【正文】 強，如溫度升至45℃時，1h內(nèi)人和哺乳動物細胞將被殺死；相反，降低溫度把細胞置于25～35℃時，細胞仍能生長，但速度減慢，并維持長時間不死。n d224。,③營養(yǎng)成分 營養(yǎng)物質(zhì)包括碳源、氮源、氨基酸、無機鹽、微量元素、生長因子等。,⑤支持物 體外培養(yǎng)(p233。據(jù)報道，對培養(yǎng)基硒含量的要求與氧濃度有關(guān)，硒有助于除去呈自由基狀態(tài)的氧。提高(t237。用于動物細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基可以分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基兩大類。,天然培養(yǎng)基的種類很多，包括生物性體液（如血清）、組織浸出液（如胚胎浸出液）、凝固劑（如血漿）等。用于組織培養(yǎng)的血清種類很多，其來源主要是動物，有小牛血清、胎牛血清、馬血清、兔血清以及人血清等，最廣泛使用的是小牛血清和胎牛血清。一般使用(shǐy242。一般配制成0.5%的溶液，或與合成培養(yǎng)基以1：1共同使用。n)篩選、強化和重新組合后形成的培養(yǎng)基。細胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白質(zhì)。nɡ l232。培養(yǎng)基中的無機離子除K+、Na+等外，還含有Fe2+、Zn2+、Cu2+等微量離子。 盡管現(xiàn)在的合成培養(yǎng)基成分和含量已經(jīng)較為復(fù)雜，但仍然不能完全滿足體外培養(yǎng)細胞生長的需要，合成培養(yǎng)基中還是需要加入一定量的天然培養(yǎng)基予以補充。nɡ)的合成培養(yǎng)基,目前合成培養(yǎng)基的種類已有數(shù)十種，大多數(shù)培養(yǎng)基都是為適應(yīng)某種組織細胞的生長而在某種合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上改良而來的。,第三十頁，共八十頁。其種類很多，包括大分子、小分子物質(zhì)和微量元素等。i)無血清培養(yǎng)基：,第三十三頁，共八十頁。 （2）緩沖能力：碳酸鹽緩沖系統(tǒng)由于毒性小、成本低，對培養(yǎng)物有營養(yǎng)作用，因此比其他緩沖系統(tǒng)用得多。 （4）黏度：培養(yǎng)基黏度受血清含量影響，在多數(shù)情況下，對細胞生長沒有什么影響。)細胞培養(yǎng)方法,第三十五頁，共八十頁。 懸浮培養(yǎng)對設(shè)備的要求(yāoqi由于(y243。,細胞貼壁一般分為貼壁因子(yīnzǐ)吸附于培養(yǎng)表面、細胞與表面接觸、細胞貼壁于培養(yǎng)表面和壁細胞在培養(yǎng)表面上擴展等幾個步驟。bāo)，有適用于非帖壁依賴性細胞(x236。bāo)通常采用膠原包埋，而對于非貼壁依賴性細胞(x236。,第三十九頁，共八十頁。ngw249。ngyǎng)培養(yǎng)基，使細胞在培養(yǎng)基中增殖到覆蓋瓶壁表面，用酶把細胞從瓶壁上消化下來，再接種到若干培養(yǎng)瓶中進行擴大培養(yǎng)，將培養(yǎng)所得的細胞“種子”冷藏于液氮中，從液氮中取出一部分細胞“種子”進行解凍、復(fù)活培養(yǎng)，進行擴大培養(yǎng)以獲得足夠的細胞量，將細胞接種于大規(guī)模生物反應(yīng)器中進行大規(guī)模培養(yǎng)，按照產(chǎn)物的不同形式進行產(chǎn)物分離純化。)細胞的培養(yǎng),一、植物細胞培養(yǎng)流程 二、植物細胞(x236。tǐ)培養(yǎng)基中，進行振蕩培養(yǎng)，使組織分散成游離的懸浮細胞，通過繼代培養(yǎng)使細胞增殖，獲得大量的細胞群體。 lu243。,第四十四頁，共八十頁。,一、植物(zh237。 種子消毒后在無菌狀態(tài)下發(fā)芽，將其組織的一部分在半固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，隨著細胞增殖(zēngzh237。,第四十六頁，共八十頁。w249。,第四十八頁，共八十頁。其他(q237。有機氮源對細胞的初級培養(yǎng)的早期生長階段有利。ngd249。)一般采用25～40mmol/L，雖然硝酸鹽可以單獨成為無機氮源，但是加入銨鹽對細胞生長有利，如果添加一些琥珀酸或其他有機酸，銨鹽也能單獨成為氮源。ngd249。激素分成兩類既生長素和分裂素。分裂素和生長素通常是一起(yīqǐ)使用，促使細胞分裂、生長。shǎo)提高到10mmol。,第五十三頁，共八十頁。ng)的無機鹽、碳源、維生素、有機酸和植物生長激素都應(yīng)該采用最高純度級的試劑和藥品。對于一些熱敏性化合物，滅菌時不可采用加熱法，而應(yīng)該采用過濾法滅菌，然后無菌操作加入到已滅菌的培養(yǎng)基。)細胞培養(yǎng)的方法,單倍體細胞培養(yǎng) 原生質(zhì)體培養(yǎng) 固體(g249。,第五十六頁，共八十頁。實際(sh237。,固體(g249。,第五十八頁，共八十頁。)細胞培養(yǎng)方法。,第五十九頁，共八十頁。在進行細胞培養(yǎng)時，需要提供容易破裂的愈創(chuàng)組織(zǔzhī)進行液體振蕩培養(yǎng)，愈傷組織(zǔzhī)經(jīng)過懸浮培養(yǎng)可以產(chǎn)生比較純一的單細胞。iyǎng),固定化培養(yǎng)是在微生物和酶的固定化培養(yǎng)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的植物細胞培養(yǎng)方法。,第六十一頁，共八十頁。,植物細胞(x236。,第六十三頁，共八十頁。,②植物細胞的纖維素細胞壁使得其外骨架(gǔji224。,（2）植物(zh237。,第六十六頁，共八十頁。由于植物細胞培養(yǎng)時對溶氧的變化非常敏感，太高太低都會對培養(yǎng)過程產(chǎn)生不良的影響，因此，大規(guī)模植物細胞培養(yǎng)對供氧和尾氣氧的監(jiān)控十分重要。bāo)或原生質(zhì)體的固定化培養(yǎng),（1）植物細胞固定化 ①海藻(hǎi zǎo)酸鹽固定化 ②卡拉膠固定化 ③瓊脂糖固定化 ④瓊脂固定化 （2）原生質(zhì)體固定化,第六十八頁，共八十頁。n xiē)培養(yǎng)： ①流加間歇培養(yǎng) ②兩級或多級間歇培養(yǎng) 連續(xù)培養(yǎng)： ①單級連續(xù)培養(yǎng) ②多級連續(xù)培養(yǎng) ③回流式連續(xù)培養(yǎng) 固定化細胞培養(yǎng),第六十九頁，共八十頁。x236。ng)表達某些碳源與動植物細胞生長速率間的關(guān)系。)常數(shù)m及氧的比消耗速率QO2的關(guān)系為：,在植物細胞培養(yǎng)中消耗(xiāoh224。,細胞(x236。nɡ)表達： 總之，動植物細胞生長動力學(xué)借鑒微生物反應(yīng)動力學(xué)理論。ng)期），但培養(yǎng)的總周期較長，即生長緩慢。jiān)t=t和t=0時的細胞濃度。ngd249。)細胞培養(yǎng)方法,非帖壁依賴性細胞培養(yǎng),帖壁依賴性細胞培養(yǎng),轉(zhuǎn)化(zhuǎnhu224。n li,③非均質(zhì)系統(tǒng)——如邊灌流邊用過濾膜將細胞加以固定。ir243。zh236。所有的植物細胞都是好氣性的，需要連續(xù)供氧