原料藥質(zhì)量研究(上海藥檢所)(編輯修改稿)
2025-02-01 22:19 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 出，加大點(diǎn)樣量。 (4) 主斑點(diǎn)如超載、“斷腰 ”，可適當(dāng)減小點(diǎn)樣量。 (5) 顯色劑盡可能新鮮配制。 (6) 觀測(cè)時(shí)，建議增加翻轉(zhuǎn)觀測(cè)，即透過(guò)玻璃面觀測(cè)。 高效液相色譜法測(cè)定 有關(guān)物質(zhì) (1) 每批樣品配制 1份，即可。 (2) 多批樣品同時(shí)檢測(cè)時(shí)，選用粉末量最少的樣品稀釋制成自身對(duì)照溶液即可，絕對(duì)無(wú)需每一樣品均稀釋成自身對(duì)照溶液。 (3) 對(duì)照溶液連續(xù)進(jìn)樣 3針，計(jì)算主峰峰面積的RSD，小于 %即認(rèn)為儀器穩(wěn)定、積分無(wú)誤。取峰面積均值用于樣品雜質(zhì)峰比較。 高效液相色譜法測(cè)定 有關(guān)物質(zhì) (4) 測(cè)定空白溶劑（梯度洗脫時(shí)一定要先行測(cè)定） (5) 每一樣品進(jìn)樣一針，對(duì)雜質(zhì)峰進(jìn)行積分。積分時(shí)注意事項(xiàng)： ? 最小峰面積：設(shè)定為對(duì)照溶液主峰面積的 1/101/50（講述原理） ? 斜率與峰寬：與對(duì)照溶液積分參數(shù)相同。 ? 技巧：對(duì)照溶液稀釋后，若主峰面積呈線性（一般均呈線性），歸一化法計(jì)算結(jié)果與自身對(duì)照法測(cè)定結(jié)果基本一致（相差在 %以內(nèi)），可用歸一化直接觀測(cè)。 一、線性試驗(yàn) 主成分含量測(cè)定 以測(cè)定濃度為 100% ，50%~120%之間選取 5個(gè)點(diǎn)即可。 溶出（釋放）度測(cè)定 以釋放量的 10%～120%間選取 5個(gè)點(diǎn)即可。 雜質(zhì)含量用雜質(zhì)對(duì)照品準(zhǔn)確測(cè)定 以雜質(zhì)限度為 100% ， 50%~120%之間選取 5個(gè)點(diǎn)即可。 測(cè)定結(jié)果 ： 1）闡述如何看待截距和斜率、如何應(yīng)用。 2）誤差在哪里，應(yīng)用時(shí)的注意事項(xiàng)。 3）為什么沒(méi)有不成線性的？通常 C、 H、 O、N結(jié)構(gòu)，紫外監(jiān)測(cè)器決定。 個(gè)別化學(xué)鍵所致。梯度洗脫時(shí)，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)不成線性。 4）都成線性、為何還要做？最小二乘法的原理知曉。 何種情況不呈線性？ 唑 來(lái) 磷 酸 結(jié) 構(gòu) 式 不呈線性情況 ： 1）分子結(jié)構(gòu)式怪異，如唑來(lái)膦酸。 2）梯度洗脫，所以此時(shí)規(guī)定柱效無(wú)意義。 3）主成分在色譜柱上幾乎無(wú)保留，保留時(shí)間為“死時(shí)間”（如氫溴酸右美沙芬的測(cè)定） 4）濃度過(guò)高時(shí)、檢測(cè)器或色譜柱超載。 引申使用： 1）有關(guān)物質(zhì)測(cè)定 歸一化法和自身對(duì)照法的相互妙用。 2）緩釋制劑溶出度測(cè)定，對(duì)照品濃度設(shè)定為中間濃度。舉例說(shuō)明。 3）回收率試驗(yàn)為何做 80%~120%即可？亦及樣品濃度與對(duì)照品濃度接近到何等程度的理解。 4）國(guó)內(nèi)只注重相關(guān)系數(shù)，不注重截距。 二、精密度試驗(yàn) 重復(fù)性試驗(yàn)：連續(xù)進(jìn)樣 6次。 中間精密度試驗(yàn)和重現(xiàn)性試驗(yàn)通過(guò)“耐用性試驗(yàn)中的溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)”來(lái)體現(xiàn)。 濃度極低時(shí)才會(huì)不理想，加大進(jìn)樣量。 色譜峰形極為重要，對(duì)稱性、柱效等參數(shù)。加大柱溫、增加流動(dòng)相中有機(jī)相比例，使被測(cè)物質(zhì)峰盡快出峰。 三、準(zhǔn)確度試驗(yàn) 用回收率來(lái)衡量 作法：在 80%~120%間選擇 3點(diǎn)或 5點(diǎn)，原因是由外標(biāo)一點(diǎn)法決定的。 已知雜質(zhì)、且有雜質(zhì)對(duì)照品的，可采用加入法，即加樣回收率來(lái)評(píng)價(jià)。 一般情況下，只要空白輔料無(wú)干擾，回收率均是良好的！ 四、專屬性 有關(guān)物質(zhì)為主，其他檢測(cè)項(xiàng)目（含量）基本上均參照有關(guān)物質(zhì)。 有關(guān)物質(zhì)的驗(yàn)證，采用中間體和降解產(chǎn)物（確認(rèn)結(jié)構(gòu)后人工合成）來(lái)驗(yàn)證與主成分的分離。 詳述強(qiáng)破壞試驗(yàn)的宗旨與內(nèi)涵！ ● 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用溶液配制法 在 100％濃度的主成分溶液中加入 1%濃度的雜質(zhì)對(duì)照品，以模擬樣品中有可能存在的狀態(tài)。 介紹配制方法： 先配制雜質(zhì)貯備液，再用供試品溶液（或濃的對(duì)照品溶液）來(lái)稀釋，簡(jiǎn)便、易行！ 存在問(wèn)題： 配制相同濃度，測(cè)定樣品時(shí)，主成分峰驟然加大，將雜質(zhì)峰覆蓋。 專屬性試驗(yàn)驗(yàn)證圖譜 ★ 強(qiáng)破壞試驗(yàn)的目的 驗(yàn)證藥品在遭遇了極端的氣候環(huán)境條件下產(chǎn)生的雜質(zhì)，在所建立的色譜條件下是否能夠分離、測(cè)定。 破壞追求的目標(biāo)：可產(chǎn)生降解產(chǎn)物的條件下，主成分保留70~80%量。 同時(shí)采用 DAD 檢測(cè)主峰純度，驗(yàn)證其中不含雜質(zhì)峰。 ★ 保留時(shí)間的設(shè)定 經(jīng)過(guò)上述方法學(xué)認(rèn)證后，確定供試品溶液的保留時(shí)間，通常以洗脫出全部雜質(zhì)和經(jīng)強(qiáng)力破壞試驗(yàn)出的雜質(zhì)，規(guī)定至主成分保留時(shí)間的幾倍為止。 ★ 強(qiáng)力破壞試驗(yàn)（世界衛(wèi)生組織公布的最新方法） ※ 熱破壞 取原料，加溶劑配成 1:1溶液后，在 60℃ 放置 1~10天。 ※ 高濕破壞 取原料固體適量，放置在 75%濕度下 1~10天。 ※ 強(qiáng)酸破壞 取原料適量，用 :1 溶液后，放置 110天。 ※ 強(qiáng)堿破壞 取原料適量，用 2:1溶液后，放置 110天。 ※ 氧化破壞 取原料適量，用 3%過(guò)氧化氫溶液配制成 1:1溶 液后，放置 13天。 ※ 光解破壞 取原料適量，置紫外燈下放置 110天。 ※ 金屬離子破壞 加入 + 或 Cu2+。 四、檢測(cè)限 ● 信噪比的三倍 —— 純屬“紙上談兵”，實(shí)際測(cè)定中根本用不上。 ● 是相對(duì)值，不是絕對(duì)值。是相對(duì)于供試品溶液濃度的多少分之一而言，一般至少要在5000倍以上。 (1)最大進(jìn)樣量 (2) 有關(guān)物質(zhì)測(cè)定 供試品溶液濃度、 (3)含量測(cè)定濃度 (4)有關(guān)物質(zhì)測(cè)定 自身稀釋對(duì)照溶液 濃度 (5)最低檢出限 五者間的
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