酶分子修飾壓縮ppt課件(編輯修改稿)
2025-02-04 05:48 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 定性 ：一般來說，熱穩(wěn)定性有較大的提高。 ? 抗原性 ：比較公認(rèn)的是 PEG和人血清白蛋白在消除酶的抗原性上效果比較明顯。 ? 各類失活因子的抵抗力 ：修飾酶對(duì)蛋白酶、抑制劑均有一定的抵抗能力，從而提高其穩(wěn)定性。 ? 半衰期 ：一般在體內(nèi)的半衰期得到有效延長(zhǎng)。由于酶分子經(jīng)修飾后，增強(qiáng)對(duì)熱、蛋白酶、抑制劑等的穩(wěn)定性，從而延長(zhǎng)了在體內(nèi)的半衰期。 ? 最適 pH：大部分酶經(jīng)化學(xué)修飾后，酶的最適 pH發(fā)生了變化，這種變化在應(yīng)用研究上有時(shí)具有重要意義。修飾酶最適 pH更接近于生理環(huán)境，在臨床應(yīng)用上有較大意義。 ? Km的變化 ：大多數(shù)酶經(jīng)修飾后， Vm沒有明顯變化，但有些酶經(jīng)修飾后，Km值變大。 回本章目錄 側(cè)鏈基團(tuán)修飾的主要作用 ? 酶的結(jié)構(gòu)、特性和功能的影響。 ? ? 、增加酶的穩(wěn)定性、降低酶的抗原性、引起酶的催化特性和催化功能的改變 ? ? 大分子結(jié)合修飾的效果 ? 提高酶活力 —— 結(jié)合后酶空間構(gòu)象的改變使活性中心更有利于和底物結(jié)合，形成催化部位 ? 例如：用聚乙二醇修飾超氧物歧化酶，每分子核糖核酸酶與 ，可以使酶活力提高到原有酶活力的 ； ? 每分子胰凝乳蛋白酶與 11分子右旋糖酐結(jié)合，酶活力達(dá)到原有酶活力的 ? 增強(qiáng)酶的穩(wěn)定性 —— 空間結(jié)構(gòu)更為穩(wěn)定，活性中心得到保護(hù) 酶 半衰期 相對(duì)穩(wěn)定性 天然 SOD 6 min 1 右旋糖酐 SOD 7 h 70 Ficoll(低分子量 )–SOD 14 h 140 Ficoll(高分子量 )–SOD 24 h 240 聚乙二醇 SOD 35 h 350 ? 降低或消除酶的抗原性 —— 分子結(jié)構(gòu)的改變使抗體不能識(shí)別 ? 提高 抗蛋白酶的能力 ，延長(zhǎng)了酶在體內(nèi)的 半衰期從而提高了酶藥效。 三、化學(xué)修飾方法的幾個(gè)問題 決定化學(xué)修飾成敗的關(guān)鍵是修飾的專一性，盡量少破壞必需基團(tuán)，得到高的酶活力回收。為此，有時(shí)需要通過反復(fù)試驗(yàn)來確定。其中： ? 對(duì)酶性質(zhì)的了解： 活性部位、穩(wěn)定條件、反應(yīng)最佳條件及側(cè)鏈基團(tuán)性質(zhì)等； ? 選擇修飾劑考慮： 1）分子量、修飾劑鏈長(zhǎng)和對(duì)蛋白吸附性； 2）修飾劑上反應(yīng)基團(tuán)的數(shù)目及位置； 3）修飾劑上反應(yīng)基團(tuán)的活化方法和條件（一般要求較大分子量、良好的生物相容性和水溶性、分子表面有較多反應(yīng)活性基團(tuán)）； ? 選擇酶反應(yīng)條件要注意： 1）反應(yīng)體系的溶劑性質(zhì)、鹽濃度、 PH、溫度、時(shí)間； 2）酶與修飾劑的比例。 參考：酶工程 (一 )、試劑的選擇 — 要根據(jù)修飾目的選擇 例如對(duì)氨基修飾可有幾種情況 —— 修飾所有氨基而不修飾其它基團(tuán)； 僅修飾 ?氨基； 修飾暴露的或反應(yīng)性高的氨基； 修飾具有催化活性的氨基； 用于修飾酶活性部位氨基酸殘基的試劑應(yīng)具備： ?選擇性 地與一個(gè)氨基酸殘基反應(yīng)； ?反應(yīng)在酶蛋白 不變性 條件下進(jìn)行； ?修飾反應(yīng)的 程度 能 簡(jiǎn)單測(cè)定 ； (二 )、反應(yīng)條件的選擇 ?不造成蛋白質(zhì)的不可逆變性（通過對(duì)照實(shí)驗(yàn)）； ?有利于專一性修飾（小心控制條件，盡可能在酶蛋白特定構(gòu)象不變或少變的情況下進(jìn)行）； ?溫度、 pH、反應(yīng)介質(zhì)和緩沖液； 四、酶化學(xué)修飾的應(yīng)用 在醫(yī)藥方面： 化學(xué)修飾可以提高醫(yī)用酶的穩(wěn)定性，延長(zhǎng) 它在體內(nèi)半衰期，抑制免疫球蛋白的產(chǎn)生，降低免疫原性 和抗原性。 在生物技術(shù)領(lǐng)域： 化學(xué)修飾酶能夠提高酶對(duì)熱，酸，堿 和有機(jī)溶劑的耐性，改變酶的底物專一性和最適 pH等酶學(xué) 性質(zhì)。 在酶結(jié)構(gòu)功能研究中： ，如酶的活性中心研究； ； 。 五、酶蛋白化學(xué)修飾的局限性 相對(duì)的 ，很少有對(duì)某一氨基酸側(cè)鏈絕對(duì)專一的化學(xué)修飾劑。 構(gòu)象或多或少都有一些改變 ，因此這種構(gòu)象的變化將妨礙對(duì)修飾結(jié)果的解釋。 只能在具有極性的氨基酸殘基側(cè)鏈上進(jìn)行 ，目前還不能用化學(xué)修飾的方法研究非極性氨基酸殘基在酶結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系中的作用。 信息，如某一氨基酸殘基被修飾后，酶活力完全喪失，說明該殘基是酶活性所“必需”的，為什么是必需的，還得用 X射線和其他方法來確定。因此化學(xué)修飾法研究酶結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系尚
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