【文章內(nèi)容簡介】 了食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗(yàn)方法。本文適用于航空食品的檢驗(yàn)。2 設(shè)備和材料吸管（1ml、10ml）、恒溫培養(yǎng)箱（36177。1℃、177?！妫?、冰箱、均質(zhì)器、振蕩器、平皿、稀釋瓶、天平、顯微鏡等3 培養(yǎng)基和試劑月桂基硫酸鹽胰蛋白月示（LST）肉湯、煌綠乳糖膽鹽（BGLB）肉湯、EC肉湯、伊紅美藍(lán)瓊脂（EMB）、營養(yǎng)瓊脂斜面、色氨酸肉湯、MRPV培養(yǎng)基、Korser氏枸掾酸鹽肉湯、結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA）、Butterfield氏磷酸鹽緩沖稀釋液、生理鹽水、革蘭氏染色液、Kovacs氏靛基質(zhì)試劑、甲基紅指示劑、Vogespros kauer（VP）試劑、4 樣品制備 以無菌操作取有代表性的樣品盛于滅菌容器內(nèi)。如有包裝，則用75％乙醇在包裝開口處擦拭后取樣。 制備樣品勻液以無菌操作取25g樣品，放入裝有225ml稀釋劑的滅菌均質(zhì)杯內(nèi)，于8000r/min均質(zhì)12min，制成1：10的樣品勻液。如樣品均質(zhì)時(shí)間超過2min，應(yīng)在均質(zhì)杯外加冰水冷卻。 稀釋樣品勻液用10ml滅菌吸管準(zhǔn)確吸取1：10的樣品勻液10ml，放入裝有90ml稀釋劑的150ml 稀釋瓶中。迅速振搖，將樣品混勻，制成1：100的樣品勻液。5 大腸菌群的測定 大腸菌群MPN值的測定 對每個(gè)樣品，選擇適宜的三個(gè)連續(xù)稀釋度的樣品稀釋液。每個(gè)稀釋度接種三管月桂基硫酸鹽胰蛋白月示（LST）肉湯，每管接種1ml。 將接種管置于36177。1℃的培養(yǎng)48177。2h。 觀察試管的產(chǎn)氣情況：檢查倒管內(nèi)是否有氣泡產(chǎn)生，記錄在24h和48h內(nèi)產(chǎn)氣的LST肉湯管數(shù)。如所有LST肉湯管均未產(chǎn)氣，則可報(bào)告為大腸菌群陰性；如有產(chǎn)氣者，則進(jìn)一步作證實(shí)試驗(yàn)。 大腸菌群的證實(shí)試驗(yàn) 將所有產(chǎn)氣管用直徑為3mm的接種環(huán)移種到煌綠乳糖膽鹽（BGLB）肉湯管中。 置BGLB肉湯管于36177。1℃的培養(yǎng)48177。2h。 記錄所有BGLB肉湯管的產(chǎn)氣管數(shù)。 結(jié)果報(bào)告：按BGLB肉湯產(chǎn)氣管數(shù)，查MPN表報(bào)告每克（毫升）樣品中大腸菌群的MPN值。6 糞大腸菌群測定 用接種環(huán)將所有48177。2h內(nèi)產(chǎn)氣的LST肉湯管培養(yǎng)物移種于EC肉湯管中。 177?！嫠∠鋬?nèi)，培養(yǎng)24177。2h。水浴箱的水平面應(yīng)高于肉湯培養(yǎng)基液面。℃℃不產(chǎn)氣的產(chǎn)氣腸桿菌或其他大腸菌群細(xì)菌作陽性和陰性對照。 記錄EC肉湯管的產(chǎn)氣情況。產(chǎn)氣管為糞大腸菌群試驗(yàn)陽性；不產(chǎn)氣管為糞大腸菌群試驗(yàn)陰性。 結(jié)果報(bào)告：按產(chǎn)氣管數(shù)，查MPN表報(bào)告每克（毫升）樣品中糞大腸菌群的MPN值。7 大腸桿菌測定 （EMB）平板，36177。1℃的培養(yǎng)24177。2h。 檢查平板上有無具黑色中心有光澤或無光澤的典型菌落。 如有典型菌落，則從每個(gè)平板上至少挑取2個(gè)典型菌落；如無典型菌落，則從每個(gè)平板上至少挑取2個(gè)可疑菌落。用接種針接觸菌落中心部位，移種到營養(yǎng)瓊脂斜面上，36177。1℃的培養(yǎng)1824h。 將斜面培養(yǎng)物移種到下列培養(yǎng)基進(jìn)行生化試驗(yàn)。 色氨酸肉湯：在36177。1℃的培養(yǎng)24177。2h后，上層出現(xiàn)紅色為靛基質(zhì)陽性反應(yīng)。 MRVP培養(yǎng)基：在36177。1℃的培養(yǎng)48177。2h后。以無菌操作移取培養(yǎng)物1ml至13mm*100mm試管中，加5％，40％，振搖試管后靜置2h，如出現(xiàn)伊紅色，為VP試驗(yàn)陽性。　　將 MRVP培養(yǎng)物的剩余部分再培養(yǎng)48h滴加5滴甲基紅溶液。如培養(yǎng)物變紅色，為甲基紅試驗(yàn)陽性，若變黃色則為陰性反應(yīng)。 Korser氏枸掾酸鹽肉湯：于36177。1℃的培養(yǎng)96h記錄有無生長。 LST肉湯：于36177。1℃的培養(yǎng)48177。2h，觀察試管中是否產(chǎn)氣。 革蘭氏染色：取18h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物作革蘭氏染色。大腸桿菌為革蘭氏陰性。 大腸桿菌與非大腸桿菌生化鑒別如下靛基質(zhì)MRVP枸掾酸鹽鑒定（型別）+++典型大腸桿菌非典型大腸桿菌+++++典型中間型非典型中間型+++++典型產(chǎn)氣腸桿菌非典型產(chǎn)氣腸桿菌如出現(xiàn)上表以外的生化反應(yīng)類型，表明培養(yǎng)物可能不純，應(yīng)重新劃線分離，必要時(shí)做重復(fù)試驗(yàn)。 結(jié)果報(bào)告：大腸桿菌為革蘭氏陰性無芽孢桿菌，發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，IMViC試驗(yàn)為++或+，再根據(jù)LST肉湯陽性管數(shù)查MPN表，報(bào)告每克（毫升）樣品中大腸桿菌MPN值。注：本文參照SN016992《出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗(yàn)方法》（六）沙門氏菌檢驗(yàn)1 主題內(nèi)容與適用范圍本文規(guī)定了食品中沙門氏菌的檢驗(yàn)方法。本文適用于航空食品的檢驗(yàn)。2 設(shè)備和材料吸管（1ml、10ml）、恒溫培養(yǎng)箱（36177。1℃、42℃）、冰箱、均質(zhì)器、振蕩器、平皿、稀釋瓶、天平、顯微鏡、接種棒等3 培養(yǎng)基和試劑緩沖蛋白胨水（BP）、氯化鎂孔雀綠增菌液、四硫酸鈉煌綠(TTB)增菌液、亞硒酸鹽胱氨酸(SC)增菌液、亞硫酸鉍瓊脂(BS)、DHL瓊脂、HE瓊脂、WS瓊脂、SS瓊脂、三糖鐵瓊脂、蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑、尿素瓊脂()、氰化鉀(KCN)培養(yǎng)基、氨基酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基、糖發(fā)酵管、ONPG培養(yǎng)基、半固體瓊脂、丙二酸鈉培養(yǎng)基、沙門氏菌因子血清：按26種用于初步分型；57種用于進(jìn)一步分型；163種用于詳細(xì)分型。4 檢驗(yàn)程序檢樣25g+225mlBP胨水沙門氏菌檢驗(yàn)程序如下： 　　　 36177。1℃ 4h10ml勻液+SC100ml10ml勻液+MM(或TTB)100ml　　　　　　　　　42℃ 1824h　　　　　　36177。1℃ 1824hDHLBS36177。1℃ 4048h　　　　　　　　36177。1℃ 1824h挑取可疑菌落TSI（斜面、底層、產(chǎn)氣、H2S），蛋白胨水（），尿素（），KCN, 賴氨酸非如左述的各種反應(yīng)結(jié)果H2S 　靛基質(zhì)尿素　KCN　賴氨酸+/H2S +　靛基質(zhì)+尿素　KCN　賴氨酸+H2S +　靛基質(zhì)尿素　KCN　賴氨酸+ONPG甘露醇、山梨醇非沙門氏菌沙門氏菌血清學(xué)試驗(yàn)沙門氏菌血清學(xué)試驗(yàn)非沙門氏菌報(bào)告5 操作步驟 前增菌取檢樣25g，加入225mL緩沖蛋白胨水于均質(zhì)杯內(nèi)。用均質(zhì)器以8000～10000r/min打碎1min，于36177。1℃培養(yǎng)4h(干蛋品培養(yǎng)18～24h)，移取10mL，轉(zhuǎn)種于100mL氯化鎂孔雀綠增菌液（MM）或四硫酸鈉煌綠（TTB）增菌液內(nèi)，于42℃培養(yǎng)18～24h。同時(shí)，另取10mL，轉(zhuǎn)種于100mL亞硒酸鹽骯氨酸（SC）增菌液內(nèi)，于36177。1℃培養(yǎng)18～24h。 分離取增菌液1環(huán)，劃線接種于一個(gè)亞硫酸鉍瓊脂平板和一個(gè)DHL瓊脂平板。兩種增菌液可同時(shí)劃線接種在同一個(gè)平板上。于36177。1℃分別培養(yǎng)18～24h(DHL)或40～48h(BS)，觀察各個(gè)平板上生長的菌落，沙門氏菌Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ和沙門氏菌Ⅲ在各個(gè)平板上的菌落特征見表1?！　”?　沙門氏菌屬各群在各種選擇性瓊脂平板上的菌落特征選擇性瓊脂平板沙門氏菌Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ沙門氏菌Ⅲ（即亞利桑那菌）BS瓊脂產(chǎn)硫化氫菌落為黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色，菌落周圍培養(yǎng)基可呈黑色或棕色；有些菌株不產(chǎn)硫化氫，形成灰綠色的菌落周圍培養(yǎng)基不變黑色有金屬光澤DHL瓊脂無色半透明；產(chǎn)硫化氫菌落中心帶黑色或幾乎全黑色乳糖遲緩陽性或陰性的菌株與沙門氏菌Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ相同；乳糖陽性的菌株為粉紅色，中心帶黑色 生化試驗(yàn) 自選擇性瓊脂平板上直接挑取數(shù)個(gè)可疑菌落，分別接種三糖鐵瓊脂。在三糖鐵瓊脂內(nèi)，腸桿菌科常見屬種的反應(yīng)結(jié)果見表2。表2　腸桿菌科各屬在三糖鐵瓊脂內(nèi)的反應(yīng)結(jié)果斜面底層產(chǎn)氣硫化氫可能的菌屬和種++/+沙門氏菌屬、弗勞地氏檸檬酸桿菌、變形桿菌屬、緩慢愛德華氏菌+++/+沙門氏菌Ⅲ、弗勞地氏檸檬酸桿菌、普通變形桿菌++沙門氏菌屬、大腸埃希氏菌、蜂窩哈夫尼亞菌、摩根氏菌、普羅菲登斯菌屬+傷寒沙門氏菌、雞沙門氏菌、志賀氏菌屬、大腸埃希氏菌、蜂窩哈夫尼亞菌、摩根氏菌、普羅菲登斯菌屬+++/大腸埃希氏菌、腸桿菌屬、克雷伯氏菌屬、沙雷氏菌屬、弗勞地氏檸檬酸桿菌說明：在三糖鐵瓊脂內(nèi)只有斜面產(chǎn)酸并同時(shí)硫化氫(H2S)陰性的菌株可以排除，其他的反應(yīng)結(jié)果均有沙門氏菌的可能，同時(shí)也均有不是沙門氏菌的可能。 在接種三糖鐵瓊脂的同時(shí)，再接種蛋白陳水(供做靛基質(zhì)試驗(yàn))、尿素瓊脂()、氰化鉀(KCN