【正文】 中，然后取出與標準比色板比較，過酸過堿用 5％的氫氧化鈉和 5％的稀鹽酸調(diào)整。 ? 將稱好的瓊脂剪成小塊，加入配好的液體培養(yǎng)基中，文火煮沸，邊加熱邊攪拌，待瓊脂完全溶化后，用濕紗布迅速進行過濾，趁熱分裝。分裝時要避免培養(yǎng)液粘附試管口，以免培養(yǎng)基粘住棉塞增加污染幾率。 第四步：加棉塞、滅菌 ? 棉塞要用普通棉花制作，不能用脫脂棉，棉塞的大小、松緊要適度，過松達不到濾菌的目的，過緊妨礙空氣流通，松緊度以手抓棉塞整個試管能提起為宜。將塞好棉塞的試管每9～ 11支捆成一把，用牛皮紙包住棉塞一端，再用線繩扎緊，豎直放入滅菌鍋內(nèi)滅菌，℃ ， 30分鐘。斜面長度一般為試管長度的 1/2。 三 原種、栽培種培養(yǎng)基的配制方法 ? 原種和栽培種其營養(yǎng)條件相似，制作方法基本相同。 ? ①闊葉樹木屑 78％，麩皮或米糠 20％，蔗糖 1％，石膏粉1％，料水比 1:～ ； ? ②闊葉樹木屑 77％，麩皮或米糠 20％，蔗糖 ％，石膏粉 1％，尿素 ％ , 料水比 1:。 ? （ 2）棉籽殼培養(yǎng)基 ? 以棉籽殼為主料，是一種應(yīng)用較廣泛的培養(yǎng)基。 ? （ 3）稻草培養(yǎng)基 ? 以稻草為主料，主要適于制作草菇、平菇和鳳尾菇等菌種。 ? （ 4）玉米芯、花生殼培養(yǎng)基 ? 以玉米芯、花生殼為主料的培養(yǎng)基，配方主要有： ? ①玉米芯 78％，麩皮或米糠 20％，蔗糖 1％，石膏粉 1％，料水比 1:。 ? ③ 花生殼 78％，麩皮或米糠 20％，蔗糖 1％，石膏粉 1％，料水比 1:。配方主要有 ? ①谷粒 98％，石膏粉 ％，蔗糖 ％； ? ②小麥或燕麥 98％，碳酸鈣 1％ , 石膏粉 1％； ? ③小麥或谷子 93％，木屑 5％，碳酸鈣或石膏粉 2％； ? ④玉米粒 70％，木屑 25％，麩皮 4％，石膏粉 1％； ? ⑤小麥粒 72％，棉籽殼 25％，黃豆粉 2％，石膏粉 1％。稻草、玉米芯、花生殼、谷粒等用前應(yīng)進行處理，稻草應(yīng)切成 2～ 3厘米小段浸于水中 1天，使其吸足水分后撈出瀝至不滴水（含水量約 65％）；玉米芯、花生殼先碾碎，然后放于 pH值為 10～ 11的石灰水中浸泡12小時，撈出用清水沖洗并瀝至不滴水；谷粒先放入水中浸泡，使其吸足水分，浸水時間因氣溫而定，一般天熱浸16小時，天冷浸 24小時，撈出用清水沖洗后，置沸水鍋中煮沸 15～ 20分鐘，至谷粒吸足水分但又不過分膨脹和開口為度，然后用清水冷至常溫，瀝去多余水分，剔除“破肚”。培養(yǎng)基配好后，即可分裝，一邊裝一邊振動并用木棒壓緊，使裝入的培養(yǎng)基上下松緊一致，裝至瓶肩為止，料面壓平，在培養(yǎng)基中間用圓錐形搗木打一洞，直到瓶底，有利菌絲蔓延。 ? 生產(chǎn)栽培種時，多采用塑料袋作為容器，高壓滅菌用聚丙烯塑料袋，常壓滅菌用聚乙烯塑料袋。袋口擦凈套塑料環(huán)，塞上棉塞，棉塞外可包扎牛皮紙或防水紙。滅菌時間根據(jù)滅菌方法和培養(yǎng)基材料的種類來決定，一般高壓滅菌壓力 ， 120分鐘；常壓滅菌在 98℃ ～ 100℃ 保持 6～ 8小時。 注意事項 ? 第一、木屑系指闊葉樹木屑，新鮮的和陳的均可。 ? 第二、米糠系指細米糠，不能用稻殼代替。 ? 第三、各種成分必須按配方準確稱取，不可隨意增減，更不可隨意添加一些抑菌劑。拌料加水后，各種微生物就開始活動，生長繁殖，因此，要求從加水拌料到分裝上鍋滅菌，時間不要超過 6小時，常壓滅菌上鍋后火力要猛，爭取在 4～ 6小時內(nèi)使鍋溫達到 100℃ ，時間長了會導(dǎo)致培養(yǎng)基酸敗。它包括病毒、立克次氏體、細菌、放線菌、酵母和霉菌等。就必須在一定范圍內(nèi)徹底殺滅空氣及物料、容器、工具等中的一切微生物。 一、物理滅菌 ? 指用高熱、輻射、過濾等手段除微生物的方法。這個方法適用于玻璃器皿、金屬工具等固體器皿的滅菌。 ? 通常有兩種滅菌法。如用此法超過 180℃ ，所滅紙張或棉花就會焦化，影響滅菌質(zhì)量。 ? 高壓蒸汽滅菌法： 高壓蒸汽的溫度可超過常壓下沸點（ 100℃ ）的溫度，一般 ℃ 。食用菌生產(chǎn)中往往用這種方法滅菌制備一、二級菌種用的培養(yǎng)基。另一排盡冷空氣法，可使鍋內(nèi)壓力升壓至 ,放氣 ,使壓力降至零 ,再關(guān)閉排氣閥 , 也可排盡冷空氣。其次，應(yīng)注意上升至要求壓力后，要保持一定時間，然后斷電或撤下熱源 ,待溫度降至零時再放汽開鍋 ,如果不這樣會造成滅菌不徹底或者容器內(nèi)液體噴出。 ? 紫外線滅菌 紫外線中波長為 2022～ 3000197。一般紫外線燈為 2537197。因此，調(diào)節(jié)紫外線照射的距離和時間，可以誘變育種，也可以殺菌。 二、化學滅菌 ? 酚類 ? 常用的石炭酸，又名苯酚。通常使用 3％～ 5％的水溶液作為噴霧劑處理無菌室（箱），或?qū)ζ餍到菹?，它對金屬無腐蝕作用，能殺死細菌芽孢而對真菌孢子殺傷作用不大。石炭酸殺菌原理：它能使細胞膜損害，使蛋白質(zhì)變性或沉淀。 ? 來蘇爾系用肥皂乳化的甲酚，它的殺菌效力比苯酚大 4倍，常用 3％～ 5％的溶液來消毒皮膚、桌面及用具。常用甲醛來消毒無菌室或箱等，每立方米空間用 10～ 15毫升甲醛熏蒸就可達到消毒的目的。甲醛的殺菌機理是：甲醛和菌體蛋白（包括酶）的氨基結(jié)合，使蛋白質(zhì)凝固變性。高濃度乙醇殺菌能力反而下降是因為高濃度乙醇遇到微生物細胞時，很快使細胞表面脫水，形成一層保護膜，乙醇不能滲透到細胞內(nèi)，也不能使蛋白質(zhì)凝固，所以高濃度乙醇反而殺菌效果差。乙醇能減低酚、甲醛等的殺菌效力，但能增強碘及升汞的殺菌效力。菌種分離時，常用乙醇作為表面消毒劑。一般可將原液稀釋 1倍，對器械或手、皮膚及不能遇熱的器具進行消毒。起殺菌作用的是熟石灰中的氫氧離子，它能水解蛋白質(zhì)和核酸，使微生物體的酶系和結(jié)構(gòu)受到損害，并能分解菌體中的糖類。生石灰遇水變成熟石灰。一般 1％～ 3％的石灰水溶液就可起到良好的殺菌作用。它們在離體條件下具有高度活性，對細菌沒有活性，主要對霉菌有抑制作用。一般用量為 ％～ ％，對人畜無害。 三、無菌操作及要點 ? 在嚴格的消毒滅菌條件下進行的菌種移植操作稱為無菌操作。 ? （ 2）菌種所暴露或通過的空間必須是無菌區(qū)。 ? （ 4）各種接種工具和菌種接觸前都應(yīng)該經(jīng)火焰灼燒滅菌，冷卻后再接種，以免燙死或燙傷菌種。 ? （ 6）每次接種的時間不宜過長，以免空氣中雜菌的基數(shù)不斷地積累，影響轉(zhuǎn)管、接種效果。 ? （ 8）不帶口罩操作時要盡量少說話為宜。 第四節(jié) 菌種分離 ? 通常采用的菌種分離方法有：孢子分離法、組織分離法和基內(nèi)菌絲分離法三種。孢子分離法是利用成熟子實體的有性孢子（擔孢子或子囊孢子），能自動從子實層中彈射出來的特性，在無菌條件下和適宜的培養(yǎng)基上，使孢子萌發(fā)成菌絲，獲得純種的一種方法。 二、組織分離法 ? 組織分離法是利用子實體組織來分離獲得純種的方法。采用組織分離法培養(yǎng)，操作簡便，取材廣泛，無論是幼子實體或成熟子實體，只要新鮮，即使取其菌柄也能分離培養(yǎng)成菌種。只是對于子實體小、薄及膠質(zhì)種類不太適用。把幼菇根部帶泥部分切除，置接種箱內(nèi)。 ? 對一些個體細小的傘菌子實體，如金針菇，可采用子實層作組織分離材料。然后開菌蓋或用解剖刀剖開菇蕾，露出白色菌褶，用接種針挑取 1— 2片菌褶，接種到斜面培養(yǎng)基上，在 23℃ 左右下培養(yǎng) 1周，菌絲就可長滿斜面。分離時無菌操作剖取尚未展開的耳片膠質(zhì)團內(nèi)部的組織塊，直接置于 PDA斜面上進行培養(yǎng)。 ? 菌核組織分離法 茯苓、豬苓、雷丸等的子實體不易采集，而它們的營養(yǎng)貯藏結(jié)構(gòu) —— 菌核，易獲得。分離時先把菌核表面洗凈，吸干帶入無菌箱內(nèi)，以 75％乙醇進行表面消毒后，用無菌解剖刀把菌核切開，取中間組織一小塊（黃豆大小），移入 PDA斜面上，于 25℃下培養(yǎng)。分離時，將菌索洗凈后用紗布吸干水分，置接種箱中，