昆蟲(chóng)桿狀病毒載體ppt課件-閱讀頁(yè)
2025-01-23 04:46本頁(yè)面
【正文】 、?；⑿盘?hào)肽切除及肽段的切割和分解等，修飾的位點(diǎn)與天然蛋白在細(xì)胞內(nèi)的情況完全一致。這種不一致對(duì)不同目的蛋白的活性影響不同，所以昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)還可作為一個(gè)研究糖基化對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能影響方面的理想模型。 雖然目前科研工作者大都是在細(xì)胞培養(yǎng)條件下進(jìn)行表達(dá)外源基因，當(dāng)條件成熟時(shí)需要大量制備某類外源蛋白時(shí)，最好采用昆蟲(chóng)幼蟲(chóng)或蛹。 利用 BmNPV 載體在家蠶幼蟲(chóng)中成功表達(dá)出重組蜘蛛牽引絲蛋白，表達(dá)量高達(dá)每個(gè)昆蟲(chóng)活體 6mg。因此，通過(guò)昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)可利用昆蟲(chóng)活體大規(guī)模生產(chǎn)各種重組蛋白。 DNA 復(fù)制后組裝在桿狀病毒的毒粒內(nèi)，由于毒粒具有較大的柔韌性，能包裝較大的基因片段，可表達(dá)非常大( 100kb) 的外源性基因。但目前尚無(wú)實(shí)驗(yàn)得知桿狀病毒所能容納的外源基因長(zhǎng)度的上限。根據(jù)設(shè)計(jì)需要既可采用不同的重組桿狀病毒同時(shí)感染細(xì)胞的形式，也可在同一桿狀病毒載體上同時(shí)克隆多個(gè)外源基因，其表達(dá)產(chǎn)物之間可有蛋白質(zhì)的相互作用或加工形成具有活性的異源二聚體或多聚體。因此對(duì)細(xì)胞的生理影響較哺乳類病毒載體要小，同時(shí)實(shí)驗(yàn)操作者的自身安全也比較有保障。最新研究發(fā)現(xiàn)， AcMNPV 病毒作為哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因轉(zhuǎn)移載體，也可以將外源基因?qū)氩溉閯?dòng)物的細(xì)胞，如人的肝細(xì)胞。 應(yīng)用 產(chǎn)業(yè) 基礎(chǔ)研究 醫(yī)用疫苗和藥物 ? 昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)廣泛應(yīng)用于藥物研發(fā)、疫苗生產(chǎn)、重組病毒殺蟲(chóng)劑等眾多領(lǐng)域中。成功表達(dá)出具有藥用價(jià)值的蛋白質(zhì)又可用于藥物研發(fā)和疫苗生產(chǎn)。 ?實(shí)現(xiàn)這一計(jì)劃的前提是要生產(chǎn)幾萬(wàn)種蛋白質(zhì) ，這就要求蛋白質(zhì)表達(dá)系統(tǒng)提供新的技術(shù)，諸如：通過(guò)簡(jiǎn)單的操作，生產(chǎn)各種活性形式的蛋白質(zhì)簡(jiǎn)化操作過(guò)程，縮短從基因生產(chǎn)蛋白質(zhì)的時(shí)間以簡(jiǎn)便的操作，同時(shí)生產(chǎn)許多種蛋白質(zhì)。 ? 日本片倉(cāng)公司在這方面進(jìn)行了卓有成效的探索導(dǎo)入 Invitrogen公司的 GATEWAY系統(tǒng) ，利用 BactoBac系統(tǒng)的載體，通過(guò)單一的 LR Clonase就能同時(shí)構(gòu)建各種帶目的基因的 BEVS質(zhì)粒轉(zhuǎn)移載體；用缺失增殖所必須的線型化病毒 DNA、含缺失增殖所必需基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)移載體和外源基因同時(shí)感染蠶蛹，通過(guò)此法，不用篩選就能在短期內(nèi)獲得正確的重組病毒和目的蛋白，由于使用的是蠶蛹，這種技術(shù)還可以自動(dòng)化操作。 ?盡管如此，臨床試驗(yàn)亦證明了昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)來(lái)源的重組蛋白對(duì)人是安全的。國(guó)內(nèi)口服重組昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)多膚藥物已有開(kāi)發(fā)，正進(jìn)人藥物審批階段，相信昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)重組多膚生產(chǎn)醫(yī)用藥物會(huì)有較好的前景。 ?昆蟲(chóng)桿狀病毒具有宿主專一、致病力強(qiáng)、傳播快、無(wú)殘留、無(wú)抗藥性、對(duì)脊椎動(dòng)物和植物安全、不易引起廣泛規(guī)模的生態(tài)平衡的破壞等特點(diǎn)。實(shí)踐表明，生物殺蟲(chóng)劑與化學(xué)殺蟲(chóng)劑相比，具有殺蟲(chóng)速度慢、殺蟲(chóng)譜窄、成本高等缺點(diǎn)。為此，科研人員通過(guò)基因工程方法改造桿狀病毒，不僅可以克服野生型病毒的固有缺點(diǎn)，而且為擴(kuò)大病毒殺蟲(chóng)功能提供了潛在可能。 33 (1):146150 ? 郭廣君 ,呂素芳 ,王榮富 . 外源基因表達(dá)系統(tǒng)的研究進(jìn)展 . 科學(xué)技術(shù)與工程 ,2022,6(5):582592
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