【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 相同的 Rf值，不同成分則有不同的 Rf值，因而各種混合物可達(dá)到彼此被分離的目的。然后用茚三酮顯色，與標(biāo)準(zhǔn)氨基酸進(jìn)行對(duì)比，鑒別各種氨基酸種類，從顯色斑點(diǎn)顏色的深淺可以大致確定其含量。 ? Rf = a / b a b 樣點(diǎn) 溶劑前沿 點(diǎn)樣原點(diǎn) ? 優(yōu)點(diǎn)： ① 展開(kāi)時(shí)間短，一般在 20— 30分鐘，展開(kāi)距離通常只需 10 cm，且分離效果好。 ② 層析后得到的斑點(diǎn)小而清晰。 ③ 能夠使用多種顯色劑。 ④ 點(diǎn)樣量少，靈敏度高。（比紙層析高 10— 100倍） 精確到 。 ⑤ 也可用于大量分離＞ 500 mg，作為樣品制備層析。 ? 缺點(diǎn)： Rf值重現(xiàn)性比紙上層析差 。 ? 分類：按層析的原理可分為：吸附 、 分配 、 離子交換 、 凝膠等 。 （三）操作方法： ① 薄層板制備 ② 樣品液制備 ③ 點(diǎn)樣：距薄板底端 2cm處，用針畫(huà)一標(biāo)記作為 原點(diǎn)。再以點(diǎn)樣距扳子寬窄可點(diǎn)幾個(gè)點(diǎn)同時(shí) 展開(kāi)，點(diǎn)與點(diǎn)之間間隔 1～ 2cm。 、微量吸管或微量注射器。注 意要等一個(gè)點(diǎn)干了再點(diǎn)另一個(gè)點(diǎn)。 ф3 mm 濾紙片，浸入樣液，埋到 板子上先挖好一個(gè)小洞穴。 ④ 展開(kāi)：點(diǎn)樣完了 ， 放入密閉容器中 （ 展開(kāi)槽 ） ，傾斜一定角度 10～ 30176。 ， 下端浸入展開(kāi)劑 1cm，千萬(wàn)別讓溶劑浸過(guò)了樣點(diǎn) 。 到離頂端一部分 ，取出樣板 、 晾干 、 顯色 。 ：主要是低沸點(diǎn)的 2～ 3種有機(jī)溶劑組成的溶劑系統(tǒng) ， 分離效果主要決定于展開(kāi)劑的選擇 ， 因?yàn)槲絼┰谝欢ㄇ闆r下是恒定的 ，吸附劑的選擇余地遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于展開(kāi)劑的選擇 。 ： Ⅰ .微量圓環(huán)法 。 Ⅱ .用小載波片試驗(yàn) ， 微量展開(kāi)劑展開(kāi) 5cm。 Ⅲ .圖解法： 樣品極性小 ， 選吸附劑活性高 ， 展開(kāi)劑極性低的 。 樣品極性大 ， 選吸附劑活性低 ， 展開(kāi)劑極性高 。 ? 有機(jī)溶劑極性由小到大為： 石油醚 、 環(huán)己烷 、 四氯化碳 、 三氯乙烷 、 甲苯 、 苯 、二氯甲烷 、 氯仿 、 乙醚 、 乙酸乙酯 、 丙酮 、 正丙醇 、乙醇 、 甲醇 、 水 、 吡啶 、 有機(jī)酸類等 。 ： 上行法 、 下行法 、 雙向展開(kāi) 、 單向多次展開(kāi) 、 雙向多次展開(kāi) 。 雙向展開(kāi)： ⑤ 顯色： ，使斑點(diǎn)顯色，即噴霧顯色。 ，在紫外光下觀察斑點(diǎn)。 。 （涂板時(shí)把 熒光指示劑加入到固體吸附劑中） 定性：在同一塊板上 ， 同等條件下操作 ， 被測(cè)樣與標(biāo)準(zhǔn)樣同時(shí)展開(kāi) 、 顯色 ， 同 Rf 值即是； 查手冊(cè)找相同的 Rf 值 。 定量： ：以標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)對(duì)照 ， 相當(dāng)于樣品斑點(diǎn)中含量 ug數(shù) 。 。 ， 定容 ， 離心 ， 比色 。 ： 例 ： 日 本 島 津 CS910 型 雙 波 長(zhǎng) 薄 層色譜掃描儀 介紹離心薄層色譜儀： 1. LBG — 1型離心薄層色譜儀 北京產(chǎn) 2. 7924型離心薄層色譜儀 美國(guó) Harrison 公司研制 3. CLC — 5型離心制備液體色譜儀（日本日立公司，帶紫外檢測(cè)器、記錄器和自動(dòng)收集器，制備量可達(dá) 10g 。 二 ． 氨基酸自動(dòng)分析儀法 三 ． 氣相色譜法 四 ． 高效液相色譜法 氨基酸自動(dòng)分析儀 103 食品中揮發(fā)性鹽基氮的測(cè)定 ? 揮發(fā)性鹽基氮是指動(dòng)物性食品由于酶和細(xì)菌的作用，在腐敗過(guò)程中，是蛋白質(zhì)分解而產(chǎn)生氨以及胺類等堿性含氮物質(zhì)（如伯胺、仲胺及叔胺等 ）。 ? 揮發(fā)性鹽基氮屬于蛋白質(zhì)分解產(chǎn)物，這些分解產(chǎn)物的含量與動(dòng)物性食品的新鮮程度有明顯的對(duì)應(yīng)關(guān)系。故此指標(biāo)可用于評(píng)價(jià)動(dòng)物性食品的新鮮度。 ? 此類物質(zhì)具有揮發(fā)性，在堿性溶液中蒸出后，用標(biāo)準(zhǔn)酸溶液滴定計(jì)算含量。 揮發(fā)性鹽基氮的測(cè)定 半微量定氮法 微量擴(kuò)散法 蛋白質(zhì)分解后產(chǎn)生的堿性含氮物質(zhì)，在氧化鎂堿性條件下蒸餾以氨的形式釋效，再用酸滴定以定量，所得結(jié)果為揮發(fā)性鹽基氮。 半微量定氮法測(cè)揮發(fā)性鹽基氮 ? 將樣品除去脂肪、骨及腱后，切碎攪勻，稱取 10g，置于錐形瓶中，加 100mL水，不時(shí)振搖，浸漬 30min后過(guò)濾，濾液置冰箱備用 `。 ? 預(yù)先將盛有 10mL吸收液并加有 5～ 6滴混合指示液的錐形瓶置于冷凝管下端，并使其下端插人錐形瓶?jī)?nèi)吸收液的液面下。 ? 吸取 ，加 5mL 1％氧化鎂混懸液，迅速蓋塞，并加水以防漏氣，通入蒸氣，待蒸氣充滿蒸餾器內(nèi)時(shí)即關(guān)閉蒸氣出口管，由冷凝管出現(xiàn)第一滴冷凝水開(kāi)始計(jì)時(shí)，蒸餾 5min即停止，吸收液用 ／ L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，終點(diǎn)至藍(lán)紫色。 ? 同時(shí)做試劑空白試驗(yàn)。 微量擴(kuò)散法測(cè)揮發(fā)性鹽基氮 微量擴(kuò)散法測(cè)揮發(fā)性鹽基氮 第六節(jié) 維生素的測(cè)定 ? 維生素是維持人體正常生命活動(dòng)所必需的一類天然有機(jī)化合物。其種類很多，目前已確認(rèn)的有 30余種，其中被認(rèn)為對(duì)維持人體健康和促進(jìn)發(fā)育至關(guān)重要的有 20余種。這些維生素結(jié)構(gòu)復(fù)雜，理化性質(zhì)及生理功能各異，有的屬于醇類，有的屬于胺類，有的屬于酯類，還有的屬于酚或醌類化臺(tái)物。 維生素都具有以下共同特點(diǎn)： 這些化合物或其前體化合物都在天然食物中存在；它們不能供給機(jī)體熱能。也不是構(gòu)成組織的基本原料，主要功用是通過(guò)作為輔酶的成份調(diào)節(jié)代謝過(guò)程，需要量極??；它們一般在體內(nèi)不能合成，或合成量不能滿足生理需要，必須經(jīng)常從食物中攝取；長(zhǎng)期缺乏任何一種維生素都會(huì)導(dǎo)致相應(yīng)的疾病。 我們?cè)谠u(píng)價(jià)食品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，開(kāi)發(fā)利用高含量維生素的食品資源，指導(dǎo)人們合理調(diào)整膳食結(jié)構(gòu)，指導(dǎo)制定加工工藝或貯存條件，最大限量地保留各種維生素，還要控制強(qiáng)化食品中加入量，防中毒，都離不開(kāi)分析檢測(cè)工作。 維生素分類：脂溶性（ A、 D、 E、 K） 水溶性兩類（ B族、 C） 測(cè)定方法 優(yōu)點(diǎn) 缺點(diǎn) 生物鑒定法 不用詳盡分離 費(fèi)時(shí) （ 21天 ） 費(fèi)力 （ 主要?jiǎng)游镲暳?） 微生物法 選擇性高，主要用于水溶 性 V 操作繁瑣 ， 耗時(shí)過(guò)長(zhǎng) ，要有專門(mén)人員 儀器分析 （ 紫外法 、熒光法 ） 靈敏 、 快速 、 有較好的選擇性 各種色譜法 （ 柱 、紙 、 薄層層析 ） 高分離效能 ， 可分離 、 純?nèi)?、 定性 、 定量 脂溶性 V的測(cè)定 VA、 VD、 VE、 與類脂物一起存于食物中，攝食時(shí)可吸收，可在體內(nèi)積貯。 脂溶性維生素具有以下理化性質(zhì)： 1．溶解性：脂溶性維生素不溶于水，易溶于脂肪、乙醇、丙酮、氯仿、乙醚、苯等有機(jī)溶劑。 2．耐酸堿性：維生素 A、 D對(duì)酸不穩(wěn)定， 對(duì)堿穩(wěn)定，維生素 E對(duì)堿不穩(wěn)定，但在抗氧化劑存在下或惰性氣體保護(hù)下，也能經(jīng)受堿的煮沸。 3．耐熱性、耐氧化性： 耐熱性 氧化性 VA 好，能經(jīng)受煮沸 易被氧化 （光、熱促進(jìn)其氧化） V D 好，能經(jīng)受煮沸 不易被氧化 V E 好，能經(jīng)受煮沸 在空氣中能慢慢被化 （光、熱、堿促進(jìn)其氧化） 根據(jù)上述性質(zhì)．測(cè)定脂溶性維生素時(shí)，通常： 皂化樣品 水洗去除類脂物 有機(jī)溶劑提取脂溶性維生素 (不皂化物 ) 濃縮 溶于適當(dāng)?shù)娜軇? 測(cè)定。 在皂化和濃縮時(shí)，為防止維生素的氧化分解，常加入抗氧化劑 (如焦性沒(méi)食子酸、維生素 C等 )。 對(duì)于 A、 D、 E共存的樣品，或雜質(zhì)含量高的樣品，在皂化提取后，還需進(jìn)行層析分離。 國(guó)際單位： IU （ International Unit) 1 IU = VA = VD = = 3 μg VB1 維生素 A的測(cè)定 維生素 A存在于動(dòng)物性脂肪中，主要來(lái)源于肝臟、魚(yú)干油、蛋類、乳類等動(dòng)物性食品中。植物性食品中不合 VA，但在深色果蔬中含有胡蘿卜素，它在人體內(nèi)可轉(zhuǎn)變?yōu)?VA，故稱為 VA原。 高效液相色譜法測(cè)定食物中 VA、 VC （ GB/T — 2022中第一法） 高效液相色譜法測(cè)定維生素 A是近幾年發(fā)展起來(lái)的方法，此法能快速分離和測(cè)定視黃醇和它的同分異構(gòu)體、酯及其衍生物。這里介紹的是同時(shí)測(cè)定維生素 A和維生素 E的方法。 試劑： 重蒸水：蒸餾水中加少量高錳酸鉀，臨用前再蒸餾一次。 比色法測(cè)定 VA的含量 （ GB/T — 2022中第二法） 原理 在氯仿溶液中， VA與三氯化銻可生成藍(lán)色可溶性絡(luò)合物，在 620 nm 波長(zhǎng)處有最大吸收峰，其吸光度與 VA的含量在一定的范圍內(nèi)成正比，故可比色測(cè)定。 ? 適用范圍及特點(diǎn) 本法適用于維生素 A含量較高的各種樣品 (高于 5~10μg／ g )，對(duì)低含量樣品，因受其他脂溶性物質(zhì)的干擾．不易比色測(cè)定： 該法的主要缺點(diǎn)是生成的藍(lán)色絡(luò)合物的穩(wěn)定性差。比色測(cè)定必須在 6秒鐘內(nèi)完成 ，否則藍(lán)色會(huì)迅速消退，將造成極大誤差。 注意： 1. 維生素 A見(jiàn)光易分解，整個(gè)實(shí)驗(yàn)應(yīng)在暗處進(jìn)行，防止陽(yáng)光照射，或采用棕色玻璃避光。 2. 三氯化銻腐蝕性強(qiáng)，不能沾在手上，三氯化銻遇水生成白色沉淀．因此用過(guò)的儀器要先用稀鹽酸浸泡后再清洗。 β胡蘿卜素的測(cè)定 （ GB/T — 2022 ）第一方法是 HPLC；