【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 編號(hào)： WSWSOP15 日期： 05 年 9 月 5 日 版號(hào)： 2020— 1 第 1 頁(yè)，共 2 頁(yè) 【 目的 】 明確普通 G+、 G MicroScan 板接種培養(yǎng)流程，指導(dǎo)檢測(cè)人員正確進(jìn)行普通 G+、 G MicroScan 板接種培養(yǎng)的操作流程。 【 適用人員 】 臨床微生物實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)人員 【 該 SOP變動(dòng)程序 】 本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動(dòng)，可由任一使用本 SOP 的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任。 【 步驟 】 標(biāo)本按微生物室標(biāo)準(zhǔn)操作程序所推薦的方法進(jìn)行收集、運(yùn)送和初步離培養(yǎng)。 染色：挑取純培養(yǎng)細(xì)菌進(jìn)行革蘭氏染色 1) 革蘭氏陰性桿菌、弧菌：進(jìn)行氧化酶實(shí)驗(yàn)，記下實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選用陰性板 NC21 2) 革蘭氏陽(yáng)性球菌：進(jìn)行觸酶實(shí)驗(yàn)，區(qū)分鏈球菌科（ ）和微球菌科（ +），記下實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選用陽(yáng)性板 PC12 接種： ① .接種的準(zhǔn)備： a) 用取種針去接觸純菌落 4 次，讓頂端凹槽填滿菌，用 CAP 帽子抹去多余菌，放接種水 中蓋緊，充分混勻，備用。 b) 挑選瓊脂平板上，形態(tài)相同的菌落移種于 MH 液體培養(yǎng)基中，置 350C溫箱中孵育 4小時(shí)，用生理鹽水稀釋至相當(dāng)于 麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)，或用接中環(huán)挑取菌落，懸浮于生理鹽水中振蕩混勻后與標(biāo)準(zhǔn)化濁管比濁，調(diào)整濁度至相當(dāng)于 麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)，吸 100ul 菌懸液于 25ml 接種水中，備用 ； ② . Microscan 板的水化與接種： 要用的干板取出室溫平衡后，用無(wú)菌吸嘴吸取 115ul 菌懸液于相應(yīng)的Microscan 板中。 加石蠟油：于孔下劃有一橫線的孔滴加 3滴石蠟油。 陰性板 NC21： 7個(gè)孔（ GLU URE LYS H2S ARG ORN DCB） 陽(yáng)性板 PC12： 2個(gè)孔（ URE ARG） 貼封口膠紙：對(duì)革蘭氏陰性板，氧化酶（ +）的板右上角 9 個(gè)孔貼封口膠（空 位為 DCB 孔） CIT TAR OF/G MAL ACE OF/B ONPG CET DCB 孵育：測(cè)試板上蓋一塊空板， 35℃非 CO2培養(yǎng)箱孵育 1624 小時(shí)。 檢查：從培養(yǎng)箱取出板 ①檢查 C 孔 （ 控制 孔） 須澄 清； G 孔 （生 長(zhǎng)孔 ）混 濁， 有菌 長(zhǎng) 。 （如不滿足上述條件，則不要判藥敏結(jié)果） ②革蘭氏陽(yáng)性板： a PGT 孔（ +）黃色 b 以下 9孔，有任意三個(gè)以上為（ +）黃色 RAF LAC TRE MNS SOR ARA RBS INC MAN ★以上兩個(gè)條件，任意一個(gè)符合即可加試劑叛讀結(jié)果。若以上兩個(gè)條件均不符合， 則需再孵育 1524 小時(shí)。藥敏 MIC 結(jié)果需在 1624小時(shí)內(nèi)判讀。 ③革蘭氏陰性板： a 葡萄糖發(fā)酵菌： 1） GLU=深黃色 2） SUC=黃色或 SOR=黃色 b 葡萄糖非發(fā)酵菌： 1） ARG=紫色和 OF/G=黃色 3） LYS=紫色 2） ARG=紫色和 CET=混濁 4） ORN=紫色 ★符合以上條件之一則可加試劑叛讀結(jié)果。若不符合，則需再孵育 1524小時(shí)。藥敏 MIC 結(jié)果需在 1624 小時(shí)內(nèi)判讀。 加試劑： 革蘭氏陰性板： VP40%KOH(VP1)， 5%α 萘酚（ NIT2）各一滴。 %對(duì)氨基苯磺酸（ NIT1）， %α 萘酚（ NIT2）各一滴。（ 5分鐘后判讀）。 TDA10%Fec13(TDA)一滴。 IND柯凡奇試劑（ IND） 3滴。 革蘭氏陽(yáng)性板： VP40%KOH(VP1), 5%α 萘酚（ VP2）各一滴。 %對(duì)氨基苯磺酸（ NIT1）， %α 萘酚（ NIT2）各一滴。 （ 5分鐘后判讀。） PYR肽酶試劑（ PET） 2 滴。 ★如果 VP（ ）須等到 20分鐘后再確定 VP 是否真為陰性 拿掉封口劑。 人工判讀 ,將生化反應(yīng)和藥敏結(jié)果記錄在相應(yīng)的 Microscan 結(jié)果記錄紙上。 編 寫 人 批 準(zhǔn) 人 生 效 日 期 傅石明 2020 年 9 月 5 日 遂昌中醫(yī)院 臨床微生物實(shí)驗(yàn)室 判讀普通革蘭陽(yáng)性板 標(biāo)準(zhǔn)操作程序 編號(hào)： WSWSOP16 日期： 05 年 9 月 5 日 版號(hào)： 2020— 1 第 1 頁(yè)，共 2 頁(yè) 【 目的 】 指導(dǎo)檢測(cè)人員正確進(jìn)行普通革蘭陽(yáng)性（ G+MicroScan）板 的結(jié)果判讀，保證檢驗(yàn) 結(jié)果。 【 適用人員 】 臨床微生物實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)人員 【 該 SOP變動(dòng)程序 】 本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動(dòng)，可由任一使用本 SOP 的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任。 【 普通 G+MicroScan 板陽(yáng)性對(duì)照色卡 】 VP VP2 各一滴 20分鐘 微球菌編碼 鏈球菌編碼 NIT NIT2 各一滴 5分鐘 PEP 二滴 2分鐘 【 步驟 】 一、 35℃非 CO2培養(yǎng)箱孵育 1624 小時(shí)后， C 孔（控制孔）須澄清； G 孔（生長(zhǎng)孔）混濁，有菌長(zhǎng) ,并符合以下條件之一則可加試劑判讀結(jié)果： a PGT 孔（ +） 黃色有沉淀 b 以下 9孔，有任意三個(gè)以上為（ +） 黃色 RAF LAC TRE MNS SOR ARA RBS INC MAN 二、以上兩個(gè)條件均不符，則先判讀所有藥敏結(jié)果。記錄鑒定藥敏或生長(zhǎng)試驗(yàn)CV、 MS、 NOV、 NaCL、 BAC 和 IDX、 PHO、 BL 實(shí)驗(yàn)結(jié)果，其它生化反應(yīng)試驗(yàn)再孵育 1524 小時(shí)后判讀。 三、普通 G+MicroScan 板生化結(jié)果判斷： 試驗(yàn)孔名稱 陽(yáng)性結(jié)果 陰性結(jié)果 CV MS NaCL 有生長(zhǎng)（混濁） 無(wú)生長(zhǎng)（清） OPT NOV BAC PGR PHO PGT 黃色（孔中有一點(diǎn)黃色即可） 無(wú)色 （與 NOV 作對(duì)照 ) 試驗(yàn)孔名稱 陽(yáng)性結(jié)果 陰性結(jié)果 IDX 藍(lán)色，灰色沉淀 無(wú)色或白色沉淀 VP 粉紅至紅色 無(wú)色至褐色或極淡粉色 試驗(yàn)孔名稱 陽(yáng)性結(jié)果 陰性結(jié)果 BE 暗棕色至黑色 無(wú)色至亮棕色 PYR 紅色或橙紅色 黃色至橙色 ARG 微球菌屬 橙色，粉紅 /紅色 黃色至橙黃色 4 CV NOV VP BE PGT LAC NaCL PBS BAC 2 MS PGR OPT PYR URE TRE SOR INU PRV 1 NIT IDX PHO ARG MAN MNS ARA RAF HEM 鏈球菌屬 粉紅 /紅色 黃色至橙色 URE 粉紅色（ 24H） 黃 色至橙色 RAF LAC SOR RBS INU 黃色 橙色至紅色 PRV TRE ARA MNS MAV BL 無(wú)色 蘭色至黑色 NIT 粉紅至紅色 無(wú)色或淡粉色 HEM β 溶血 無(wú)β 溶血 LOC 儀器識(shí)別反應(yīng)板類型用 四、 MIC 藥敏結(jié)果的判讀： 1. 所有的藥敏， CV、 MS、 NOV、 NaCL、 OPT 和 BAC的結(jié)果以黑色為背景判讀； 2. 以最開始出現(xiàn)生長(zhǎng)抑制的最低濃度孔記錄為 MIC； 3. 當(dāng)所有孔均不出現(xiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)， MIC 記錄為小于等于最低濃度； 4. 當(dāng)所有孔均出現(xiàn)細(xì)菌生長(zhǎng) ,MIC 記錄為大于 最高濃度； 5. 當(dāng)不出現(xiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)的濃度孔出現(xiàn)于細(xì)菌生長(zhǎng)的濃度孔梯度孔中，譬如，細(xì)菌在 和 8ug/ml 濃度孔中生長(zhǎng)，但在 4ug/ml 孔中不生長(zhǎng)，此孔則稱為跳孔，這個(gè)濃度孔結(jié)果應(yīng)被忽略。 五、生化和藥敏結(jié)果均記錄在手工記錄紙上： Microscan 陽(yáng)性復(fù)合板 PC12 結(jié)果記錄： 病人： 床號(hào)： 記錄時(shí)間： 鑒定結(jié)果： 4 CV NOV VP BE PGT LAC NaCL PBS BAC 2 MS PGR OPT PYR URE TRE SOR INU PRV 1 NIT IDX PHO ARG MAN MNS ARA RAF HEM 鑒定值 藥敏結(jié)果： T/S Rif Ox Aug Te Imp Am P Cf Va E Cla Cfz Cd Gm Cft Cp Nxn Fd TFG STS GMS β Lac 編 寫 人 批 準(zhǔn) 人 生 效 日 期 傅石明 2020 年 9 月 5 日 遂昌中醫(yī)院 臨床微生物實(shí)驗(yàn)室 判讀普通革蘭陰性板 標(biāo)準(zhǔn)操作程序 編號(hào)： WSWSOP17 日期： 05 年 9 月 5 日 版號(hào)： 2020— 1 第 1 頁(yè)，共 2 頁(yè) 【 目的 】 指導(dǎo)檢測(cè)人員正確進(jìn)行普通革蘭陰性（ GMicroScan）板的結(jié)果判讀，保證檢驗(yàn) 結(jié)果。 【 適用人員 】 臨床微生物實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)人員 【 該 SOP變動(dòng)程序 】 本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動(dòng)，可由任一使用本 SOP 的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任。 【 普通 GMicroScan 板陽(yáng)性對(duì)照色卡 】 葡萄糖發(fā)酵菌編碼 TDA 一滴 3分鐘 NIT NIT2 各一滴 5 分鐘 4 GLU RAF INO URE LYS TDA CIT CL4 TAR OF/G CL4 NIT 2 SUC RHA ADO H2S ARG ESC MAL CF8 ACE P4 Fd64 OXI 1 SOR ARA MEL IND ORN VP ONPG OXI CET K4 To4 葡萄糖非發(fā)酵菌編碼 IND三滴 5分鐘 VP VP2 各一滴 20 分鐘 【 步驟 】 一、 35℃非 CO2培養(yǎng)箱孵育 1624 小時(shí)后， C 孔（控制孔）須澄清； G 孔（生長(zhǎng)孔）混濁，有菌長(zhǎng) ,并符合 以下條件之一則可加試劑叛讀結(jié)果： 葡萄糖發(fā)酵菌： 1） GLU=深黃色 2） SUC=黃色 或 SOR=黃色 葡萄糖非發(fā)酵菌： 1） ARG=紫色 和 OF/G=黃色 3） LYS=紫色 2） ARG=紫色 和 CET=混濁 4） ORN=紫色 二、以上條件均不符，則先判讀所有藥敏結(jié)果。記錄鑒定藥敏 CL Cf PK FD64 和 CET 實(shí)驗(yàn)結(jié)果，其它生化反應(yīng)試驗(yàn)再孵育 1524小時(shí)后判讀。 三、普通 GMicroScan 板生化結(jié)果判斷： 試驗(yàn)孔名稱 陽(yáng)性結(jié)果 陰性結(jié)果 GLU 深黃色 橙紅色 SUC RAF INO SOR 黃色、橙黃色 紅色 RHA ADO ARA MEL URE 洋紅、粉紅色 黃、橙黃或淡粉紅色 H2S 黑色有沉淀 沒(méi)變黑 IND 粉紅至紅色 澄清、橙色 LYS ORN ARG 發(fā)酵菌 紫色至灰色 黃色 （ DCB 為對(duì)照孔）非發(fā)酵菌 紫色 無(wú)色或灰色 試驗(yàn)孔名稱 陽(yáng)性結(jié)果 陰性結(jié)果 TDA 暗棕色 黃色至橙色 ESC 棕色至黑色 澄清 VP 紅色 澄清 ONPG 淺黃色 澄清 CIT TAR MAL ACE 藍(lán)色至藍(lán)綠色 綠色至黃色 OF/G 若 OF/B 為綠色 黃色 綠色至藍(lán)色 若 OF/B 為藍(lán)色或藍(lán)綠色 黃色至綠色 藍(lán)色 NIT 紅色 無(wú)色或淡粉色 P4 K4 CL4 Cf8 CET 有生長(zhǎng)（混濁） 無(wú)生長(zhǎng)（清） LOC 儀器識(shí)別反應(yīng)板類型用 四、 MIC 藥敏結(jié)果的判讀： 6. 所有的藥敏， CV、 MS、 NOV、 NaCL、 OPT 和 BAC的結(jié)果以黑色為背景判讀； 7. 以最開始出現(xiàn)生長(zhǎng)抑制的最低濃度孔記錄為 MIC； 8. 當(dāng)所有孔均不出現(xiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)， MIC 記錄為小于等