不同類型細(xì)胞的培養(yǎng)特點(diǎn)(參考版)
2024-10-06 02:43本頁面
【正文】 。動物可用小鼠或雞胚，去頭和內(nèi)臟，剪成小碎塊后，用胰蛋白酶消化法培養(yǎng)。取新鮮肝臟，先剝除被膜和血管等纖維成分，用刀或剪刀把肝剪成 1mm3 左右的小塊，采用貼壁培養(yǎng)法。 內(nèi)容總結(jié) 第六章 個別細(xì)胞和組織的培養(yǎng)。 肝癌細(xì)胞 第六十八頁，共七十頁。 第六十六頁，共七十頁。 3．動物體媒介培養(yǎng)： ? 為提高腫瘤細(xì)胞對體外培養(yǎng)環(huán)境的適應(yīng)力和增加有活力癌細(xì)胞 (干細(xì)胞 ) 的數(shù)量，可采用動物體轉(zhuǎn)嫁接種成瘤后，再從動物體內(nèi)取出進(jìn)行培養(yǎng)，能提高體外培養(yǎng)的成功率。 2．生長因子： ? 應(yīng)用促細(xì)胞生長因子，向培養(yǎng)液中增加一種或幾種促細(xì)胞生長因子。 第六十五頁，共七十頁。最近也有人應(yīng)用特殊化學(xué)物如 SOD 抑制成纖維細(xì)胞生長的方法。 5．其它方法： 有人發(fā)現(xiàn)聚丙烯酰胺有抑制成纖維細(xì)胞生長的作用；也有人用聚蔗糖制備成比重 ~ 的密度梯度離心液，參加細(xì)胞懸液后，在 23℃ 中 800g 離心 10 分鐘。如成纖維細(xì)胞末被除凈，可再次重復(fù)。 4．膠原酶消化法： 本法是利用成纖維細(xì)胞對膠原酶較為敏感的特點(diǎn)，通過消化進(jìn)行選擇。用此法處理后， 成纖維細(xì)胞比腫瘤細(xì)胞易先脫落 ，經(jīng)過幾次反復(fù)處理，可能把成纖維細(xì)胞除凈。 第六十二頁，共七十頁。如操作成功，次日觀察可見 A 瓶主要為成纖維細(xì)胞， B 瓶兩類細(xì)胞相雜， C 瓶可能主要為癌細(xì)胞。 第六十一頁，共七十頁。 第六十頁，共七十頁。 成纖維細(xì)胞排除法 1．機(jī)械刮除法： 是用不銹鋼絲末端插有橡膠刮頭 (用膠塞剪成三角形插以不銹鋼絲 )，或裹少許脫脂棉制成，裝入試管中高壓滅菌后備用 (也可用特制電熱燒灼器刮除 )。因此排除成纖維細(xì)胞成為腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)中的關(guān)鍵。 3．成纖維細(xì)胞的排除： ?成纖維細(xì)胞常與腫瘤細(xì)胞同時混雜生長，致難以純化腫瘤細(xì)胞。 ? 培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞仍需加血清和相關(guān)生長因子培養(yǎng)更易成功。腫瘤細(xì)胞對血清的需求比正常細(xì)胞低，正常細(xì)胞培養(yǎng)不加血清不能生長，腫瘤細(xì)胞在低血清培養(yǎng)基中也能生長。 第五十七頁，共七十頁。取材時盡量防止用退變組織，要挑選活力較好的部位。 初代培養(yǎng)應(yīng)用組織塊和消化培養(yǎng)法均可。 第五十六頁，共七十頁。 第二節(jié) 腫瘤細(xì)胞培養(yǎng) ?腫瘤細(xì)胞在組織培養(yǎng)中占有核心的位置，首先癌細(xì)胞是比較容易培養(yǎng)的細(xì)胞，當(dāng)前建立的細(xì)胞系中癌細(xì)胞系是最多的。 2．生長特點(diǎn)： ?接種后初期，細(xì)胞可能出現(xiàn)飄浮不貼壁現(xiàn)象，貼壁后在短期內(nèi)也可能不見細(xì)胞分裂現(xiàn)象；細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境過程較長，然而一旦生長后，即能進(jìn)入較旺盛的增殖狀態(tài)。 (3)濾過、計(jì)數(shù)、接種：向末次沉降物中參加適量營養(yǎng)液，通過紗網(wǎng)或紗布濾過，計(jì)數(shù)細(xì)胞并調(diào)整好細(xì)胞密度，接種入培養(yǎng)瓶或皿中，置 5％ C02 溫箱中培養(yǎng)； (4)傳代：細(xì)胞生長集合后，可用 ％胰蛋白酶消化法做傳代處理。 第五十二頁，共七十頁。 ? (二 ) 傳代培養(yǎng) ? 神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞是神經(jīng)組織中比較容易培養(yǎng)的成分。 第五十一頁，共七十頁。 人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞 第四十九頁，共七十頁。 神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞與神經(jīng)元有共存關(guān)系。 第四十七頁，共七十頁。 四、神經(jīng)組織細(xì)胞培養(yǎng) 神經(jīng)組織主要由兩種神經(jīng)細(xì)胞 (神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞〕組成。 乳鼠心肌細(xì)胞原代培養(yǎng) 第四十五頁，共七十頁。在培養(yǎng)成功時，相差顯微鏡下可觀察到橫紋；一周后便可出現(xiàn)節(jié)律性收縮現(xiàn)象。 ? [程序 ] ? (1) 選新鮮受精雞卵，置溫箱中孵育 (溫箱中放有水槽，以維持箱內(nèi)濕度 )；每日翻動一次 (180 度 )，孵育 9 ~ 12 天； ? (2) 取雞胎； ? (3) 用眼科剪剪開胸腔，剝出心臟，置入皿中用 Hanks 液漂洗1 ~ 2 次； ? (4) 小心剪除大的動靜脈，保存心室肌；用組織塊或消化培養(yǎng)法均可。 ?心肌是比較容易培養(yǎng)和生長的組織，可應(yīng)用多種方法進(jìn)行培養(yǎng)，如懸滴培養(yǎng)、組織塊培養(yǎng)和消化培養(yǎng)法等，主要取心室肌培養(yǎng)，均能獲得良好的生長效果。 第四十二頁，共七十頁。數(shù)日后融合停止，此時能觀察到橫紋。 明膠制備比較簡單，常用 Hanks 液配的 ％明膠。 (1) 取材 ： 殺死動物，無菌取大腿肌組織，切成 ~ 厘米小塊； (2)消化 ： 用不含鈣鎂離子的 Hanks 液配的 ％胰蛋白酶消化，無菌紗網(wǎng)或紗布濾過，合成培養(yǎng)基加 10％小牛 (或馬 )血清培養(yǎng)， 為促進(jìn)分化可加 1％ 的胎汁； 第四十一頁，共七十頁。 (一 ) 骨骼肌細(xì)胞培養(yǎng) ? 動物胚或幼體的 大腿肌組織為最好的培養(yǎng)材料 。 第四十頁，共七十頁。 (5) 用針頭輕輕挑起腹壁，使動物體微傾向一側(cè)，使腹腔中液體集于針頭下吸取入針管內(nèi)； (6) 小心拔出針頭，把液體注入離心管中， (4℃ )離心 10 分鐘后，去上清，加 10 ml Eagle 培養(yǎng)基； (7) 計(jì)數(shù)細(xì)胞，每只小鼠可產(chǎn)生 20 ~ 30 106 細(xì)胞，其中90％為巨噬細(xì)胞； (8
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