天然藥物化學(xué)成分提取分離鑒定方法與技術(shù)色譜法(編輯修改稿)
2025-02-09 20:03 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 110 ℃ 3060min 氧 化 鋁 105 ℃110 ℃ 30min 26 操作技術(shù) ——點(diǎn)樣 定量微升毛細(xì)管 薄層點(diǎn)樣毛細(xì)管 ? 配 制 樣 品 的 溶劑 具 高 度 揮 發(fā) 性 和 盡 可 能 非 極 性 ， 否則易 使 斑 點(diǎn) 擴(kuò) 展 。 ? 采 用 多 次 點(diǎn) 加 法 ， 第 二 次 點(diǎn) 加 時(shí) 應(yīng) 待 前 一 次 點(diǎn) 加 的 溶劑 揮 發(fā) 后 再 進(jìn) 行 。 ? 點(diǎn) 樣 量 應(yīng) 適 中 ， 過(guò) 載 會(huì) 引 起 斑 點(diǎn) 拖 尾 ， 分 離 度 變 差 。 （1–5ul） 27 點(diǎn)樣示意圖 ? 樣品溶液的配制 ? 點(diǎn)樣 對(duì)照樣 反應(yīng)混合液樣 點(diǎn)樣直徑≤2mm ， 1cm≤點(diǎn)間距 ≤ 12cm 28 C、展開(kāi) ? 薄 層 色 譜 的 展 開(kāi) 方 式 有 上 行 、 下行 、 單向 、 雙向 、多次 、 徑 向 等 多 種 方 式 。 ? 多 數(shù) 采 用 直 線 形 上 行 展 開(kāi) ， 薄 層 板 水 平 角 度 以75? 為 最 佳 。 29 ? 展 開(kāi) 劑 要 接 觸 到 吸 附 劑下 沿 ， 但 切 勿 接 觸 到 樣點(diǎn)（ 左 右 高 度 ） 。 ? 蓋 上 蓋 子 ， 展 開(kāi) 。 ? 觀 察 展 開(kāi) 情 況 。 ? 取 出 薄 層 板 預(yù)飽和中 展開(kāi)中 30 預(yù)防 邊 緣 效應(yīng) 操作技術(shù)——顯色 顯色噴霧瓶 三用紫外燈 ? 本 身 帶 有 顏 色 ? 本 身 無(wú) 顏 色 ? 含 有 熒 光 劑 的 薄 層 板 有 色 斑 點(diǎn) 顯 色 劑 顯 色 暗 色 斑 點(diǎn) 觀 察 方 法 ： 日 光 、 熒 光 、 顯 色 。 31 ? 本 身 帶 有 熒 光 熒 光 斑 點(diǎn) 32 ? 定義：樣品經(jīng)色譜分離后 ， 某 成 分 從 原 點(diǎn) 至 該成 分 斑 點(diǎn) 中 心 的 距 離 與 從 原 點(diǎn) 至 展 開(kāi) 劑 前 沿 的距離的比值稱為該成分的比移值 （Rf 值 ） 。 原點(diǎn)至色譜斑點(diǎn)中心的距離 比移值 （Rf 值 ） ＝ 原點(diǎn)至展開(kāi)劑前沿的距離 33 操作技術(shù) ——測(cè)定比移值 Rf 值越大 ，化合 物的極 性？ 34 上 樣 量 大 ， 常用于制備分離 ， 是 分 離 天 然 化學(xué) 成 分 最 常 用 的 方 法 。 定義： 柱 色 譜 是 一 種 將分 離 材 料 裝 入 柱 狀 容 器 中,以 適 當(dāng) 的 洗 脫 劑 進(jìn) 行 洗 脫而 使 不 同 成 分 得 到 分 離 的色 譜 方 法 。 柱色譜* 35 ? 其原 理、吸 附劑及 洗脫劑 的選擇 與薄層 色譜法 相 同。 ? 操 作 步驟 ： ? 注 意 點(diǎn)： 上 柱的 樣 品須 經(jīng) 過(guò) 純 化 處理 （ 過(guò)濾 、萃 取 、脫 色 、沉 淀 等） 36 純化 裝柱 上樣 洗脫 1）裝柱 ? 實(shí) 驗(yàn) 室 常 用 的 柱 內(nèi) 徑 與 柱 長(zhǎng) 之 比通常為1:15 －1:20 。 ? 若柱粗而短 ， 則分離效果較差 。 ? 若柱過(guò)長(zhǎng)而細(xì) ， 分離效果雖好 ，但 流 速慢 ， 消耗 時(shí) 間太 長(zhǎng) 。 37 a 、 干法 b 、 濕法： 因濕法裝柱容易趕走硅膠內(nèi)的氣泡 ，故 一 般以 濕 法裝 柱 較好 。 38 2）上樣 39 a 、樣品易溶于 洗 脫 劑 ：濕 法 上 上樣 b 、樣品難溶于洗脫劑： 干法上樣 將樣品溶解于少量洗脫劑，制成高濃度溶液后慢慢上柱。 將 樣 品 溶 解 于 少 量 甲 醇 或 丙 酮 后 ， 均 勻 拌 入 適量 吸 附 劑 （1:21:3 ） ， 水 浴 揮 干 溶 劑 。 均勻平鋪至柱子頂端 。 ① 梯度洗脫：洗脫劑極性從小到大 。 ② 洗脫劑液面高度始終要高于柱面 。 ③ 控制洗脫劑流速為勻速 。 ④ 有色成分收集各色帶洗脫液 。 ⑤ 無(wú)色成分則采用等分收集 。 ⑥ 濃縮洗脫液 ， 薄層檢識(shí)后合并相同流分 。 混合 成分則進(jìn)一步分離 。 3）洗脫 40 植物色素分離圖示 41 42 分配 色譜法 是以液 體做固 定相， 用與其 不相 混 溶的 的 溶劑 做 流動(dòng) 相 的 液 液 色譜 法 。 一、基本原理 利用被分離成分在固定相和流動(dòng)相中的 溶解度不同。 易溶于流動(dòng)
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