不同類型細(xì)胞的培養(yǎng)特點(diǎn)(存儲(chǔ)版)
【正文】 (4) 離心：收集細(xì)胞懸液， 800 轉(zhuǎn) /別離心后， Hanks 液漂洗兩次； 第十三頁，共七十頁。肝組織易于貼壁，生長(zhǎng)力好，一般次日即可出現(xiàn)生長(zhǎng)暈。 第十九頁，共七十頁。 第二十三頁，共七十頁。 (5)再離心：沉淀物用培養(yǎng)液重懸并離心，再重懸，再離心，共兩次； (6) 制細(xì)胞懸液：末次沉淀物仍用含 10％小牛血清的 Dulbecco 改進(jìn) Eag1e 氏培養(yǎng)液重懸后，稍吹打； (7)接種：接種入鋪有明膠底層的培養(yǎng)皿中， 37℃ 培養(yǎng)；在培養(yǎng)頭 1 ~ 3 小時(shí)中，毛細(xì)血管小段和內(nèi)皮細(xì)胞最先貼附于底物上，而腎上腺細(xì)胞和成纖維細(xì)胞卻仍在培養(yǎng)液中漂??； (8)換液：吸除培養(yǎng)液，再參加腫瘤條件培養(yǎng)液；每?jī)商鞊Q液一次。 ?用人或動(dòng)物胚體為好；動(dòng)物可用小鼠或雞胚，去頭和內(nèi)臟，剪成小碎塊后，用胰蛋白酶消化法培養(yǎng)；如為人胚，可取皮膚培養(yǎng)。 (二 ) 巨噬細(xì)胞培養(yǎng) ? 巨噬細(xì)胞屬免疫細(xì)胞，有多種功能，是研究細(xì)胞吞噬、細(xì)胞免疫和分子免疫學(xué)的重要對(duì)象。 第三十七頁，共七十頁。 (一 ) 骨骼肌細(xì)胞培養(yǎng) ? 動(dòng)物胚或幼體的 大腿肌組織為最好的培養(yǎng)材料 。 第四十二頁，共七十頁。 乳鼠心肌細(xì)胞原代培養(yǎng) 第四十五頁，共七十頁。 人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞 第四十九頁，共七十頁。 (3)濾過、計(jì)數(shù)、接種：向末次沉降物中參加適量營(yíng)養(yǎng)液，通過紗網(wǎng)或紗布濾過，計(jì)數(shù)細(xì)胞并調(diào)整好細(xì)胞密度，接種入培養(yǎng)瓶或皿中，置 5％ C02 溫箱中培養(yǎng)； (4)傳代：細(xì)胞生長(zhǎng)集合后，可用 ％胰蛋白酶消化法做傳代處理。 初代培養(yǎng)應(yīng)用組織塊和消化培養(yǎng)法均可。 ? 培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞仍需加血清和相關(guān)生長(zhǎng)因子培養(yǎng)更易成功。 第六十頁，共七十頁。用此法處理后， 成纖維細(xì)胞比腫瘤細(xì)胞易先脫落 ，經(jīng)過幾次反復(fù)處理，可能把成纖維細(xì)胞除凈。最近也有人應(yīng)用特殊化學(xué)物如 SOD 抑制成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的方法。 第六十六頁，共七十頁。動(dòng)物可用小鼠或雞胚，去頭和內(nèi)臟，剪成小碎塊后，用胰蛋白酶消化法培養(yǎng)。取新鮮肝臟，先剝除被膜和血管等纖維成分，用刀或剪刀把肝剪成 1mm3 左右的小塊，采用貼壁培養(yǎng)法。 3．動(dòng)物體媒介培養(yǎng)： ? 為提高腫瘤細(xì)胞對(duì)體外培養(yǎng)環(huán)境的適應(yīng)力和增加有活力癌細(xì)胞 (干細(xì)胞 ) 的數(shù)量，可采用動(dòng)物體轉(zhuǎn)嫁接種成瘤后，再?gòu)膭?dòng)物體內(nèi)取出進(jìn)行培養(yǎng)，能提高體外培養(yǎng)的成功率。 5．其它方法： 有人發(fā)現(xiàn)聚丙烯酰胺有抑制成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的作用；也有人用聚蔗糖制備成比重 ~ 的密度梯度離心液，參加細(xì)胞懸液后，在 23℃ 中 800g 離心 10 分鐘。 第六十二頁，共七十頁。 成纖維細(xì)胞排除法 1．機(jī)械刮除法： 是用不銹鋼絲末端插有橡膠刮頭 (用膠塞剪成三角形插以不銹鋼絲 )，或裹少許脫脂棉制成，裝入試管中高壓滅菌后備用 (也可用特制電熱燒灼器刮除 )。腫瘤細(xì)胞對(duì)血清的需求比正常細(xì)胞低，正常細(xì)胞培養(yǎng)不加血清不能生長(zhǎng)，腫瘤細(xì)胞在低血清培養(yǎng)基中也能生長(zhǎng)。 第五十六頁，共七十頁。 第五十二頁，共七十頁。 神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞與神經(jīng)元有共存關(guān)系。在培養(yǎng)成功時(shí)，相差顯微鏡下可觀察到橫紋；一周后便可出現(xiàn)節(jié)律性收縮現(xiàn)象。數(shù)日后融合停止，此時(shí)能觀察到橫紋。 第四十頁，共七十頁。 ?實(shí)驗(yàn)多從動(dòng)物血液、肺、脾和胸腹腔獲取，其中以從動(dòng)物腹腔取材最常用。 小鼠成纖維細(xì)胞； 細(xì)胞來源： swiss小鼠胚胎 第三十四頁，共七十頁。 第三十一頁，共七十頁。 第二十六頁，共七十頁。 ?人臍帶易于獲得，培養(yǎng)效果好；細(xì)胞生長(zhǎng)后，一般傳 6 ~ 7 代后即衰退，難以長(zhǎng)期維持。 第十八頁，共七十頁。 1．初代組織塊培養(yǎng)： ?肝組織做組織塊培養(yǎng)效果很好。 第十一頁，共七十頁。 第七頁，共七十頁。 (一 )表皮細(xì)胞培養(yǎng) 1．特點(diǎn) ： ? 在有膠原的底物上易生長(zhǎng) ； ? 把人或小鼠表皮細(xì)胞培養(yǎng)在以 3T3 細(xì)胞為飼養(yǎng)層 (用射線照射后 )上時(shí)，細(xì)胞易生長(zhǎng)并可發(fā)生一定程度的分化現(xiàn)象。 第一節(jié) 正常細(xì)胞培養(yǎng) ?正常細(xì)胞，在體外培養(yǎng)時(shí)都 不易生長(zhǎng)，建立細(xì)胞系更難。 一、上皮細(xì)胞類培養(yǎng) ?上皮細(xì)胞可來源于外、內(nèi)、中三個(gè)胚層； ?培養(yǎng)中只有源于外和內(nèi)胚層的細(xì)胞能反映出上皮細(xì)胞的特征，細(xì)胞呈膜狀生長(zhǎng)的特點(diǎn)。 第六頁，共七十頁。 2．表皮細(xì)胞培養(yǎng)程序： (1) 取材：取外科植皮或手術(shù)剩余皮膚小塊，以角化層薄者為佳，早產(chǎn)流產(chǎn)兒皮膚更好，切成 ~ 1cm2小塊； (2) EDTA 處理：先置入 ％ EDTA 中室溫置 5 分鐘。 (5) 接種：末次離心后參加含有 1％ ~ 2％胎牛血清的完全培養(yǎng)基，接種入不同孔數(shù)的培養(yǎng)板中；接種量依不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ā? 第十五頁，共七十頁。 1. (1)取產(chǎn)后的新鮮臍帶；如不立即培養(yǎng)可保存于 4℃ 中，但不宜超過 12 小時(shí)； 無菌剪取長(zhǎng) 10 ~ 15 厘米一段 。 (五 ) 毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)
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