)液中無菌培養(yǎng)，檢查無菌，證明沙土管滅菌徹底合格后，方可使用。 ? 草粉保藏法 稻草粉碎后加入 30％麩皮，pH值調(diào)到 8左右，分裝入試管內(nèi)，裝量為管長(zhǎng)的 2/3左右，在 小時(shí)，接入草菇菌種適溫培養(yǎng)，菌絲長(zhǎng)滿管后，在接種箱內(nèi)，換上無菌橡皮塞，置8℃ 以上室溫下保藏。 五、自然基質(zhì)簡(jiǎn)易保藏法 ? 麥粒保藏法 用麥粒保藏蘑菇和靈芝菌種，保藏期蘑菇達(dá)一年半，而靈芝可達(dá) 5年之久仍有活力。使用時(shí)，在無菌條件下用砂輪把安瓿管上端劃一刻痕，置火焰上加熱，再把蘸有來蘇爾的紗布敷上，使之破裂。 ? 制備孢子懸浮液 在試管中加入 3毫升脫脂牛奶加棉塞，121℃ 滅菌 30分鐘，在無菌條件下放入食用菌孢子，攪動(dòng)制成孢子懸浮液，用無菌的長(zhǎng)毛細(xì)滴管吸取孢子懸浮液注入安瓿管底球部，每管約 。一般室溫下可保藏 5～ 7年，期間 1～ 2年應(yīng)移接 1次。 ? 利用此法保藏菌種，應(yīng)盡可能使菌絲體在培養(yǎng)基上不干、不死，以延長(zhǎng)保藏時(shí)間，為達(dá)到此目的，需注意以下幾點(diǎn)： ? 適當(dāng)加大瓊脂用量 瓊脂具有保水功能，在配制保藏用培養(yǎng)基時(shí)，為了減少培養(yǎng)基水分蒸發(fā)，延長(zhǎng)保藏時(shí)間，可將瓊脂用量由 2％加大到 ％。 第六章 菌種保藏 ? 菌種是重要的生物資源，也是食用菌生產(chǎn)首要的生產(chǎn)資料。菌齡以 35～ 40天為宜。 三、幾種主要食用菌菌種鑒別標(biāo)準(zhǔn) ? 平菇 ? （ 1）、母種 菌絲潔白、濃密、粗壯，生長(zhǎng)整齊，不產(chǎn)生色素，菌絲生長(zhǎng)快，在適溫下 6～ 8天可長(zhǎng)滿試管斜面。 ? 潤(rùn)：培養(yǎng)體濕潤(rùn)，與瓶壁緊貼而不干縮，含水量適宜。 ? 一、優(yōu)質(zhì)菌種的標(biāo)準(zhǔn) 食用菌優(yōu)質(zhì)菌種的標(biāo)準(zhǔn)，隨品種不同而有差異。用前述分離方法能獲得菌種的一般不用這種方法。 ? 菌索組織分離法 蜜環(huán)菌、假蜜環(huán)菌、安洛小皮傘等在培養(yǎng)基內(nèi)產(chǎn)生菌索。其方法是：選尚未開傘的菇蕾，在無菌箱內(nèi)以 ％的升汞液浸 1— 2分鐘，再用無菌水沖洗、揩干，或用 75％酒精棉球擦菌蓋 2次，進(jìn)行表面消毒。食用菌子實(shí)體組織，實(shí)際上就是菌絲體的扭結(jié)物，具有很強(qiáng)的再生和保持種性能力，切取一小塊組織移植到培養(yǎng)基上便能進(jìn)入營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)階段，從而獲得純菌絲體。 ? （ 7）操作人員最好換消毒的工作服，戴口罩，雙手要用 70%75%的酒精消毒。一般是將其添加到培養(yǎng)料中，由于食用菌種類不同，選擇藥物也應(yīng)有不同的種類與濃度。因此，堿能殺菌。如果在乙醇中加入稀酸或稀堿則殺菌效力增加。因此，它殺菌力較強(qiáng)，常用作比較殺菌力的標(biāo)準(zhǔn)。其殺菌力強(qiáng)而穩(wěn)定，由于細(xì)胞中 DNA吸收了這一波長(zhǎng)，輕則發(fā)生變異，重則造成死亡。 使用本法滅菌注意升壓前要排盡鍋內(nèi)冷空氣，也就是鍋內(nèi)水沸騰后（蒸汽溫度 100℃ 以上）可繼續(xù)排冷空氣 5分鐘左右，一般可排盡冷空氣。除液體石蠟外，一切液體均不能用此法滅菌。 第三節(jié) 消毒與滅菌 ? 微生物是形體微小的生物。培養(yǎng)基滅菌完畢從鍋中取出后，應(yīng)放在冷卻室內(nèi)冷卻，準(zhǔn)備接種。 ? （ 2）分裝 ? 裝瓶前必須將空瓶洗干凈，干燥。配方主要有： ? ①干稻草 97％，過磷酸鈣 ％，硫酸銨 ％ , 石膏粉 1％，料水比 1:～ ； ? ②干稻草 79％，麩皮或米糠或玉米面 20％，碳酸鈣 1％ , 料水比 1:～ 。無菌檢查是將斜面培養(yǎng)基放在 37℃ 恒溫箱中培養(yǎng) 24小時(shí)，培養(yǎng)基表面無任何雜菌長(zhǎng)出即為合格的培養(yǎng)基。分裝所用的容器要清洗、干燥。其操作步驟如下： ? 第一步：稱量溶化、取汁和補(bǔ)水。此配方適用于培養(yǎng)木耳母種。 ? 以上兩個(gè)配方適用于培養(yǎng)各種食用菌。 ? 培養(yǎng)基必須具備三個(gè)條件：第一、含有食用菌生長(zhǎng)所需要的物質(zhì)，如水分、養(yǎng)分和適宜的酸堿度。 配料室 要求地面平整光滑，有水電，并配備下列用具、物品： （ 1）拌料機(jī)或拌料槽及拌料、配料工具； ? （ 2）衡器 磅稱、工業(yè)天平、量杯等； ? （ 3）分裝操作臺(tái)（臺(tái)高 80cm左右）及分裝工具（裝瓶機(jī)、裝袋機(jī)；如人工裝瓶，需有壓板，打孔棒等。 母種 ? 是指首次從大自然分離得到的純菌絲體，它是生產(chǎn)其它菌種類型的原始種，俗稱一級(jí)種，因其在試管里培養(yǎng)而成，也稱試管種。 ? 接種設(shè)備 是指分離和擴(kuò)大轉(zhuǎn)接各級(jí)菌種的專用設(shè)備： （ 1）接種室（無菌室）： 10平方米左右的小套間，拉門，安裝紫外燈，內(nèi)放超凈工作臺(tái)、接種箱等； （ 2）接種箱； （ 3）接種工具：是指分離和移接菌種的專用工具，樣式很多，一般用不銹鋼制成，主要有接種鏟、接種針、接種鉤、接種耙、接種槍等。 一、培養(yǎng)基的類型 ? 按營(yíng)養(yǎng)來源 按培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)來源，可將培養(yǎng)基分為： ? （ 1）天然培養(yǎng)基 ； ? （ 2）合成培養(yǎng)基 ； ? （ 3）半合成培養(yǎng)基 。 ? （ 4）木屑浸出汁培養(yǎng)基 木屑 500克，瓊脂 20克，細(xì)米糠 100克，硫酸銨 1克，葡萄糖（或蔗糖） 20克，水 1000毫升。 ? （ 8）糯米粉糖瓊脂培養(yǎng)基 糯米粉 50克，葡萄糖 15克，蔗糖 15 克，瓊脂 20克，水1000毫升。最后均要補(bǔ)足水量到 1000毫升。 第四步：加棉塞、滅菌 ? 棉塞要用普通棉花制作，不能用脫脂棉，棉塞的大小、松緊要適度，過松達(dá)不到濾菌的目的，過緊妨礙空氣流通，松緊度以手抓棉塞整個(gè)試管能提起為宜。 ? ①闊葉樹木屑 78％，麩皮或米糠 20％，蔗糖 1％，石膏粉1％，料水比 1:～ ； ? ②闊葉樹木屑 77％，麩皮或米糠 20％，蔗糖 ％，石膏粉 1％，尿素 ％ , 料水比 1:。 ? ③ 花生殼 78％，麩皮或米糠 20％，蔗糖 1％，石膏粉 1％，料水比 1:。 ? 生產(chǎn)栽培種時(shí)，多采用塑料袋作為容器，高壓滅菌用聚丙烯塑料袋，常壓滅菌用聚乙烯塑料袋。 ? 第二、米糠系指細(xì)米糠，不能用稻殼代替。就必須在一定范圍內(nèi)徹底殺滅空氣及物料、容器、工具等中的一切微生物。如用此法超過 180℃ ，所滅紙張或棉花就會(huì)焦化，影響滅菌質(zhì)量。其次，應(yīng)注意上升至要求壓力后，要保持一定時(shí)間，然后斷電或撤下熱源 ,待溫度降至零時(shí)再放汽開鍋 ,如果不這樣會(huì)造成滅菌不徹底或者容器內(nèi)液體噴出。 二、化學(xué)滅菌 ? 酚類 ?