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昆蟲(chóng)桿狀病毒載體ppt課件-文庫(kù)吧資料

2025-01-14 04:46本頁(yè)面
  

【正文】 高水平的表達(dá),最高可使目的蛋白的量達(dá)到細(xì)胞總蛋白的 50%。 對(duì)比實(shí)驗(yàn)證明,在昆蟲(chóng)細(xì)胞發(fā)生的糖基化位點(diǎn)與哺乳動(dòng)物細(xì)胞中完全一致,但修飾的寡糖種類(lèi)卻不完全一樣。 利用昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)來(lái)表達(dá)富含二硫鍵的一些具有神經(jīng)毒性的生物毒素肽將是一個(gè)最佳的選擇。 ?相對(duì)于已知的上百萬(wàn)種昆蟲(chóng)以及昆蟲(chóng)細(xì)胞系的廣泛用途來(lái)說(shuō),已經(jīng)建立的細(xì)胞系還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠,仍需建立更多的昆蟲(chóng)細(xì)胞系以滿(mǎn)足實(shí)際需要。究竟在昆蟲(chóng)體內(nèi)還是在培養(yǎng)細(xì)胞中表達(dá)外源基因,可根據(jù)外源蛋白的性質(zhì)及其用途、表達(dá)水平高低、分離純化難易、純化要求高低等因素來(lái)考慮。因此,在眾多昆蟲(chóng)細(xì)胞系中 鱗翅目 昆蟲(chóng)細(xì)胞系應(yīng)用最為廣泛。 ?目前全世界建立的昆蟲(chóng)細(xì)胞系有 800 多株,分別來(lái)源于鱗翅目、雙翅目、鞘翅目、蜚蠊目、直翅目、膜翅目、同翅目和半翅目 8 個(gè)目的 170 余種昆蟲(chóng),其中具有實(shí)際應(yīng)用的細(xì)胞系大部分來(lái)自 鱗翅目 和 雙翅目 。還能夠解決培養(yǎng)昆蟲(chóng)細(xì)胞成本高,難于規(guī)?;a(chǎn)等問(wèn)題。 ?操作簡(jiǎn)單方便,只需 1 周即可完成重組病毒載體的構(gòu)建。 Bacmid ?在 Bacmid 中,外源基因被核多角體啟動(dòng)子控制,并包含了多種抗性基因及 LacZ 缺失標(biāo)記,極大地方便了重組病毒的篩選及鑒定。 ?轉(zhuǎn)移載體中,外源基因 置于 桿狀病毒啟動(dòng)子之下 , 兩端分別為T(mén)n7的左右端。該載體可像質(zhì)粒一樣在大腸桿菌中生長(zhǎng),又對(duì)鱗翅目昆蟲(chóng)細(xì)胞具有感染性。取桿狀病毒 ( baculovirus) 和質(zhì)粒 ( plasmid) 的英文字頭字尾命名為 Bacmid,即桿狀病毒質(zhì)粒之意。 ?具體方法有以下幾種: 基因 基因 Bacmid ? Luckow 等開(kāi)發(fā)。 ?由于重組效率較低 ( 0. 1%~ 1%) ,表型差別不顯著,應(yīng)用上有一定的困難。 桿狀病毒載體 ?由于 多角體基因 被破壞,則不能形成多角體。 桿狀病毒載體 ① 將極晚期基因 ( 如多角體基因及其邊界區(qū) ) 克隆 入細(xì)菌的質(zhì)粒中 ② 消除 其編碼區(qū)和不合適的酶切位點(diǎn) ③ 保留 其 5c端對(duì)高效表達(dá)必需的調(diào)控區(qū) ④ 在下游 引入 合適的酶切位點(diǎn)供外源基因的插入,即得到 轉(zhuǎn)移載體 。能為外源 DNA提供多種可插入的位置或插入方案。 ?由于桿狀病毒分子質(zhì)量約為 134kb,不能利用 多克隆位點(diǎn)(酶切連接)進(jìn)行基因重組,只能利用桿狀病毒和帶有外源基因的 質(zhì)粒載體 進(jìn)行 共轉(zhuǎn)染 (轉(zhuǎn)移載體的介導(dǎo))。 ? P10 蛋白 為另一類(lèi)高效表達(dá)的極晚期蛋白,也是一類(lèi)病毒復(fù)制 非必需成分 ,可在細(xì)胞中形成纖維狀物質(zhì),可能與 細(xì)胞溶解 有關(guān)。 桿狀病毒載體 ?現(xiàn)已知基因組全序列的桿狀病毒僅有 7 種 : ? 苜蓿丫紋夜蛾核型多角體病毒 ( AcMNPV ) ? 家蠶核多角體病毒 ( BmNPV ) ? 黃杉毒蛾多核衣殼核多角體病毒 ( OpMNPV ) ? 舞毒蛾多核衣殼核多角體病毒 ( LdMNPV ) ? 甜菜夜蛾多核衣殼核多角體病毒 ( SeMNPV) ?
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