不同類型細(xì)胞的培養(yǎng)特點(diǎn)-文庫吧在線文庫
【正文】 ?毛細(xì)血管細(xì)小，結(jié)構(gòu)簡單，內(nèi)皮細(xì)胞外有較多的結(jié)締組織，進(jìn)行別離培養(yǎng)有很大困難。毛細(xì)血管小段一般成自 1 ~ 4 個內(nèi)皮細(xì)胞， 以后每個小段在底物上慢慢展成特殊形態(tài)的細(xì)胞島，能持續(xù) 2 ~ 5 天。幼兒包皮是培養(yǎng)成纖維細(xì)胞的很好對象。 ? 巨噬細(xì)胞容易獲得，便于培養(yǎng)，并可進(jìn)行純化。 2．培養(yǎng)方法： ? 培養(yǎng)巨噬細(xì)胞可用各種方法和各種來源獲取細(xì)胞，其中以小鼠腹腔取材法最為實(shí)用。取材常用生后 1 ~ 2 天的乳鼠 (Wistar 大鼠更好 )。 (二 ) 心肌細(xì)胞培養(yǎng) ?最常用材料： ?雞胚心肌、小鼠、大鼠以及人胎兒心肌等都可應(yīng)用。 第四十六頁，共七十頁。 大鼠 c6膠質(zhì)細(xì)胞 第五十頁，共七十頁。 第五十四頁，共七十頁。 一、要點(diǎn) 1．取材： 人腫瘤細(xì)胞來自外科手術(shù)或活檢瘤組織。 第五十八頁，共七十頁。 2．反復(fù)貼壁法： 根據(jù)腫瘤細(xì)胞比成纖維細(xì)胞貼壁速度慢的特點(diǎn)，并結(jié)合使用不加血清的營養(yǎng)液， (1) 細(xì)胞生長達(dá)一定數(shù)量后，倒出舊培養(yǎng)液，用胰酶消化后， Hanks 沖洗 2 次，參加不含血清的培養(yǎng)液，吹打制成細(xì)胞懸液； (2) 編號為 A、 B、 C 三個培養(yǎng)瓶；首先把懸液接種入 A 培養(yǎng)瓶中，置溫箱中靜止培養(yǎng) 5— 20 分鐘后，輕輕傾斜培養(yǎng)瓶，讓液體集中瓶角后慢慢吸出全部培養(yǎng)液，再接種入 B 培養(yǎng)瓶中后；向 A 瓶中補(bǔ)充少許完全培養(yǎng)液置溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)； (3) B瓶中細(xì)胞 5~20 分鐘后，按處理 A 的方法，把培養(yǎng)液注入 C 培養(yǎng)瓶中；再向 B 瓶中補(bǔ)加完全培養(yǎng)基。 第六十三頁，共七十頁。 選用上述任何一種方法，都需進(jìn)行試驗(yàn)，取得必要經(jīng)驗(yàn)，找出適合的條件，才能獲得好的效果。 Hela細(xì)胞 第六十七頁，共七十頁。神經(jīng)元能發(fā)生一定分化現(xiàn)象，如生長突起，但因無增殖能力，最后衰退死亡 第七十頁，共七十頁。正常細(xì)胞，在體外培養(yǎng)時都不易生長，建立細(xì)胞系更難。根據(jù)細(xì)胞種類不同選用不同的促生長物，常用有胰島素、氫化可的松、雌激素以及其它生長因子。 第六十四頁，共七十頁。必要時可反復(fù)處理屢次，直至癌細(xì)胞純化為止。 第五十九頁，共七十頁。 2．培養(yǎng)基： ? 腫瘤細(xì)胞對培養(yǎng)基的要求不如正常細(xì)胞嚴(yán)格，一般常用的 RPMI l6 DMEM、 McCoy5A 等培養(yǎng)基等皆可用于腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)。 ?腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)是研究癌變機(jī)理、抗癌藥檢測、癌分子生物學(xué)極其重要的手段。不僅能獲得生長的膠質(zhì)細(xì)胞并可形成能傳代的二倍體細(xì)胞系。 ?神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞為較易培養(yǎng)成分，它分少突、星形和小膠質(zhì)三種 。初代培養(yǎng)的雞胚心肌呈紡錘形， ? 純化及生長特點(diǎn)：常雜有成纖維細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞；心肌細(xì)胞亦較其它成分貼壁慢，可反復(fù)貼壁法排除其它細(xì)胞成分。 生長特點(diǎn)：細(xì)胞生長開始呈紡錘形，培養(yǎng) 50 ~ 52 小時后將出現(xiàn)融合形成肌細(xì)胞狀多核纖維。 第三十九頁，共七十頁。 1．培養(yǎng)技術(shù)要點(diǎn)： ?[來源和取材 ] 巨噬細(xì)胞可來源于人胸水、腹水、血和透析液等材料。 第三十三頁，共七十頁。 第三十頁，共七十頁。 [凝膠底層制備 ] (1) 取 60 mm Falcon 產(chǎn)培養(yǎng)皿，加 1% Difco 產(chǎn)明膠 (用不合鈣和鎂的 Hanks 液配制 )，鋪蓋瓶底，形成薄層； (2) 置 4℃ 過夜；用前再用少許培養(yǎng)液沖洗一次。 第二十二頁，共七十頁。 (3) 待吸凈消化液后，注入離心管中，低速離心別離，用 RPMI 1640 培養(yǎng)基培養(yǎng) (較其它培養(yǎng)基為好 )，能獲得較純的肝上皮細(xì)胞和獲較好的效果。 (三 ) 肝細(xì)胞培養(yǎng) ?肝臟具有取材方便和易于生長的優(yōu)點(diǎn)，能獲得典型上皮細(xì)胞培養(yǎng)。 ?本卷須知：冷消化目的在于使表皮和真皮結(jié)合松散；如冷消化后別離下來的表皮膜自身也已松散，此時亦可直接置入 PBS 中用吸管吹打制備細(xì)胞懸液；不再經(jīng)過第二次消化。克隆形成后飼細(xì)胞漸死亡，換液時去除。 第五頁，共七十頁。 類型： 正常細(xì)胞培養(yǎng) 腫瘤細(xì)胞培養(yǎng) 第二頁，共七十頁。 第四頁，共七十頁。 ?【飼細(xì)胞】飼細(xì)胞 (Feeder Cells)也稱滋養(yǎng)細(xì)胞，是一層經(jīng)過射線照射或絲裂霉素傷害處理的、用作克隆細(xì)胞附著底物的細(xì)胞層。 (3) 冷消化：換入 % 胰蛋白酶中，置 4℃過夜； (4) 別離：取出皮塊，用血管鉗或鑷子把表皮與真皮層分開； 第九頁，共七十頁。 細(xì)胞接種后一般在 16 小時內(nèi)貼壁，細(xì)胞呈多角形，成島狀或片狀生長，以后逐漸聯(lián)接成片。 2．初代消化法培養(yǎng)： (1) 把肝組織切成 2 ~ 4 立方毫米的小塊，用不合鈣鎂的BSS 液洗兩次； (2) 移入 1:1 的 ％胰蛋白酶和 ％膠原酶 (都用無鈣鎂 BSS 配制 ) 中， 4℃ 冷消化 10 ~ 12 小時后，通過 250 微米和 64 微米尼龍網(wǎng)或不銹鋼紗網(wǎng)濾過 (用紗布濾過亦可 )； (3) 收集細(xì)胞、 BSS 液洗 1 ~ 2
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