昆蟲桿狀病毒載體ppt課件(編輯修改稿)
2025-02-04 04:46 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 置于 桿狀病毒啟動子之下 , 兩端分別為Tn7的左右端。以其 轉(zhuǎn)化 含 Bacmid的 ，由輔助質(zhì)粒提供反式作用發(fā)生 轉(zhuǎn)座 ，而將外源基因轉(zhuǎn)到 Bacmid的attTn7位置。 Bacmid ?在 Bacmid 中，外源基因被核多角體啟動子控制，并包含了多種抗性基因及 LacZ 缺失標記，極大地方便了重組病毒的篩選及鑒定。這種重組了外源基因的 Bacmid轉(zhuǎn)染的昆蟲細胞，可得到 100%陽性重組病毒 。 ?操作簡單方便，只需 1 周即可完成重組病毒載體的構(gòu)建。 Bacmid ?由于我國有養(yǎng)蠶業(yè)，還可在 AcMNPV BactoBac表達系統(tǒng)的基礎(chǔ)上進行改造，構(gòu)建能夠應(yīng)用于家蠶的 BmNPV BactoBac 表達系統(tǒng)，這將大大減少傳統(tǒng)昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)表達外源重組蛋白所需時間，極大地提高了工作效率。還能夠解決培養(yǎng)昆蟲細胞成本高，難于規(guī)?；a(chǎn)等問題。 ?重組率 100%、操作簡便、 1 周完成重組、全部操作都在細菌中進行，取名為 BactoBac 表達系統(tǒng) 昆蟲細胞宿主 ?昆蟲細胞在生物學、醫(yī)學、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域中被作為非常重要的研究工具。 ?目前全世界建立的昆蟲細胞系有 800 多株，分別來源于鱗翅目、雙翅目、鞘翅目、蜚蠊目、直翅目、膜翅目、同翅目和半翅目 8 個目的 170 余種昆蟲，其中具有實際應(yīng)用的細胞系大部分來自 鱗翅目 和 雙翅目 。 ?以昆蟲桿狀病毒為載體的昆蟲細胞可成功、高效地表達外源基因，生產(chǎn)具有重要藥用價值和具備天然活性的重組蛋白。因此，在眾多昆蟲細胞系中 鱗翅目 昆蟲細胞系應(yīng)用最為廣泛。 昆蟲細胞宿主 ?昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)既可在 昆蟲培養(yǎng)細胞 中，又可在 昆蟲和蛹 內(nèi)進行表達。究竟在昆蟲體內(nèi)還是在培養(yǎng)細胞中表達外源基因，可根據(jù)外源蛋白的性質(zhì)及其用途、表達水平高低、分離純化難易、純化要求高低等因素來考慮。 ?然而，對于常規(guī) 小量 及 高純度 的蛋白質(zhì)生產(chǎn)而言，利用 體外培養(yǎng) 的昆蟲細胞來進行表達是首選途徑。 ?相對于已知的上百萬種昆蟲以及昆蟲細胞系的廣泛用途來說，已經(jīng)建立的細胞系還遠遠不夠，仍需建立更多的昆蟲細胞系以滿足實際需要。 Company Logo 安全性高 基因容量大 表達水平高 能進行翻譯后的加工修飾 重組蛋白具有完整的生物學功能 相對其他表達系統(tǒng)它具有以下幾個方面的特點： ① 重組蛋白具有完整的生物學功能 ：桿狀病毒表達系統(tǒng)可為高表達的外源蛋白在細胞內(nèi)進行正確折疊、二硫鍵的搭配及寡聚物的形成提供良好的環(huán)境，可使表達產(chǎn)物在結(jié)構(gòu)及功能上接近天然蛋白。 利用昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)來表達富含二硫鍵的一些具有神經(jīng)毒性的生物毒素肽將是一個最佳的選擇。 ② 能進行翻譯后的加工修飾 ：桿狀病毒表達系統(tǒng)具有對蛋白質(zhì)完整的翻譯后加工能力，包括糖基化、磷酸化、?；?、信號肽切除及肽段的切割和分解等，修飾的位點與天然蛋白在細胞內(nèi)的情況完全一致。 對比實驗證明，在昆蟲細胞發(fā)生的糖基化位點與哺乳動物細胞中完全一致，
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