【正文】 【 方法】 微量肉湯稀釋法 (法國梅 里埃 ATB FUNGUS2 真菌藥敏 ) 【 試劑 】 ③ 藥敏試條 ② ATB F2 Medium③ 9g/l 氯化鈉 【 步驟 】 1. 純培養(yǎng)物（真菌），用 9g/L 氯化鈉制備 2MCF 菌液； 2. 吸取 20ul 菌液于 ATB F2 Medium 中，混勻； 3. ATB FUNGUS2 試條每孔加 135ulATB F2 Medium 菌液，蓋上板條蓋； 4。保證 ATB FUNGUS2真菌藥敏結(jié)果。 【 結(jié)果的觀察與解釋 】 陽性結(jié)果：對(duì)照區(qū)（ C）與檢測區(qū)（ T）均出現(xiàn)紅線； 陰性結(jié)果：對(duì)照區(qū)（ C）有一條紅線，檢測區(qū)（ T）無紅線； 無效結(jié)果：對(duì)照區(qū)（ C）不出現(xiàn)條紅線。 2）男性尿液的處理： 取 20ml 尿液， 3000 轉(zhuǎn) /分，離心 30 分鐘； 棄去上清液，加 8滴 A液，充分混勻，置 2 分鐘； 用一次性吸管將溶液吸入樣品處理管，加 8 滴 B 液，混勻，備用。及酚紅指示劑，解脲支原體（ UU）能分解脲素產(chǎn)氨；人型支原體（ Mh）能分解精氨酸產(chǎn)氨，使培養(yǎng)基偏堿，由黃色變?yōu)榧t色，提示有支原體存在。 【 適用范圍 】 用于直接檢測女性宮頸拭子、男性尿道拭子、男性尿液 和有癥狀的眼結(jié)膜中衣原體的存在。 編 寫 人 批 準(zhǔn) 人 生 效 日 期 傅石明 2020 年 9 月 5 日 遂昌中醫(yī)院 臨床微生物實(shí)驗(yàn)室 AccuStep 衣原體抗原檢測 標(biāo)準(zhǔn)操作程序 編號(hào)： WSWSOP26 日期： 05 年 9 月 5 日 版號(hào)： 2020— 1 第 1 頁，共 1 頁 【 目的 】 指導(dǎo) AccuStep 衣原體抗原檢測 的正確操作，保證檢測結(jié)果。 【 結(jié)果的觀察與解釋 】 1. R2肉湯的觀察：如無 UU 與 Mh，應(yīng)為黃色；如有 UU 或 Mh，則培養(yǎng)基應(yīng)變?yōu)殚偌t至紅色，上層液應(yīng)清或輕度混，若培養(yǎng)基變混濁，應(yīng)考慮細(xì)菌污染。及酚紅指示劑，解脲支原體（ UU）能分解脲素產(chǎn)氨；人型支原體（ Mh）能分解精氨酸產(chǎn)氨，使培養(yǎng)基偏堿，由黃色變?yōu)榧t色，提示有支原體存在。 【 該 SOP變動(dòng)程序 】 本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動(dòng)，可由任一使用本 SOP 的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任。 注：奴卡菌、放線菌標(biāo)本染色時(shí)，脫色劑改用 2%硫酸水溶液。 干后鏡檢。 加脫色劑，不時(shí)搖動(dòng)坡片至無紅色脫落為至，水洗。 【 方法 】 堿性復(fù)紅染色法 【 試劑 】 萋納石炭酸復(fù)紅溶液 堿性復(fù)紅乙醇飽和溶液 10ml 5%石炭酸溶液 90ml 脫色劑 濃鹽酸 3ml 95%乙醇 97ml 復(fù)染液（呂弗勒美藍(lán)液） 美藍(lán)乙醇飽和溶液 30ml 10%氫氧化鉀 蒸餾水 100ml 【 染色步驟 】 涂片經(jīng)自然干燥或火焰固定后，加石炭酸復(fù)紅溶液，徐徐加熱至有蒸汽出現(xiàn)，切不可沸騰。 2. 革蘭陰性菌呈紅色。 ，油鏡鏡檢。 1020 秒，之后水洗，甩干。 10秒 ，清水沖去染液，甩干。 ：主要成分沙黃、乙醇。 ：主要成分碘、碘化鉀。 【 該 SOP變動(dòng)程序 】 本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動(dòng)，可由任一使用本 SOP 的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任。 【 該 SOP變動(dòng)程序 】 本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動(dòng)，可由任一使用本 SOP 的工作人員提出，并 報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任。 【 適用人員】 臨床微生物實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)人員 【方法 】 碘結(jié)合法 【 檢測原理】 把青霉素和碘加入 BL 孔中，反應(yīng)后的β 內(nèi)酰胺環(huán)和淀粉分子競爭性地和碘結(jié)合，當(dāng)有β 內(nèi)酰胺酶存在時(shí)，碘和β 內(nèi)酰胺環(huán)結(jié)合，產(chǎn)生無色反應(yīng)。 確證試驗(yàn)： ① MH 培養(yǎng)基 ② 藥敏紙片：頭孢他啶 30ug、頭孢他啶 /克拉維酸 30/10ug 頭孢噻肟 30ug、頭孢噻肟 /克拉維酸 30/10ug ③ 標(biāo)準(zhǔn)紙片擴(kuò)散法（ KB法）， 35度需氧培養(yǎng) 1618小時(shí)； ④ 結(jié)果： 上述兩種抗菌素，如含有克拉維酸的復(fù)合抗菌素比單獨(dú)抗菌素的抑菌環(huán)對(duì)增大相≥ 5mm，可確認(rèn)大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、奇亦變形桿菌產(chǎn)超廣譜β 內(nèi)酰胺酶 (ESBLs)。 【 步驟 】 篩選試驗(yàn)： 美國德靈 MicroScan 革蘭陰性板 NC21 的藥敏符合以下其中一個(gè)結(jié)果， 頭孢泊肟（ CPD） 1ug/ml 氨曲南（ AZT）≥ 16 ug/ml 頭孢噻肟（ CFT）≥ 8 ug/ml 頭孢他啶（ CAZ） 8 ug/ml 頭孢三嗪（ CAX）≥ 8 ug/ml 提示產(chǎn) ESBLs 的可能，美國德靈 MicroScan 細(xì)菌分析系統(tǒng)會(huì)自動(dòng)提示。 【 適用人員 】 臨床微生物實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)人員 【 適用范圍 】 適用于大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、奇亦變形桿菌。 5. 判定結(jié)果：培養(yǎng)后取出平板，用尺測量抑菌環(huán)的直徑，抑菌環(huán)的邊緣以肉眼見不到細(xì)菌明顯生長為限，然后根據(jù)抑菌環(huán)直徑大小、 NCCLS 判斷細(xì)菌的敏感性，并加以記錄。每張紙片間距不 少于 24mm，紙片中心距平皿邊緣不少于 15mm。 2. 接種平板：用無菌棉簽蘸取已制備好的接種好的菌液，在管壁上旋轉(zhuǎn)擠壓，去掉過多的菌液，涂布整個(gè) MH培養(yǎng)基表面，并將平板旋轉(zhuǎn) 60℃，反復(fù)幾次，最后沿平皿周邊繞兩圈，保證涂布均勻。 【 該 SOP變動(dòng)程序 】 本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動(dòng)，可由任一使用本 SOP 的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任。 （二） 藥敏紙片 來源于杭州天和微生物試劑有限公司 （三） 質(zhì)控菌株 KΒ法質(zhì)量控制用 菌株常規(guī)用：金黃色葡萄球菌 ATCC2592大腸埃希菌ATCC2592銅綠假單胞菌 ATCC27853。 編 寫 人 批 準(zhǔn) 人 生 效 日 期 傅石明 2020 年 9 月 5 日 遂昌中醫(yī)院 臨床微生物實(shí)驗(yàn)室 KB 法藥敏試驗(yàn) 標(biāo) 準(zhǔn)操作程序 編號(hào)： WSWSOP20 日期： 05 年 9 月 5 日 版號(hào)： 2020— 1 第 1 頁，共 1 頁 【 目的 】 保證紙片擴(kuò)散法（ KB法）藥敏結(jié)果的可靠性。 6. 呼吸道標(biāo)本中檢到特殊的病原體，如結(jié)核桿菌、軍團(tuán)菌即有意義。 4. 痰液與血液或胸水中分離到相同 病原體，有診斷意義。 【 痰液結(jié)果解釋 】 1. 外觀干燥或僅為唾液者屬不合格，應(yīng)要求重留。 4. 恥骨上穿刺尿標(biāo)本分離出細(xì)菌，不管量是多少均有臨床意義。 2. 已用抗菌藥物或經(jīng)導(dǎo)尿管采集的尿液，多次尿培養(yǎng)為單一的同種菌，細(xì)菌濃度 雖未達(dá)到上述界限，也可認(rèn)為是感染菌。 【 尿液結(jié)果解釋 】 1. 中斷尿分離的革藍(lán)陰性菌濃度 ＞ 105CFU/ml，革藍(lán)陽性球菌 ＞ 104CFU/ml 可認(rèn)為是感染的病原菌，反之污染的可能性大。血培養(yǎng)為枯草桿菌則污染可能性大。 【 血液結(jié)果解釋 】 1. 通常血培養(yǎng)分離的細(xì)菌 或真菌，可認(rèn)為是血液感染的病原菌。特別是醫(yī)院感染，由于抗生素的應(yīng)用等因素導(dǎo)致菌群失調(diào)，定植治病菌污染感染部位標(biāo)本甚為多見，其給醫(yī)院感染的病原學(xué)診斷帶來困難，為提高疾病診斷的正確性，確認(rèn)感染病原菌而制定本程序。 完成當(dāng)天工作后，確認(rèn)第一和第二平臺(tái)都處于主菜單（ Main Menu）下， 輸入〖 10〗按〖 Enter〗退出到 C： \DMS\； 可以關(guān)閉或重啟電腦 五、中文報(bào)告檢索生成和打印 完成步驟四報(bào)告?zhèn)魉秃螅匦聠?dòng)電腦，屏幕出現(xiàn)提示： F1=Standard boot of partition F2=CCI Concurrent DOS Microscan 按〖 F1〗鍵進(jìn)入 Windows 中文 系統(tǒng)； 運(yùn)行微生物中文報(bào)告系統(tǒng)，輸入病人資料后進(jìn)行檢索，確認(rèn)結(jié)果； 無菌報(bào)告在中文系統(tǒng)手工輸入生成 審核后打印報(bào)告。完成所有資料輸入后同時(shí)按〖 Ctrl+F10〗保存退出。 【 步驟 】 一、英文資料輸入（測定結(jié)果） 打開電腦電源，自檢通過后，電腦屏幕顯示 F1=Standard boot of bootable partition F2=CCI Concurrent DOS Microscan 按〖 F2〗鍵進(jìn)入 MicroScan 英文系統(tǒng) 二、細(xì)菌鑒定板判讀和細(xì)菌查詢 完成板加試劑判讀，記錄生化反應(yīng)和藥敏結(jié)果； 根據(jù)生化反應(yīng)生成 69位編碼； 進(jìn)入儀器第四平臺(tái)：同時(shí)按〖 Ctrl〗和〖 4〗進(jìn)入 革蘭氏陰性發(fā)酵菌和孤菌（氧化酶陰性）選擇〖 1〗； 革蘭氏陰性非發(fā)酵菌和遲緩酵菌（氧化酶陽性）選擇〖 2〗； 革蘭氏陽性鏈球菌和腸球菌（觸酶陰性）選擇〖 15〗； 革蘭氏陽性葡萄球和微球菌（觸酶陽性）選擇〖 16〗； 根據(jù)編碼檢索，確定細(xì)菌名和代碼記錄。 五、生化和藥敏結(jié)果均記錄在手工記錄紙上： Microscan 陰性復(fù)合板 NC21 結(jié)果記錄 病人： 床號(hào)： 記錄時(shí)間： 鑒定結(jié)果： 4 GLU RAF INO URE LYS TDA CIT CL4 TAR OF/G CL4 NIT 2 SUC RHA ADO H2S ARG ESC MAL CF8 ACE P4 Fd64 OXI 1 SOR ARA MEL IND ORN VP ONPG OXI CET K4 To4 鑒定值 藥敏結(jié)果： A/S Am Cf P/T Pi Azt Cfz Cfx Cp Cpd Crm Cax Caz Cft Cpe T/S Gm To Imp Ak ESBL 編 寫 人 批 準(zhǔn) 人 生 效 日 期 傅石明 2020 年 9 月 5 日 遂昌中醫(yī)院 臨床微生物實(shí)驗(yàn)室 普通 Microscan 板報(bào)告 標(biāo)準(zhǔn)操作程序 編號(hào)： WSWSOP18 日期： 05 年 9 月 5 日 版號(hào)： 2020— 1 第 1 頁，共 2 頁 【 目的 】 明確普通 Microscan 板報(bào)告的操作流程，指導(dǎo)檢測人員正確進(jìn)行普通 Microscan 板的細(xì)菌查詢、英文報(bào)告生成與傳送、中文報(bào)告檢索生成與打印。記錄鑒定藥敏 CL Cf PK FD64 和 CET 實(shí)驗(yàn)結(jié)果，其它生化反應(yīng)試驗(yàn)再孵育 1524小時(shí)后判讀。 【 適用人員 】 臨床微生物實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)人員 【 該 SOP變動(dòng)程序 】 本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的改動(dòng)，可由任一使用本 SOP 的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任。 三、普通 G+MicroScan 板生化結(jié)果判斷： 試驗(yàn)孔名稱 陽性結(jié)果 陰性結(jié)果 CV MS NaCL 有生長（混濁） 無生長（清） OPT NOV BAC PGR PHO PGT 黃色（孔中有一點(diǎn)黃色即可） 無色 （與 NOV 作對(duì)照 ) 試驗(yàn)孔名稱 陽性結(jié)果 陰性結(jié)果 IDX 藍(lán)色，灰色沉淀 無色或白色沉淀 VP 粉紅至紅色 無色至褐色或極淡粉色 試驗(yàn)孔名稱 陽性結(jié)果 陰性結(jié)果 BE 暗棕色至黑色 無色至亮棕色 PYR 紅色或橙紅色 黃色至橙色 ARG 微球菌屬 橙色，粉紅 /紅色 黃色至橙黃色 4 CV NOV VP BE PGT LAC NaCL PBS BAC 2 MS PGR OPT PYR URE TRE SOR INU PRV 1 NIT IDX PHO ARG MAN MNS ARA RAF HEM 鏈球菌屬 粉紅 /紅色 黃色至橙色 URE 粉紅色（ 24H） 黃 色至橙色 RAF LAC SOR RBS INU 黃色 橙色至紅色 PRV TRE ARA MNS MAV BL 無色 蘭色至黑色 NIT 粉紅至紅色 無色或淡粉色 HEM β 溶血 無β 溶血 LOC 儀器識(shí)別反應(yīng)板類型用 四、 MIC 藥敏結(jié)果的