【正文】 用常規(guī)法，現(xiàn)對常規(guī)法介紹如下： 常規(guī)法是微生物限度檢查中最重要也是最基本的方法。 微生物限度檢查方法驗(yàn)證的內(nèi)容 微生物的生長受許多因素的影響，特別是藥品污染中的微生物尤為如此。而為了保證檢驗(yàn)結(jié)果的科學(xué)性和準(zhǔn)確性，微牛物限度檢查法需要經(jīng)過驗(yàn)證。其中，菌落計數(shù)和控制菌檢查屬于微生物限度檢查的內(nèi)容。 在菌落計數(shù)方法學(xué)驗(yàn)證中，選取大腸埃希菌 (Escherichiacoli)[CMCC(B)441 02]、金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)[CMCC(B)26 003]、枯草芽孢桿菌 (Bacillus subtilis)[CMCC(B)63 501]、白色念珠菌 (Candida albicans， [CMCC(F)98001]、黑曲霉 (Aspergillus niger， [CMCC(F)98 003]五種菌作 為驗(yàn)證菌株。 大腸埃希菌 (Escherichiacoli)[CMCC(B)44 1 02] 前面控制菌檢查中已經(jīng)提及，所以不再贅述。 金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)[CMCC(B)26 003] 前面控制菌檢查中亦已經(jīng)提及，所以也不再贅述。 枯草 芽孢桿菌 (Bacillus subtilis)[CMCC(B)63 50 1] 枯草芽孢桿菌是芽孢桿菌屬的一種，廣泛分布在土壤及腐敗的有機(jī)物中，因易在枯草浸汁中繁殖而得名?？莶菅挎邨U菌通常作為芽孢菌的代表 . 黑曲霉 (Aspergillus niger， [CMCC(F)98 003] 黑曲霉屬半知菌亞門真菌。分生孢子頭褐黑色呈放射狀；分生孢子梗長短不一，頂囊球形，雙層小梗；分生孢子褐色球形。 陜西科技大學(xué)畢業(yè)論文 8 8 白色念珠菌 (Candida albicans， [CMCC(F)98 00 1] 白色念珠菌通常存在于正常人的口腔、上呼吸道、腸道及陰道，一般在正常機(jī)體中數(shù)量較少，不容易引起疾病。本菌細(xì)胞呈卵圓形，很象酵母菌， 比葡萄球菌大 5～ 6倍，革蘭氏染色陽性，但著色不均勻。該法操作簡單，是藥品檢驗(yàn)的常用方法之一。常規(guī)法不需要特殊的儀器，是微牛物限度檢查最簡單便捷的方法。． 9％氯化鈉 (分析純，天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司，批號 :20200302）溶液， 菌種 金黃色葡萄球菌 [CmCC(B)26003]、大腸埃希菌 [CMCC(B)44102]、枯草芽孢桿菌[CMCC(B)63501]、乙型副傷寒沙門菌 [CMCC(B)50094]、白色念珠菌 [CMCC(F)10123]；均購自中國藥品生物制品檢定所；黑曲霉 (ATCCl6404)購自于廣東省微生物研究所。 供試品溶液的制備 感冒清膠囊：稱取供試品 10g，加無菌 pH7． 0 氯化鈉．蛋白胨緩沖溶液至 100ml，45℃水浴溫?zé)嶂寥咳芙?，制?l： lO均勻的供試液。在相應(yīng)的溫度下培養(yǎng) (細(xì)菌在 30～ 35℃培養(yǎng)48 小時，霉菌在 23～ 28℃培養(yǎng) 72小時 )，點(diǎn)計菌落數(shù)，取均值。 菌液組 測定加入的試驗(yàn)菌數(shù) 供試品對照組 按試驗(yàn)組的方法，不加菌液，測定供試品菌數(shù) (本底菌 )。另外，感冒清膠囊因其含原藥材投料，所以還需進(jìn)行大腸菌群的檢查。 陽性對照 取大腸埃希菌菌懸液 lml，加入相應(yīng)規(guī)定量的增菌培養(yǎng)基 (檢查大腸埃希菌用膽鹽乳糖培養(yǎng)基，大腸菌群用膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基中 )，按藥典方法檢查。果見表 22 表 22 大腸埃希菌驗(yàn)證結(jié)果 品種 批號 膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)組 膽鹽 乳糖發(fā) 酵培養(yǎng) 基陽性 對照組 膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基陰性對照組 MUG試驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)組 MUG試驗(yàn) 陽性對照 MUG試 驗(yàn) 陰性對照 UV 檢測 靛基質(zhì)試驗(yàn) UV 檢測 靛基質(zhì)試驗(yàn) UV檢測 靛基質(zhì)試驗(yàn) 感冒清膠囊 121230 + + — + + + + — — 131202 + + — + + + + — — 141127 + + — + + + + — — (表中‘‘ +，’表示在培養(yǎng)基中呈附性反應(yīng)或在試劑中呈正反應(yīng)；“ ’’表示不呈陽性反應(yīng)或在試劑中不呈正反應(yīng)；‘‘士’’表示在未能通過觀察判斷結(jié)果 ) 表 2— 2 表明，各控制菌陽性對照均能生長，陰性對照 無菌生長 ， 試驗(yàn)組均能生長，可用常規(guī)法檢查大腸 埃希菌。 陜西科技大學(xué)畢業(yè)論文 12 12 結(jié)論 感冒清膠囊細(xì)菌、霉菌及酵母菌、控制菌可采用常規(guī)法做微生物限度檢查。但其含量相對于整個制劑 (包括輔料 )來說是比較低的。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明其抑菌作用小， 所以可采用常規(guī)法進(jìn)行微生物限度檢查 。由菌絲和孢子組成，許多菌絲交織在一起成為菌絲體。某些菌絲在生長發(fā)育到一定階段后產(chǎn)生孢子 [12]。儲備液的制備，應(yīng)注意質(zhì)量較輕的菌絲的影響。 建議 ： 了解藥品的處方組成是微生物限度檢查的前提。因?yàn)橥ㄟ^藥品的處方和工藝流程可以幫助我們了解制劑中是否含有抑菌作用的藥材或添加物，然后通過適當(dāng)?shù)姆椒ㄈコ驕p少其抑菌影響，提高檢查的準(zhǔn)確度。 [16]雙香豆素類、醌類、葸醌類、黃酮類、揮發(fā)油、生物堿等物質(zhì)對細(xì)菌都有一定的抑制作用。 Manik 等人 [17]研究了 49 種五環(huán)三萜類化合物的抗真菌活性，研究表明 C． 27或 28位有游離羧酸的齊敦果酸和長春藤皂苷元的皂苷具有較強(qiáng)的抗真菌活性。具有上述這些結(jié)構(gòu)的中藥材很多，中成藥中含有的連翹、大黃、黃芩、冰片、天花粉、知母、丹參、甘草 等。 預(yù)試驗(yàn)時，可先驗(yàn)證金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌的回收率。所以在做樣品預(yù)試驗(yàn)的時候，可先選用這 兩種菌進(jìn)行驗(yàn)證。細(xì)菌計數(shù)大腸埃希菌采用常規(guī)法回收率能達(dá)到要求的，控制菌都可以采用常規(guī)法檢查。對于口服制劑來說，大多數(shù)中成藥的抑菌作用是有限的，一般可采用常規(guī)平皿法或培養(yǎng)基稀釋法： 為節(jié)約成本，創(chuàng)造良好的經(jīng)濟(jì)效益，可用簡單的常規(guī)法或培養(yǎng)基稀釋法進(jìn)行檢查的供試品，就不需要用到消耗量較大的薄膜過濾法。經(jīng)歷了這次畢業(yè)設(shè)計，不僅對我的學(xué)習(xí)提供了幫助，而且在各方面也得到了鍛煉。同時我還要感謝我的指導(dǎo)老師 余展旺 老師對此次畢業(yè)設(shè)計的精心安排和耐心指導(dǎo)。使我在查閱資料、克服困難、編排創(chuàng)興上都有了很大的提高。 謝謝！