不同類(lèi)型細(xì)胞的培養(yǎng)特點(diǎn)-在線瀏覽
2024-10-06 02:43本頁(yè)面
【正文】 ) 吸出含有內(nèi)皮細(xì)胞的消化液，注入離心管中；為獲取更多細(xì)胞，可再注入溫 PBS 沖洗 2 ~ 3 次徹底去除干凈剩余細(xì)胞，一并注入離心管中離心； (5) 吸除上清，加 1640 培養(yǎng)液，制成細(xì)胞懸液，接種入瓶皿中培養(yǎng)，順利時(shí) 2 ~ 3 天內(nèi)細(xì)胞即可長(zhǎng)成單層。 第二十二頁(yè)，共七十頁(yè)。用兔血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)較好，可傳 10 ~ 30 代； ?不同部位血管內(nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)性狀不同，對(duì)各種作用因素反響亦有很大差異。 (五 ) 毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng) ?毛細(xì)血管細(xì)小，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，內(nèi)皮細(xì)胞外有較多的結(jié)締組織，進(jìn)行別離培養(yǎng)有很大困難。 1．材料： [腫瘤條件培養(yǎng)基制備 ] (1) 取 C3H 小鼠的 S180 實(shí)體肉瘤組織； (2) 胰蛋白酶消化， Dulbecco 改進(jìn) Eagle 氏培養(yǎng)液 15m1 (含 10％小牛血清 ) 種到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)； 第二十五頁(yè)，共七十頁(yè)。 [凝膠底層制備 ] (1) 取 60 mm Falcon 產(chǎn)培養(yǎng)皿，加 1% Difco 產(chǎn)明膠 (用不合鈣和鎂的 Hanks 液配制 )，鋪蓋瓶底，形成薄層； (2) 置 4℃ 過(guò)夜；用前再用少許培養(yǎng)液沖洗一次。 2．初代培養(yǎng) (1) 取材：取新鮮牛腎上腺數(shù)個(gè)，先用 Hanks 液洗除血污； (2) 消化：剝除被膜，別離出皮質(zhì)，切成 l mm3 小塊，加 ％膠原酶室溫中消化 1 小時(shí)；每隔 10 分鐘用吸管吹打懸液令消化充分； (3)過(guò)濾：通過(guò)不銹鋼紗網(wǎng)濾過(guò)，網(wǎng)眼要求只允許能通過(guò)小于 110 微米長(zhǎng)的毛細(xì)血管小段； (4)離心： 650 rpm， 4℃ ，離心 7 分鐘后，棄掉上清膠原酶； 第二十七頁(yè)，共七十頁(yè)。毛細(xì)血管小段一般成自 1 ~ 4 個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞， 以后每個(gè)小段在底物上慢慢展成特殊形態(tài)的細(xì)胞島，能持續(xù) 2 ~ 5 天。 3．毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞別離培養(yǎng)： (1) 初代培養(yǎng) 2 ~ 3 天后，鏡下確認(rèn)幾個(gè)毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞島，在培養(yǎng)皿反面，用不脫色筆劃圈圈起； (2) 鏡下檢查，如圈內(nèi)殘有非內(nèi)皮細(xì)胞時(shí)，可用顯微細(xì)針在倒置顯微鏡下挑除；用細(xì)胞解剖器也可，宜在凈化臺(tái)無(wú)菌氣流中、翻開(kāi)培養(yǎng)皿蓋進(jìn)行，但時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng) (15 ~ 20 分鐘 )；圈外非內(nèi)皮細(xì)胞可用無(wú)菌膠刮刮除； 第二十九頁(yè)，共七十頁(yè)。 第三十頁(yè)，共七十頁(yè)。 二、結(jié)締組織類(lèi)細(xì)胞培養(yǎng) (一 ) 成纖維細(xì)胞培養(yǎng) ?包括人在內(nèi)的各種成纖維細(xì)胞都很容易培養(yǎng)，也是其它組織培養(yǎng)時(shí)的副產(chǎn)物，極易獲得。幼兒包皮是培養(yǎng)成纖維細(xì)胞的很好對(duì)象。 小鼠成纖維細(xì)胞培養(yǎng)條件 ? ~； ?最佳答案培養(yǎng)基為 DMEM添加 15%小牛血清； ?第 3代細(xì)胞增殖最旺盛； ?室溫條件下， %胰蛋白酶消化時(shí)間以8~10min為宜。 第三十三頁(yè)，共七十頁(yè)。 第三十五頁(yè)，共七十頁(yè)。 ? 巨噬細(xì)胞容易獲得，便于培養(yǎng)，并可進(jìn)行純化。 ? 巨噬細(xì)胞也能建成無(wú)限細(xì)胞系；大多來(lái)自小鼠，如P388D J774A． RAW30 Cr. 1 等。 1．培養(yǎng)技術(shù)要點(diǎn)： ?[來(lái)源和取材 ] 巨噬細(xì)胞可來(lái)源于人胸水、腹水、血和透析液等材料。用 40μg 的PHA 注入腹腔中，能產(chǎn)生 6 ~ 8 106 個(gè)細(xì)胞，而且無(wú)刺激性，效果較好。 2．培養(yǎng)方法： ? 培養(yǎng)巨噬細(xì)胞可用各種方法和各種來(lái)源獲取細(xì)胞，其中以小鼠腹腔取材法最為實(shí)用。 ? [程序 ] (1) 實(shí)驗(yàn)前三天，向每只小鼠腹腔內(nèi)注入無(wú)菌硫基乙酸肉湯 1ml (勿注入腸內(nèi) )； (2) 引頸殺死動(dòng)物；手提鼠尾將全鼠浸入 70％酒精中 3 ~ 5 秒； (3) 置動(dòng)物于解剖臺(tái)上，用針頭固定四肢，雙手持鑷撕開(kāi)皮膚拉向兩側(cè)，暴露出腹膜，但勿傷及腹膜壁； (4) 再用 70％酒精擦洗腹膜壁后，用注射器吸 10ml Eag1e 液注入腹腔中，同時(shí)從兩側(cè)用手指揉壓腹膜壁，令液體在腹腔內(nèi)充分流動(dòng)； 第三十八頁(yè)，共七十頁(yè)。 第三十九頁(yè)，共七十頁(yè)。 三、肌組織細(xì)胞培養(yǎng) ? 以心肌和骨骼肌培養(yǎng)較為實(shí)用。取材常用生后 1 ~ 2 天的乳鼠 (Wistar 大鼠更好 )。 (3)接種：細(xì)胞接種量為 2 106/皿；接種在膠原或明膠的底物上能促進(jìn)細(xì)胞分化。 生長(zhǎng)特點(diǎn)：細(xì)胞生長(zhǎng)開(kāi)始呈紡錘形，培養(yǎng) 50 ~ 52 小時(shí)后將出現(xiàn)融合形成肌細(xì)胞狀多核纖維。一般在融合后二三天內(nèi)能見(jiàn)到收縮現(xiàn)象；因收縮運(yùn)動(dòng)有時(shí)可導(dǎo)致細(xì)胞從底物脫離。 (二 ) 心肌細(xì)胞培養(yǎng) ?最常用材料： ?雞胚心肌、小鼠、大鼠以及人胎兒心肌等都可應(yīng)用。 第四十三頁(yè)，共七十頁(yè)。初代培養(yǎng)的雞胚心肌呈紡錘形， ? 純化及生長(zhǎng)特點(diǎn)：常雜有成纖維細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞；心肌細(xì)胞亦較其它成分貼壁慢，可反復(fù)貼壁法排除其它細(xì)胞成分。 第四十四頁(yè)，共七十頁(yè)。 第四十六頁(yè)，共七十頁(yè)。 神經(jīng)元為高度分化的細(xì)胞，在組織發(fā)生晚期已失掉增殖能力，對(duì)生存條件要求高，只有在適宜情況下，如接種在膠原底層上，或在參加神經(jīng)生長(zhǎng)因子
環(huán)評(píng)公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1