酶組織化學(xué)概論ppt課件(編輯修改稿)
2025-02-12 15:02 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 氮色素法的開展，某些用金屬 金屬鹽法不能證明的酶，現(xiàn)在能夠證明了。此法已被廣泛使用。 22 三、光鏡酶組織化學(xué)證明法 （三）色素形成法 （ pigment formation method) 這是一組 顯示酶定位的證明法 ，它與偶氮色素法不同，在酶的作用下，使無色的化學(xué)物質(zhì)在局部形成色素而沉著。這種方法統(tǒng)稱 色素形成法 。 方法 所顯示的酶 四唑鹽法 脫氫酶 靛酚藍(lán)法 氧化酶 靛蘭形成法（靛藍(lán)法） 磷酸酶、酯酶 聯(lián)苯胺色素法 過氧化物酶 黑色素形成法 DOPA氧化酶、酪氨酸酶 白色色素法 過氧化氫酶 23 四唑鹽法 tetrazolium method （ 1）定義： 在含有 四唑鹽 或 雙四唑鹽 的底物混合液中，在脫氫酶的作用下，從底物分離出來的 氫原子與 無色四唑鹽 或 雙四唑鹽 結(jié)合形成 紅色 或 藍(lán)色 的甲簪（ formazan） 或二甲簪（ difomazan）色素 。這種色素沉著于酶作用的所在部位因而得知酶的定位。該法主要證明各種 脫氫酶 。 24 （ 2）四唑鹽的種類 三苯四唑氯化物（ TTC） 藍(lán)四唑鹽（ BT） 新四唑鹽（ NT） 硝基藍(lán)四唑鹽（ NitroBT) 四氯四唑藍(lán)氯化物（ TNBT） 是脂溶性的，能共染組織細(xì)胞中的脂肪。 25 腎小管中的 SDH 心肌中的 LDH 26 靛酚藍(lán)法 indophenol blue method Nadi反應(yīng) ,是用于檢測 氧化酶 的方法 。 把二甲基 對 苯二胺和 а 萘酚加入底物混合液中 ， 由酶作用而釋放的氧與此二者結(jié)合 ， 形成靛酚藍(lán) ， 而顯示出酶的定位 。 有人使用的新的 Nadi法 ， 既以 4氨基 N、 N二甲基萘胺 （ AND） 代替二甲基 對 苯二胺 。 本法也適用于證明 細(xì)胞色素氧化酶和過氧化物酶 。 27 腎小管中的細(xì)胞色素氧化酶 28 本法主要是以 酯型吲哚酚化合物 為酶的底物，在酶的作用下，分解出 吲哚酚 ；在氧存在的情況下形成藍(lán)色靛藍(lán) ，于酶所在部位顯色。此法又稱吲哚酚法（ indoxyl method） 。 酯型吲哚酚化合物 : 磷酸吲哚酚 醋酸吲哚酚 丁酰吲哚酚 驗(yàn)證磷酸酶、酯酶等。 靛蘭形成法（靛藍(lán)法） indigo formation method: 29 腎間質(zhì)細(xì)胞中的酯酶 30 四、酶組織化學(xué)的基本條件 用組織化學(xué)方法在組織細(xì)胞內(nèi)證明酶，重要的是要具備三個條件： 第一：保存細(xì)胞結(jié)構(gòu)（ preservation of structure)。 第二：保存酶（ preservation of enzyme)。 第三：保存定位（ preservation of localization)。 31 （一）生物化學(xué)方面的要求 酶組織化學(xué)的基礎(chǔ)是組織化學(xué)，而化學(xué)反應(yīng)又是組織化學(xué)的基礎(chǔ)。所以化學(xué)反應(yīng)的各種條件和影響化學(xué)反應(yīng)的各種因素都要考慮到。 酶是一種催化劑，但其并不參與化學(xué)反應(yīng)本身，只是起到加強(qiáng)酶組織化學(xué)反應(yīng)，顯示出酶活性的高低的作用。影響酶活性的因素有多種， 如底物的濃度、反應(yīng)產(chǎn)物的強(qiáng)弱、溫度、 pH值和試劑質(zhì)量等 。同一種酶，在不同條件下，所顯示酶的活性可以相差懸殊。因此， 在進(jìn)行酶組織化學(xué)研究時，應(yīng)極其重視化學(xué)反應(yīng)的良好程度，嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件， 這樣才能對獲得的結(jié)果作出科學(xué)的判斷和分析。 32 （二）形態(tài)學(xué)方面的要求 盡可能保持組織細(xì)胞生活時的 形態(tài)和結(jié)構(gòu) 。 盡可能保持組織細(xì)胞生活時的 化學(xué)成分和酶的活性 。 染色法是已知的化學(xué)反應(yīng)，各種條件均可控制。 反應(yīng)產(chǎn)物是一種有色的沉著物， 顆粒要細(xì)，并能 保留在原位 。其顏 色深度與物質(zhì)含量或酶活性具有一 定量效關(guān)系。 顯示的可視物質(zhì)必須具有 穩(wěn)定性 ， 以利于反復(fù)觀察。 反應(yīng)產(chǎn)物要具有 特異性 。 腫瘤細(xì)胞 SDH：四唑鹽法 33 （三）酶組織化學(xué)的局限性 定位方面的局限性： 酶組織化學(xué)要求是使某一物質(zhì)在原位上顯示出來。但由于 吸附、彌散和溶解 等現(xiàn)象，其 定位的改變或假定位 是多見的，給分析結(jié)果帶來很大困難。在進(jìn)行酶組化染色反應(yīng)時，用恒冷箱切片法、控制孵育條件、溫度、 pH值和時間可防止反應(yīng)產(chǎn)物擴(kuò)散。 酶組化 大致定位 核仁、胞質(zhì)、 C器等 電鏡細(xì)胞化學(xué) 微細(xì)定位 C器的微細(xì)結(jié)構(gòu) 分子水平定位 34 影響酶定位的因素 必要條件 要求 底物 必須容易被水解 底物應(yīng)盡可能純 反應(yīng)產(chǎn)物 既不
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