[醫(yī)藥衛(wèi)生]霍亂弧菌實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)技術(shù)(編輯修改稿)
2024-11-14 23:11 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 因素影響。每個(gè)采樣點(diǎn)中采樣位置應(yīng)相距數(shù)米、采集 2瓶做為平行檢測(cè)， 3小時(shí)內(nèi)送檢。取450ml水樣，用 1M 氫氧化鈉調(diào)整至 pH ，ml。然后加 10倍濃縮堿性胨水 50ml。再加入1%亞碲酸鉀 ～ ml和 1000單位 / ml青霉素1 ml。 37℃ 培養(yǎng)過夜，取菌膜下表層培養(yǎng)物接種 4號(hào)培養(yǎng)基分離培養(yǎng)同時(shí)吸 ～ ml轉(zhuǎn)種于10ml堿性胨水管中作二次增菌， 37℃ 培養(yǎng) 6～8h再劃線接種于堿性瓊脂、 TCBS瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行分離。 2021/11/10 ? 食品及水產(chǎn)品樣本 ： ? 涂抹采集： 使用無菌棉簽涂抹 5只以上水水生動(dòng)物表面、腮部及泄殖腔，直接接種到 20ml堿性蛋白胨水作為增菌液處理。 37℃ 培養(yǎng)過夜，取菌膜下表層培養(yǎng)物接種 4號(hào)培養(yǎng)基分離培養(yǎng)同時(shí)吸 ～ ml轉(zhuǎn)種于 10ml堿性胨水管中作二次增菌， 37℃ 培養(yǎng) 6～ 8h再劃線接種于堿性瓊脂、 TCBS瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行分離。 ? 整體或局部采集 ：在實(shí)驗(yàn)室應(yīng)以無菌操作將其解剖，取鰓部和腸內(nèi)容物 25克剪碎后，置滅菌均質(zhì)杯或均質(zhì)袋中，加入 225mL倍體積的堿性蛋白胨水增菌；但小貝殼類動(dòng)物，則用錘子將外殼擊碎，整體放入三角瓶中增菌；甲殼類動(dòng)物除含肉質(zhì)部分外，其余部分 (包括鰓、腸、足、表層外殼等 )整體放入三角瓶進(jìn)行增菌處理。37℃ 培養(yǎng) 6～ 8h再劃線接種于堿性瓊脂、 TCBS瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行分離。 2021/11/10 霍亂病原分離 培養(yǎng) ?直接分離培養(yǎng) 急性期病人水樣大便標(biāo)本在增菌培養(yǎng)的同時(shí)可取其粘液絮片或用棉拭子直接接種在選擇性培養(yǎng)基上。目前常用的強(qiáng)選擇性培養(yǎng)基有 TCBS瓊脂、堿性瓊脂、慶大霉素瓊脂和 4號(hào)瓊脂等?；魜y弧菌在 TCBS上因分解蔗糖呈黃色菌落 ,此是 WHO推薦使用培養(yǎng)基。 2021/11/10 ?增菌 /二次增菌分離培養(yǎng) 所有糞便標(biāo)本都應(yīng)接種堿性蛋白胨水培養(yǎng)基，放 37℃ 增菌 6～ 8h后，從菌膜下表層取一接種環(huán)培養(yǎng)物，劃線接種于強(qiáng)選擇性堿性瓊脂和TCBS瓊脂平板各兩個(gè)。必要時(shí)進(jìn)行 二次增菌 2021/11/10 疑似菌落初步鑒定： ?每個(gè)堿性瓊脂、 TCBS瓊脂平板上各挑取5個(gè)以上 (少于 5個(gè)的全部挑取 )疑似菌落接種于營養(yǎng)瓊脂平板 /營養(yǎng)瓊脂斜面或克氏雙糖置 37℃ 1824h純培養(yǎng) (即每份樣品至少從 2個(gè)分離平板上獲得約 10株可疑菌落菌株 )，取斜面純培養(yǎng)物進(jìn)行血清鑒定、并涂片進(jìn)行革蘭氏染色及氧化酶試驗(yàn)等。 ?挑取可疑菌落作玻片凝集 – 與 O1群多價(jià)和單價(jià)血清作玻片凝集反應(yīng) – 與 O139群抗血清做凝集反應(yīng) 2021/11/10 ?血清鑒定：自分離培養(yǎng)基上挑取可疑菌落與 01群霍亂弧菌多價(jià) /單價(jià)診斷血清及0139群霍亂弧菌診斷血清做玻片凝集試驗(yàn)。玻片凝集用血清的效價(jià)一般應(yīng)為1∶ 40～ 1∶ 50。如可疑菌落在血清中很快 (一般在 10s內(nèi) )出現(xiàn)肉眼可見的明顯凝集，在生理鹽水中不凝集者判為陽性?？梢删漭^多時(shí)，應(yīng)挑選 5個(gè)以上的菌落逐個(gè)進(jìn)行玻片凝集檢查，必要時(shí)，取原劃線菌落邊緣透明部分再做玻片凝集，均為陰性時(shí)方可報(bào)告未檢出 01群及 0139群霍亂弧菌。對(duì)首發(fā)病例菌株需送上一級(jí)實(shí)驗(yàn)室做進(jìn)一步鑒定或復(fù)查。 2021/11/10 病原分離技術(shù)要點(diǎn) ?霍亂是烈性傳染病，對(duì)首例病人的病原學(xué)診斷應(yīng)做到快速、準(zhǔn)確，并及時(shí)作出檢測(cè)報(bào)告 ?提高分離平板技能技能： 考核最低要求9cm平板劃線分離，至少要保障有 50個(gè)以上單個(gè)菌落為及格，但菌落過于密集仍為技能不良的表現(xiàn)。 ?嚴(yán)禁 9cm平板分離 2份以上樣品 。 2021/11/10 ?強(qiáng)調(diào)在選擇培養(yǎng)上發(fā)現(xiàn)疑似菌后，首先考慮進(jìn)行 01/0139群霍亂弧
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