【正文】 強(qiáng)，如溫度升至45℃時(shí)，1h內(nèi)人和哺乳動(dòng)物細(xì)胞將被殺死；相反，降低溫度把細(xì)胞置于25～35℃時(shí)，細(xì)胞仍能生長(zhǎng)，但速度減慢，并維持長(zhǎng)時(shí)間不死。n d224。,③營(yíng)養(yǎng)成分 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括碳源、氮源、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、微量元素、生長(zhǎng)因子等。,⑤支持物 體外培養(yǎng)(p233。據(jù)報(bào)道，對(duì)培養(yǎng)基硒含量的要求與氧濃度有關(guān)，硒有助于除去呈自由基狀態(tài)的氧。提高(t237。用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基可以分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基兩大類。,天然培養(yǎng)基的種類很多，包括生物性體液（如血清）、組織浸出液（如胚胎浸出液）、凝固劑（如血漿）等。用于組織培養(yǎng)的血清種類很多，其來(lái)源主要是動(dòng)物，有小牛血清、胎牛血清、馬血清、兔血清以及人血清等，最廣泛使用的是小牛血清和胎牛血清。一般使用(shǐy242。一般配制成0.5%的溶液，或與合成培養(yǎng)基以1：1共同使用。n)篩選、強(qiáng)化和重新組合后形成的培養(yǎng)基。細(xì)胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白質(zhì)。nɡ l232。培養(yǎng)基中的無(wú)機(jī)離子除K+、Na+等外，還含有Fe2+、Zn2+、Cu2+等微量離子。 盡管現(xiàn)在的合成培養(yǎng)基成分和含量已經(jīng)較為復(fù)雜，但仍然不能完全滿足體外培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)的需要，合成培養(yǎng)基中還是需要加入一定量的天然培養(yǎng)基予以補(bǔ)充。nɡ)的合成培養(yǎng)基,目前合成培養(yǎng)基的種類已有數(shù)十種，大多數(shù)培養(yǎng)基都是為適應(yīng)某種組織細(xì)胞的生長(zhǎng)而在某種合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上改良而來(lái)的。,第三十頁(yè)，共八十頁(yè)。其種類很多，包括大分子、小分子物質(zhì)和微量元素等。i)無(wú)血清培養(yǎng)基：,第三十三頁(yè)，共八十頁(yè)。 （2）緩沖能力：碳酸鹽緩沖系統(tǒng)由于毒性小、成本低，對(duì)培養(yǎng)物有營(yíng)養(yǎng)作用，因此比其他緩沖系統(tǒng)用得多。 （4）黏度：培養(yǎng)基黏度受血清含量影響，在多數(shù)情況下，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)沒(méi)有什么影響。)細(xì)胞培養(yǎng)方法,第三十五頁(yè)，共八十頁(yè)。 懸浮培養(yǎng)對(duì)設(shè)備的要求(yāoqi由于(y243。,細(xì)胞貼壁一般分為貼壁因子(yīnzǐ)吸附于培養(yǎng)表面、細(xì)胞與表面接觸、細(xì)胞貼壁于培養(yǎng)表面和壁細(xì)胞在培養(yǎng)表面上擴(kuò)展等幾個(gè)步驟。bāo)，有適用于非帖壁依賴性細(xì)胞(x236。bāo)通常采用膠原包埋，而對(duì)于非貼壁依賴性細(xì)胞(x236。,第三十九頁(yè)，共八十頁(yè)。ngw249。ngyǎng)培養(yǎng)基，使細(xì)胞在培養(yǎng)基中增殖到覆蓋瓶壁表面，用酶把細(xì)胞從瓶壁上消化下來(lái)，再接種到若干培養(yǎng)瓶中進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，將培養(yǎng)所得的細(xì)胞“種子”冷藏于液氮中，從液氮中取出一部分細(xì)胞“種子”進(jìn)行解凍、復(fù)活培養(yǎng)，進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)以獲得足夠的細(xì)胞量，將細(xì)胞接種于大規(guī)模生物反應(yīng)器中進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)，按照產(chǎn)物的不同形式進(jìn)行產(chǎn)物分離純化。)細(xì)胞的培養(yǎng),一、植物細(xì)胞培養(yǎng)流程 二、植物細(xì)胞(x236。tǐ)培養(yǎng)基中，進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，使組織分散成游離的懸浮細(xì)胞，通過(guò)繼代培養(yǎng)使細(xì)胞增殖，獲得大量的細(xì)胞群體。 lu243。,第四十四頁(yè)，共八十頁(yè)。,一、植物(zh237。 種子消毒后在無(wú)菌狀態(tài)下發(fā)芽，將其組織的一部分在半固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，隨著細(xì)胞增殖(zēngzh237。,第四十六頁(yè)，共八十頁(yè)。w249。,第四十八頁(yè)，共八十頁(yè)。其他(q237。有機(jī)氮源對(duì)細(xì)胞的初級(jí)培養(yǎng)的早期生長(zhǎng)階段有利。ngd249。)一般采用25～40mmol/L，雖然硝酸鹽可以單獨(dú)成為無(wú)機(jī)氮源，但是加入銨鹽對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有利，如果添加一些琥珀酸或其他有機(jī)酸，銨鹽也能單獨(dú)成為氮源。ngd249。激素分成兩類既生長(zhǎng)素和分裂素。分裂素和生長(zhǎng)素通常是一起(yīqǐ)使用，促使細(xì)胞分裂、生長(zhǎng)。shǎo)提高到10mmol。,第五十三頁(yè)，共八十頁(yè)。ng)的無(wú)機(jī)鹽、碳源、維生素、有機(jī)酸和植物生長(zhǎng)激素都應(yīng)該采用最高純度級(jí)的試劑和藥品。對(duì)于一些熱敏性化合物，滅菌時(shí)不可采用加熱法，而應(yīng)該采用過(guò)濾法滅菌，然后無(wú)菌操作加入到已滅菌的培養(yǎng)基。)細(xì)胞培養(yǎng)的方法,單倍體細(xì)胞培養(yǎng) 原生質(zhì)體培養(yǎng) 固體(g249。,第五十六頁(yè)，共八十頁(yè)。實(shí)際(sh237。,固體(g249。,第五十八頁(yè)，共八十頁(yè)。)細(xì)胞培養(yǎng)方法。,第五十九頁(yè)，共八十頁(yè)。在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，需要提供容易破裂的愈創(chuàng)組織(zǔzhī)進(jìn)行液體振蕩培養(yǎng)，愈傷組織(zǔzhī)經(jīng)過(guò)懸浮培養(yǎng)可以產(chǎn)生比較純一的單細(xì)胞。iyǎng),固定化培養(yǎng)是在微生物和酶的固定化培養(yǎng)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的植物細(xì)胞培養(yǎng)方法。,第六十一頁(yè)，共八十頁(yè)。,植物細(xì)胞(x236。,第六十三頁(yè)，共八十頁(yè)。,②植物細(xì)胞的纖維素細(xì)胞壁使得其外骨架(gǔji224。,（2）植物(zh237。,第六十六頁(yè)，共八十頁(yè)。由于植物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)對(duì)溶氧的變化非常敏感，太高太低都會(huì)對(duì)培養(yǎng)過(guò)程產(chǎn)生不良的影響，因此，大規(guī)模植物細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)供氧和尾氣氧的監(jiān)控十分重要。bāo)或原生質(zhì)體的固定化培養(yǎng),（1）植物細(xì)胞固定化 ①海藻(hǎi zǎo)酸鹽固定化 ②卡拉膠固定化 ③瓊脂糖固定化 ④瓊脂固定化 （2）原生質(zhì)體固定化,第六十八頁(yè)，共八十頁(yè)。n xiē)培養(yǎng)： ①流加間歇培養(yǎng) ②兩級(jí)或多級(jí)間歇培養(yǎng) 連續(xù)培養(yǎng)： ①單級(jí)連續(xù)培養(yǎng) ②多級(jí)連續(xù)培養(yǎng) ③回流式連續(xù)培養(yǎng) 固定化細(xì)胞培養(yǎng),第六十九頁(yè)，共八十頁(yè)。x236。ng)表達(dá)某些碳源與動(dòng)植物細(xì)胞生長(zhǎng)速率間的關(guān)系。)常數(shù)m及氧的比消耗速率QO2的關(guān)系為：,在植物細(xì)胞培養(yǎng)中消耗(xiāoh224。,細(xì)胞(x236。nɡ)表達(dá)： 總之，動(dòng)植物細(xì)胞生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)借鑒微生物反應(yīng)動(dòng)力學(xué)理論。ng)期），但培養(yǎng)的總周期較長(zhǎng)，即生長(zhǎng)緩慢。jiān)t=t和t=0時(shí)的細(xì)胞濃度。ngd249。)細(xì)胞培養(yǎng)方法,非帖壁依賴性細(xì)胞培養(yǎng),帖壁依賴性細(xì)胞培養(yǎng),轉(zhuǎn)化(zhuǎnhu224。n li,③非均質(zhì)系統(tǒng)——如邊灌流邊用過(guò)濾膜將細(xì)胞加以固定。ir243。zh236。所有的植物細(xì)胞都是好氣性的，需要連續(xù)供氧