昆蟲桿狀病毒載體ppt課件-在線瀏覽
2025-02-25 04:46本頁面
【正文】 護作用 ，可使之保持穩(wěn)定和感染能力。 理想的外源基因插入位點 桿狀病毒載體 ?載體重組原理：原理是人為將桿狀病毒多角體蛋白兩翼序列的同源序列引入含外源基因的質(zhì)粒載體中，通過同源重組方式來實現(xiàn)外源基因?qū)Σ《径嘟求w蛋白基因的替換。 ?多克隆位點： DNA載體序列上人工合成的一段序列，含有多個限制內(nèi)切酶識別位點。 ?共轉(zhuǎn)染： 物理上不相連的基因被整合到同一整合序列并在同一轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)表達的現(xiàn)象。 ⑤ 將要表達的外源基因 插入 其啟動子下游 ⑥ 與野生型 AcNPV DNA 共轉(zhuǎn)染 昆蟲細(xì)胞 ⑦ 通過兩側(cè)同源邊界區(qū)在體內(nèi)發(fā)生 同源重組 ，使多角體蛋白基因被外源基因取代。這種表型在進行常規(guī) 空斑測定 時，可同野生型具有多角體的病毒空斑區(qū)別開來， 這就是最初的篩選重組病毒的方式。 桿狀病毒載體 ?為此，經(jīng)過不斷探索，在重組桿狀病毒的篩選與鑒定方面取得了很大改進?？焖?、高效產(chǎn)生重組 AcMNPV 病毒。 ?根據(jù) F因子載體原理，用類似于酵母體內(nèi)重組的方法， 構(gòu)建 了一種新桿狀病毒穿梭載體 Bacmid。 ? Bacmid 含有 F因子復(fù)制子 ( 可在大腸桿菌中復(fù)制 ) 、卡那霉素抗性基因及 Tn7 轉(zhuǎn)座位點 attTn7。以其 轉(zhuǎn)化 含 Bacmid的 ，由輔助質(zhì)粒提供反式作用發(fā)生 轉(zhuǎn)座 ，而將外源基因轉(zhuǎn)到 Bacmid的attTn7位置。這種重組了外源基因的 Bacmid轉(zhuǎn)染的昆蟲細(xì)胞，可得到 100%陽性重組病毒 。 Bacmid ?由于我國有養(yǎng)蠶業(yè)，還可在 AcMNPV BactoBac表達系統(tǒng)的基礎(chǔ)上進行改造，構(gòu)建能夠應(yīng)用于家蠶的 BmNPV BactoBac 表達系統(tǒng)，這將大大減少傳統(tǒng)昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)表達外源重組蛋白所需時間，極大地提高了工作效率。 ?重組率 100%、操作簡便、 1 周完成重組、全部操作都在細(xì)菌中進行，取名為 BactoBac 表達系統(tǒng) 昆蟲細(xì)胞宿主 ?昆蟲細(xì)胞在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域中被作為非常重要的研究工具。 ?以昆蟲桿狀病毒為載體的昆蟲細(xì)胞可成功、高效地表達外源基因，生產(chǎn)具有重要藥用價值和具備天然活性的重組蛋白。 昆蟲細(xì)胞宿主 ?昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)既可在 昆蟲培養(yǎng)細(xì)胞 中，又可在 昆蟲和蛹 內(nèi)進行表達。 ?然而，對于常規(guī) 小量 及 高純度 的蛋白質(zhì)生產(chǎn)而言，利用 體外培養(yǎng) 的昆蟲細(xì)胞來進行表達是首選途徑。 Company Logo 安全性高 基因容量大 表達水平高 能進行翻譯后的加工修飾 重組蛋白具有完整的生物學(xué)功能 相對其他表達系統(tǒng)它具有以下幾個方面的特點： ① 重組蛋白具有完整的生物學(xué)功能 ：桿狀病毒表達系統(tǒng)可為高表達的外源蛋白在細(xì)胞內(nèi)進行正確折疊、二硫鍵的搭配及寡聚物的形成提供良好的環(huán)境，可使表達產(chǎn)物在結(jié)構(gòu)及功能上接近天然蛋白。 ② 能進行翻譯后的加工修飾 ：桿狀病毒表達系統(tǒng)具有對蛋白質(zhì)完整的翻譯后加工能力，包括糖基化、磷酸化
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