不同類型細(xì)胞的培養(yǎng)特點(diǎn)(完整版)
【正文】 次、計(jì)數(shù)、接種培養(yǎng)； 第十六頁，共七十頁。 2. 其它如胚胎和幼體動(dòng)物的大血管，亦可用于培養(yǎng)； (2) 先用三通注射器吸 溫 PBS 液注入臍帶的臍靜脈中，洗除殘血 ；注入口處宜用線繩結(jié)扎，以防液體返流； 第二十頁，共七十頁。 ?近年毛細(xì)血管培養(yǎng)已獲成功； ?利用人的小兒包皮、人脾臟、牛腎上腺、癌組織 (如卵巢癌 ) 等均可； 第二十四頁，共七十頁。 第二十八頁，共七十頁。 第三十二頁，共七十頁。但屬不繁殖型細(xì)胞群，難以長期生存，好的條件下僅能生活 2 ~ 3周，因之多用作初代培養(yǎng) 。人的材料除來源不同外，培養(yǎng)方法大同小異。 (1) 取材 ： 殺死動(dòng)物，無菌取大腿肌組織，切成 ~ 厘米小塊； (2)消化 ： 用不含鈣鎂離子的 Hanks 液配的 ％胰蛋白酶消化，無菌紗網(wǎng)或紗布濾過，合成培養(yǎng)基加 10％小牛 (或馬 )血清培養(yǎng)， 為促進(jìn)分化可加 1％ 的胎汁； 第四十一頁，共七十頁。 ?心肌是比較容易培養(yǎng)和生長的組織，可應(yīng)用多種方法進(jìn)行培養(yǎng)，如懸滴培養(yǎng)、組織塊培養(yǎng)和消化培養(yǎng)法等，主要取心室肌培養(yǎng)，均能獲得良好的生長效果。 四、神經(jīng)組織細(xì)胞培養(yǎng) 神經(jīng)組織主要由兩種神經(jīng)細(xì)胞 (神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞〕組成。 第五十一頁，共七十頁。 2．生長特點(diǎn)： ?接種后初期，細(xì)胞可能出現(xiàn)飄浮不貼壁現(xiàn)象，貼壁后在短期內(nèi)也可能不見細(xì)胞分裂現(xiàn)象；細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境過程較長，然而一旦生長后，即能進(jìn)入較旺盛的增殖狀態(tài)。取材時(shí)盡量防止用退變組織，要挑選活力較好的部位。 3．成纖維細(xì)胞的排除： ?成纖維細(xì)胞常與腫瘤細(xì)胞同時(shí)混雜生長，致難以純化腫瘤細(xì)胞。 第六十一頁，共七十頁。 4．膠原酶消化法： 本法是利用成纖維細(xì)胞對(duì)膠原酶較為敏感的特點(diǎn)，通過消化進(jìn)行選擇。 第六十五頁，共七十頁。 肝癌細(xì)胞 第六十八頁，共七十頁。 。 內(nèi)容總結(jié) 第六章 個(gè)別細(xì)胞和組織的培養(yǎng)。 2．生長因子： ? 應(yīng)用促細(xì)胞生長因子，向培養(yǎng)液中增加一種或幾種促細(xì)胞生長因子。如成纖維細(xì)胞末被除凈，可再次重復(fù)。如操作成功，次日觀察可見 A 瓶主要為成纖維細(xì)胞， B 瓶兩類細(xì)胞相雜， C 瓶可能主要為癌細(xì)胞。因此排除成纖維細(xì)胞成為腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)中的關(guān)鍵。 第五十七頁，共七十頁。 第二節(jié) 腫瘤細(xì)胞培養(yǎng) ?腫瘤細(xì)胞在組織培養(yǎng)中占有核心的位置，首先癌細(xì)胞是比較容易培養(yǎng)的細(xì)胞，當(dāng)前建立的細(xì)胞系中癌細(xì)胞系是最多的。 ? (二 ) 傳代培養(yǎng) ? 神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞是神經(jīng)組織中比較容易培養(yǎng)的成分。 第四十七頁，共七十頁。 ? [程序 ] ? (1) 選新鮮受精雞卵，置溫箱中孵育 (溫箱中放有水槽，以維持箱內(nèi)濕度 )；每日翻動(dòng)一次 (180 度 )，孵育 9 ~ 12 天； ? (2) 取雞胎； ? (3) 用眼科剪剪開胸腔，剝出心臟，置入皿中用 Hanks 液漂洗1 ~ 2 次； ? (4) 小心剪除大的動(dòng)靜脈，保存心室?。挥媒M織塊或消化培養(yǎng)法均可。 明膠制備比較簡(jiǎn)單，常用 Hanks 液配的 ％明膠。 (5) 用針頭輕輕挑起腹壁，使動(dòng)物體微傾向一側(cè)，使腹腔中液體集于針頭下吸取入針管內(nèi)； (6) 小心拔出針頭，把液體注入離心管中， (4℃ )離心 10 分鐘后，去上清，加 10 ml Eagle 培養(yǎng)基； (7) 計(jì)數(shù)細(xì)胞，每只小鼠可產(chǎn)生 20 ~ 30 106 細(xì)胞，其中90％為巨噬細(xì)胞； (8) 為獲取 3 105 個(gè)貼附細(xì)胞／平方厘米，需接種 106／ m1； (9) 為純化培養(yǎng)細(xì)胞，去除其它白細(xì)胞，接種數(shù)小時(shí)后，去除培養(yǎng)液，用 Eagle 液沖洗 1 ~ 2 次后，再加新Eagle 培養(yǎng)液置 37℃ CO2 溫箱中培養(yǎng)。 第三十六頁，共七十頁。 ?在培養(yǎng) ES細(xì)胞時(shí)，應(yīng)選擇第 3~5代的小鼠成纖維細(xì)胞作為飼養(yǎng)層細(xì)胞。 (3) 用培養(yǎng)液漂洗兩次，以去除漂浮細(xì)胞； (4) 剩余內(nèi)皮細(xì)胞島如小 (5 ~ 20 個(gè)細(xì)胞 ) 而少時(shí)，生長增殖常變得緩慢或完全不生長，此時(shí)需參加 3T3等飼細(xì)胞；飼細(xì)胞接種量為 4000 細(xì)胞／ cm2； (5) 當(dāng)內(nèi)皮細(xì)胞充滿所有飼細(xì)胞空間后，用胰蛋白酶消化、離心、參加腫瘤條件培養(yǎng)基； (6) 接種入明膠底物皿中繼續(xù)培養(yǎng) (飼細(xì)胞死亡被淘汰 )，細(xì)胞增殖生長集合后，按 1:5 傳代。 (3) 在細(xì)胞生長接近完全集合時(shí)，收集培養(yǎng)液制成條件培養(yǎng)基；再用含 10％小牛血清的新培養(yǎng)液后，也每隔兩天收集一次，可獲多量條件培養(yǎng)基； (4) 4000 轉(zhuǎn)／別離心后，再通過 微孔濾膜濾過， 20℃ 凍存?zhèn)溆?(臨用前融解 )。 第二十一頁，共七十頁。 (1) 無菌解剖動(dòng)物，取出肝臟，先用 BSS 洗除血污； (2) 取 5ml 注射器一支，吸取消化液后，把 注射器頭輕輕插入肝管中 ，用線繩結(jié)扎牢固，以防消化液漏出，輕輕把消化液注入膽管系統(tǒng)，并不時(shí)輕柔壓肝臟，以便消化液進(jìn)入肝小葉中
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