生物技術制藥抗體制藥網載(編輯修改稿)
2025-02-12 18:31 本頁面
【文章內容簡介】 脾內免疫法即在麻醉下直接將 ～ 免疫。細胞抗原需 105個， 可溶性抗原需 10μg 。 體外免疫法用于不能采用體內免疫的情況下，如制備人源性單克隆抗體；免疫源性極弱，易引起免疫抑制。 優(yōu)點：需抗源量少，免疫期短，干擾因素少。 體外免疫法：用 4～ 8周齡 BALB/c 小鼠的脾臟制成單細胞懸液，再加入適當抗原使其濃度達 ～5μg/ml, 在 5% CO 37 C 下培養(yǎng)4～ 5天 ,再分離脾細胞 ,進行細胞融合。 o 2 o 二、細胞融合與雜交瘤細胞的 選擇性培養(yǎng) 細胞融合的方法： 脾細胞（ 1 10 ） 骨髓瘤細胞（ 2 10 ）混合 聚乙二醇誘導下融合， 2分鐘，然后用培養(yǎng)液將融合液緩慢稀釋。 8 7 用于細胞融合的骨髓瘤細胞應具有融合率高，自身不分泌抗體，所產生的雜交瘤細胞分泌抗體能力強，長期穩(wěn)定。 PEG相對分子量 4000，濃度為 50% 二甲基亞砜增加融合率。 細胞融合后可產生多種融合。 脾 — 脾、脾 — 瘤、瘤 — 瘤融合細胞。 選擇性培養(yǎng) : 培養(yǎng)基 為 HAT培養(yǎng)液。 次黃嘌呤 (H)氨甲喋呤 (A)胸腺嘧啶 (T)配制。 A阻斷 DNA合成。 三、篩選陽性克隆與克隆化 篩選陽性克隆常用檢測方法： 免疫酶技術、免疫熒光技術、放射免疫技術等。 克隆化是指單個細胞通過無性繁殖而獲得細胞集團的整個培養(yǎng)過程。 ELISA用于破傷風抗體的篩選 四、雜交
范文總結相關推薦
鄂ICP備17016276號-1