血液制品去除／滅活病毒技術(shù)方法及驗(yàn)證指導(dǎo)原則(編輯修改稿)
2025-02-04 11:02 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 │ │ │炎（ EMC）病毒 │ ├──┼───┼───┼──────┼──────────────┤ │B19 │ DNA │ 無 │ 20 │犬細(xì)小病毒、豬細(xì)小病毒 │ └──┴───┴───┴──────┴──────────────┘ （二）方案設(shè)計(jì) 1．去除 /滅活病毒驗(yàn)證研究應(yīng)符合 GLP的要求。 2．研究影響去除 /滅活病 毒效果的參數(shù)（包括機(jī)械參數(shù)和理化參數(shù)）允許變化的幅度。 3．研究病毒滅活動(dòng)力學(xué)，包括病毒滅活速率和滅活曲線。 4．指示病毒滴度應(yīng)該盡可能高（病毒滴度應(yīng) ≥106/ml）。 5．加入的病毒與待驗(yàn)證樣品體積比不能高于 1∶ 9。 6．如可能，驗(yàn)證過程中每步取出的樣品應(yīng)盡快直接進(jìn)行病毒滴定，不做進(jìn)一步處理（如超離心、透析或保存、除去抑制劑或毒性物質(zhì)等）。如果樣品必須做進(jìn)一步處理，或不同時(shí)間取出的樣品要在同一時(shí)間進(jìn)行測定，應(yīng)考慮這些處理方法對病毒檢測結(jié)果的影響。 7．檢測方法可包括 蝕斑形成、細(xì)胞病變（如合胞體或病灶形成）、終點(diǎn)滴定或其他方法。這些方法應(yīng)該有適宜的靈敏度和可重復(fù)性，每一個(gè)取樣點(diǎn)應(yīng)取雙份樣品并設(shè)有對照以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。 8．如果制品的生產(chǎn)工藝中包含了兩步或兩步以上病毒去除 /滅活方法，應(yīng)該分別進(jìn)行 病毒滅活效果驗(yàn)證。 （三）觀察指標(biāo) 1．病毒方面 （ 1）去除 /滅活病毒滴度； （ 2）滅活病毒速率、滅活曲線。以列表和做圖形式報(bào)告驗(yàn)證結(jié)果。 2．病毒去除 /滅活各參數(shù)允許變化范圍 3．蛋白質(zhì)方面 （ 1）制品質(zhì)量應(yīng)符合《中國生物制品規(guī)程》或有關(guān)規(guī)定； （ 2）采用適當(dāng)方法測定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能活性的變化。如：制品比活性、 IVIG的 Fc 功能分析可了解蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)是否發(fā)生了變化；凝膠色譜法可檢測蛋白質(zhì)分子大小和形狀的變化；蛋白質(zhì)形狀變化可導(dǎo)致擴(kuò)散系數(shù)、沉降常數(shù)和粘度的改變； SDSPAGE，特別是等電聚焦和 PAGE結(jié)合（雙向電泳）也是檢測蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)變化的很好方法。 （ 3）如果采用新的去除 /滅活方法（包括更換使用已認(rèn)可的病毒滅活方法或國內(nèi)外未 曾采用過的病毒去除 /滅活方法），需對蛋白質(zhì)半 衰期和新免疫原性進(jìn)行研究。要求如下： 半衰期：用適宜動(dòng)物（如大鼠或家兔）和未經(jīng)病毒去除 /滅活的相同制品進(jìn)行半衰期比較； 新免疫原性：新免疫原性用來檢查蛋白質(zhì)較高級別結(jié)構(gòu)上的變化。這些變化不一定損 害蛋白質(zhì)功能，但是會引起受體免疫反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)室檢測新免疫原性是非常困難的?？捎媒?jīng)和未經(jīng)病毒滅活的蛋白分別免疫動(dòng)物（如家兔），所產(chǎn)生的抗體交叉用未經(jīng)和經(jīng)病毒滅活的蛋白結(jié)合。如果經(jīng)病毒滅活的蛋白抗體被未經(jīng)病毒滅活的蛋白完全結(jié)合，說明不含新抗原。由于不能保證人類免疫系統(tǒng)識別的表位與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物相同，因此推薦在 Ⅳ 期臨床（獲得生產(chǎn)文號后）開展是否有新抗原產(chǎn)生的研究。 （四）效果的判定 判斷病毒去除 /滅活的有效性須綜合考慮，不能僅以病毒去除 /滅活的量來確定。在確 定有效之前，必須考慮如下因素，審慎評價(jià)每次驗(yàn)證結(jié)果。 1．驗(yàn)證試驗(yàn)所選擇的病毒是否適宜，病毒驗(yàn)證的設(shè)計(jì)是否合理。 2．病毒降低量（ log10） ≥4 logs，表示該步驟去除 /滅活病毒有效。如因
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