第十章蛋白質(zhì)和氨基酸的測定第一節(jié)概述(編輯修改稿)
2024-11-16 11:38 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 制熱源強(qiáng)度。 ⑤ 當(dāng)樣品消化液不易澄清透明時，可將凱氏燒瓶冷卻，加入 30％過氧化氫 2— 3 m1 后再繼續(xù)加熱消化 。 ⑥ 若取樣量較大，如干試樣超過 5 g 可按每克試樣 5 m1的比例增加硫酸用量。 ⑦ — 般消化至呈透明后，繼續(xù)消化 30分鐘即可，但對于含有特別難以氨化的氮化合物的樣品．如含賴氨酸、組氨酸、色氨酸、酪氨酸或脯氨酸等時，需適當(dāng)延長消化時間。有機(jī)物如分解完全，消化液呈藍(lán)色或淺綠色，但含鐵量多時，呈較深綠色。 ⑧ 蒸餾裝置不能漏氣。 ⑨ 蒸餾前若加堿量不足，消化液呈藍(lán)色不生成氫氧化銅沉淀，此時需再增加氫氧化鈉用量。 氫氧化銅在 70～ 90℃ 時發(fā)黑。 ⑩ 蒸餾完畢后，應(yīng)先將冷凝管下端提離液面清洗管口，再蒸 1分鐘后關(guān)掉熱源．否則可能造成吸收液倒吸。 二、 微量凱氏定氮法 原理及適用范圍同前 與常量法不同點： 加入硼酸量 有 50 ml 10 ml, 滴定用鹽酸濃度由 mol/L mol/L , 可用微量滴定管。 蒸餾裝置見 159 頁圖 102 。 102 102 三、 自動凱氏定氮法 原理及適用范圍同前 特點： （ 1）消化裝置用優(yōu)質(zhì)玻璃制成的凱氏消化瓶，紅外線加熱的消化爐。 （ 2）快速：一次可同時消化 8個樣品， 30分鐘可消化完畢。 （ 3）自動：自動加堿蒸餾，自動吸收和滴定，自動數(shù)字顯示裝置?？捎嬎憧偟俜趾坎⒂涗?， 12分鐘完成 1個樣。 北京福德泰和科技有限公司 產(chǎn)品名稱： 凱氏定氮儀 二、雙縮脲法 傳統(tǒng)的凱氏定氮法應(yīng)用范圍廣 ， 靈敏度高 、 準(zhǔn)確 ， 不要大儀器 ， 但費時間 ， 有環(huán)境污染 。 新開發(fā)的：雙縮脲法 、 紫外分光光度法 、 染料結(jié)合法 、 水楊酸比色法等 。 1. 原理 脲 （ 尿素 ） NH2— CO— NH2 加熱至 150~160℃ 時 ，兩分子縮和成雙縮脲 。 雙縮脲能和硫酸銅的堿性溶液生成紫色絡(luò)和物 ， 這種反應(yīng)叫雙縮脲反應(yīng) 。 （ 縮二脲反應(yīng) ） 蛋白質(zhì)分子中含有肽鍵 — CO— NH— 與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似 。 在同樣條件下也有呈色反應(yīng) ， 在一定條件下 ，其顏色深淺與蛋白質(zhì)含量成正比 ， 可用分光光度計來測其吸光度 ， 確定含量 。 （ 560nm） NH2— CO— NH— CO— NH2 + NH3 NH2— CO— NH2 + NH2— CO— NH2 注：測蛋白質(zhì)時叫雙縮脲法，并不另加雙縮脲。樣品不用消化 2. 方法特點及應(yīng)用范圍 本法靈敏度較低 ， 但操作簡單快速 ， 故在生物化學(xué)領(lǐng)域中測定蛋白質(zhì)含量時常用此法 。 本法亦適用于豆類 、 油料 、 米谷等作物種子及肉類等樣品測定 。 ： 分光光度計 ， 離心機(jī) （ 4000 r/min）
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