【正文】 電聚焦是在穩(wěn)定的pH梯度中按等電點的不同分離兩性大分子的平衡電泳方法。因此，這些分子總會是處于不斷擴(kuò)散和抗擴(kuò)散的平衡中，在pI處得以“聚焦”.離子交換層析 利用蛋白質(zhì)的兩性游離性質(zhì)，在某一特定ＰＨ時，各蛋白質(zhì)的電荷量及性質(zhì)不同，故可以通過離子交換層析得以分離。凝膠層析　　凝膠層析是按照蛋白質(zhì)分子量大小進(jìn)行分離的技術(shù)，又稱之凝膠過濾，分子篩層析或排阻層析。不同類型凝膠的篩孔的大小不同。當(dāng)含有大小不同的蛋白質(zhì)樣品加到凝膠柱上時，比凝膠珠平均孔徑小的蛋白質(zhì)就要連續(xù)不斷地穿入珠子的內(nèi)部，這樣的小分子不但其運(yùn)動路程長，而且受到來自凝膠珠內(nèi)部的阻力也很大，所以越小的蛋白質(zhì)，把它們從柱子上洗脫下來所花費(fèi)的時間越長。因此，大的蛋白質(zhì)直接通過凝膠珠之間的縫隙首先被洗脫下來。 單抗，多糖，疾病原因單克隆抗體：動物脾臟有上百萬種不同的B淋巴細(xì)胞系，重排后具有不同基因不同的B淋巴細(xì)胞合成不同的抗體。被激活的B細(xì)胞分裂增殖形成效應(yīng)B細(xì)胞（漿細(xì)胞）和記憶B細(xì)胞，大量的漿細(xì)胞克隆合成和分泌大量的抗體分子分布到血液、體液中。單克隆細(xì)胞將合成針對一種抗原決定簇的抗體，稱為單克隆抗體。由相同的單糖組成的多糖稱為多糖，如淀粉、纖維素和糖原；以沒的單糖組成的多糖稱為雜多糖，如阿拉伯膠是由戊糖和半乳糖等組成。多糖類一般不溶于水，無甜味，不能形成結(jié)晶，無還原性和變旋現(xiàn)象?！柏氀笔侵竼挝蝗莘e血液內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)和血紅蛋白含量低于正常。 溶血性貧血　　紅細(xì)胞過度破壞所引起的貧血，但較少見；常伴有黃疸，稱為“溶血性黃疸”； 巨幼紅細(xì)胞性貧血　　缺乏紅細(xì)胞成熟因素而引起的貧血，缺乏葉酸或維生素B12引起的巨幼紅細(xì)胞性貧血，多見于嬰兒和孕婦長期營養(yǎng)不良；巨幼細(xì)胞貧血是指骨髓中出現(xiàn)大量巨幼細(xì)胞的一類貧血。這種巨幼細(xì)胞的形成是DNA合成缺陷的結(jié)果，核的發(fā)育和成熟落后于含血紅蛋白的胞漿。粒系細(xì)胞和巨核細(xì)胞也都有形態(tài)上的改變和成熟細(xì)胞數(shù)量的減少。這些巨幼細(xì)胞均比相應(yīng)的正常幼紅細(xì)胞大，漿核比例比正常略高。當(dāng)細(xì)胞逐漸成熟，染色質(zhì)保持其顆粒狀結(jié)構(gòu)，不易形成深染的固縮塊狀物。絕大多數(shù)巨幼細(xì)胞貧血是由葉酸、維生素B12缺乏引起的，但也有一小部分是例外，如抗代謝藥物引起的巨幼細(xì)胞增生、紅白血病和紅血病、鐵粒幼細(xì)胞貧血的巨幼細(xì)胞增多、遺傳性乳清酸尿等。經(jīng)過適當(dāng)?shù)闹委?，這些巨幼細(xì)胞都能很快變成正常的幼稚紅細(xì)胞。 地中海貧血（Thalassemia）是一組遺傳性溶血性貧血。導(dǎo)致血紅蛋白的組成成分改變，本組疾病的臨床癥狀輕重不一，大多表現(xiàn)為慢性進(jìn)行性溶血性貧血。1961年國際酶學(xué)會議規(guī)定：1個酶活力單位是指在特定條件（25℃，其它為最適條件）下，在1min 內(nèi)能轉(zhuǎn)化1μmol底物的酶量，或是轉(zhuǎn)化底物中1μmol的有關(guān)基團(tuán)的酶量。比活是酶純度的測量。 酶活調(diào)節(jié) 競爭性抑制作用（petitive inhibition）：通過增加底物濃度可以逆轉(zhuǎn)的一種酶抑制類型。這種抑制使Km增大而υmax不變。這種抑制使Km不變而υmax變小。這種抑制使Km和υmax都變小但υmax/Km不變。 　?、泼资戏匠碳懊资铣?shù)：根據(jù)上述實驗結(jié)果，Michaelis amp。其中，Vmax為最大反應(yīng)速度，Km為米氏常數(shù)。因此，Km等于酶促反應(yīng)速度達(dá)最大值一半時的底物濃度。因此，Km可以反映酶與底物親和力的大小，即Km值越小，則酶與底物的親和力越大；反之，則越小。 　?、躃m是酶的特征性常數(shù)：在一定條件下，某種酶的Km值是恒定的，因而可以通過測定不同酶（特別是一組同工酶）的Km值，來判斷是否為不同的酶。 　?、轐m可用來確定酶活性測定時所需的底物濃度：當(dāng)[S]=10Km時，ν=91%Vmax，為最合適的測定酶活性所需的底物濃度。 　?、菿m和Vmax的測定：主要采用LineweaverBurk雙倒數(shù)作圖法和Hanes作圖法。 溫度對反應(yīng)速度的影響　　一般來說，酶促反應(yīng)速度隨溫度的增高而加快，但當(dāng)溫度增加達(dá)到某一點后，由于酶蛋白的熱變性作用，反應(yīng)速度迅速下降。酶的最適溫度與實驗條件有關(guān)，因而它不是酶的特征性常數(shù)。 pH對反應(yīng)速度的影響　　觀察pH對酶促反應(yīng)速度的影響，通常為一鐘形曲線，即pH過高或過低均可導(dǎo)致酶催化活性的下降。～。 抑制劑對反應(yīng)速度的影響　　凡是能降低酶促反應(yīng)速度，但不引起酶分子變性失活的物質(zhì)統(tǒng)稱為酶的抑制劑。 　?、挪豢赡嬉种谱饔茫?　　抑制劑與酶分子的必需基團(tuán)共價結(jié)合引起酶活性的抑制，且不能采用透析等簡單方法使酶活性恢復(fù)的抑制作用就是不可逆抑制作用。酶的不可逆抑制作用包括專一性抑制（如有機(jī)磷農(nóng)藥對膽堿酯酶的抑制）和非專一性抑制（如路易斯氣對巰基酶的抑制）兩種。如果以ν～[E]作圖，可得到一組隨抑制劑濃度增加而斜率降低的直線。 　?、?競爭性抑制：抑制劑與底物競爭與酶的同一活性中心結(jié)合，從而干擾了酶與底物的結(jié)合，使酶的催化活性降低，這種作用就稱為競爭性抑制作用。典型的例子是丙二酸對琥珀酸脫氫酶（底物為琥珀酸）的競爭性抑制和磺胺類藥物（對氨基苯磺酰胺）對二氫葉酸合成酶（底物為對氨基苯甲酸）的競爭性抑制。其特點為：；，抑制劑才能對酶產(chǎn)生抑制作用；：Km減小，Vm降低。其特點為：；，故底物濃度的改變對抑制程度無影響；：Km值不變，Vm值降低。酶的激活劑大多數(shù)是金屬離子，如K+、Mg2+、Mn2+等，唾液淀粉酶的激活劑為Cl。標(biāo)兵酶是一種調(diào)節(jié)酶，它們常常也是別構(gòu)酶。被動轉(zhuǎn)運(yùn)中最主要的方式是簡單擴(kuò)散和濾過。簡單擴(kuò)散過程可受下列因素的影響：(1)生物膜兩側(cè)的濃度差：濃度差越大，擴(kuò)散越快。（2）外源化學(xué)物在脂質(zhì)中的溶解度：溶解度可用脂/水分配系數(shù)表示，即一種物質(zhì)在脂相和水相的分配已達(dá)到平衡狀態(tài)時的分配率比值稱為脂/水分配系數(shù)。但由于生物膜中還含有水相，在生物轉(zhuǎn)運(yùn)過程中，外源化學(xué)物既要透過脂相，也要透過水相，因此脂水分配系數(shù)在1左右者，更易進(jìn)行簡單擴(kuò)散。離子型的化合物不易透過生物膜的脂質(zhì)結(jié)構(gòu)區(qū)。弱酸性化學(xué)物在酸性介質(zhì)中非離子型多，在堿性介質(zhì)中離子型多；弱堿性化學(xué)物在酸性介質(zhì)中離子型多，而在堿性介質(zhì)中非離子型多。凡分子大小和電荷與膜上孔狀結(jié)構(gòu)相適應(yīng)的溶質(zhì)皆可濾過轉(zhuǎn)運(yùn)，轉(zhuǎn)運(yùn)的動力為生物膜兩側(cè)的流體靜壓梯度差和滲透壓差。腎小球的孔道直徑較大，約為70nm，分子量為60,000以上的蛋白質(zhì)分子不能透過，較小的分子皆可透過。一般細(xì)胞孔道直徑在4nm以下，所以除水分子可以通過外，有些無機(jī)離子和有機(jī)離子等外源化學(xué)物，亦可濾過。特殊轉(zhuǎn)運(yùn)分主動轉(zhuǎn)運(yùn)和易化擴(kuò)散。能量來自細(xì)胞代謝活動所產(chǎn)生的代謝能（ATP）的釋放。機(jī)體需要的某些營養(yǎng)物質(zhì)，例如某些糖類、氨基酸、核酸和無機(jī)鹽等由腸道吸收進(jìn)入血液的過程，必須通過主動轉(zhuǎn)運(yùn)逆濃度梯度吸收。葡萄糖、某些氨基酸、甘油、嘌呤堿等親水化合物，由于不溶于脂肪，不能借助簡單擴(kuò)散進(jìn)轉(zhuǎn)運(yùn)，所以可在具有特定載體和順濃度梯度的情況下進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn)。在一些大分子顆粒物質(zhì)被吞噬細(xì)胞由肺泡去除或被肝和脾的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)由血液去除的過程中起主導(dǎo)作用。前者是將細(xì)胞表面的顆粒物轉(zhuǎn)運(yùn)入細(xì)胞的過程。胞吞和胞吐是兩種方向相反的過程。入侵機(jī)體細(xì)胞的細(xì)菌、病毒、死亡的細(xì)菌、組織碎片、鐵蛋白、偶氮色素都可通過吞噬作用被細(xì)胞清除。糖的無氧分解糖的有氧氧化磷酸戊糖途徑磷酸戊糖途徑總反應(yīng)方程式如下：抑制劑，呼吸鏈，限速酶　　能減弱、抑制甚至破壞酶活性的物質(zhì)稱為酶的抑制劑。酶的抑制劑有重金屬離子、一氧化碳、硫化氫、氫氰酸、氟化物、碘化乙酸、生物堿、染料、對氯汞苯甲酸、二異丙基氟磷酸、乙二胺四乙酸、表面活性劑等。 還原型輔酶通過呼吸鏈再氧化的過程稱為電子傳遞過程。放出的能量則使ADP和磷酸生成ATP。整個過程稱為氧化呼吸鏈或呼吸代謝。呼吸鏈?zhǔn)惯@些能量逐步釋放，有利于形成ATP和維持跨膜電勢。二、構(gòu)成 呼吸鏈包含15種以上組分，主要由4種酶復(fù)合體和2種可移動電子載體構(gòu)成。 Ⅰ 即NADH：輔酶Q氧化還原酶復(fù)合體，由NADH脫氫酶（一種以FMN為輔基的黃素蛋白）和一系列鐵硫蛋白（鐵—硫中心）組成。鐵硫蛋白含有非血紅素鐵和酸不穩(wěn)定硫，其鐵與肽類半胱氨酸的硫原子配位結(jié)合。 Ⅱ 由琥珀酸脫氫酶（一種以FAD為輔基的黃素蛋白）和一種鐵硫蛋白組成，將從琥珀酸得到的電子傳遞給輔酶Q。它在電子傳遞鏈中處于中心地位，可接受各種黃素酶類脫下的氫。 細(xì)胞色素類 都以血紅素為輔基，紅色或褐色。根據(jù)吸收光譜，可分為三類：a,b,c。細(xì)胞色素aa3以復(fù)合物形式存在，又稱細(xì)胞色素氧化酶，是最后一個載體，將電子直接傳遞給氧。 復(fù)合體IV：細(xì)胞色素C氧化酶復(fù)合體。限速酶：它是指整條代謝通路中催化反應(yīng)速度最慢的酶,它不但可以影響整條代謝途徑的總速度,還可以改變代謝方向. 　　在代謝過程中的一系列反應(yīng)中，如果其中一個反應(yīng)進(jìn)行的很慢，便成為整個過程的限速步驟，催化此限速步驟的酶稱為限速酶或者標(biāo)兵酶。過程：EMP,TCA,尿素循環(huán)，β氧化　EMP途徑即糖酵解途徑或稱葡萄糖酵解途徑，這條途徑幾乎是所有具有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的生物所共有的主要代謝途徑。反應(yīng)發(fā)生于細(xì)胞質(zhì)中。三羧酸循環(huán)體內(nèi)物質(zhì)糖類、脂肪或氨基酸有氧氧化的主要過程。尿素循環(huán)肝臟是動物生成尿素的主要器官，由于精氨酸酶的作用使精氨酸水解為鳥氨酸及尿素。由于精氨酸水解在尿素生成后又重新反復(fù)生成，故稱尿素循環(huán)。（脂肪酸的β氧化，基本過程： 丁酰CoA經(jīng)最后一次β氧化：生成2分子乙酰CoA 。 ）（脂肪酸的α氧化：在哺乳動物的肝臟和腦組織中進(jìn)行，由微粒體氧化酶系催化，使游離的長鏈脂肪酸的α碳原子上的氫被氧化成烴基，生成α烴脂酸。）（ω氧化：動物體內(nèi)上而碳以下的短鏈脂肪酸，在肝微粒體氧化酶系催化下，通過末端碳原子（稱為ω位）上的氫被氧化成羧基，生成ω羥基酸，再進(jìn)一步氧化成二羧酸）血漿脂蛋白種類作用血槳脂蛋白：指哺乳動物血漿(尤其是人)中的脂蛋白質(zhì)復(fù)合物。血槳脂蛋白分類　　血漿脂蛋白是根據(jù)密度來分類的： 　?。?） 乳糜微粒，密度非常低，運(yùn)輸甘油三酯和膽固醇酯，從小腸到組織肌肉和adipose組織。 　?。?） 低密度脂蛋白(LDL，)，把膽固醇運(yùn)輸?shù)浇M織，經(jīng)過一系列復(fù)雜的過程，LDL與LDL受體結(jié)合并被細(xì)胞吞食。當(dāng)血漿中的卵磷脂：膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶(Lecithin cholesterol acyltransferase, LCAT)將卵磷脂上的脂肪酸殘基轉(zhuǎn)移到膽固醇上生成膽固醇脂時，HDL將這些膽固醇脂動輸?shù)礁巍Ｃ~解釋蛋白質(zhì)等電點蛋白質(zhì)變性蛋白質(zhì)變性（denaturation）:生物大分子的天然構(gòu)象遭到破壞導(dǎo)致其生物活性喪失的現(xiàn)象。 復(fù)性（renaturation）:在一定的條件下，變性的生物大分子恢復(fù)成具有生物活性的天然構(gòu)象的現(xiàn)象。 )核酸的增/減色效應(yīng)3）增色效應(yīng)(hyperchromic effect)。DNA分子中堿基間電子的相互作用使DNA分子具有吸收260nm波長紫外光的特性。 若以溫度對DNA溶液的紫外吸光率作圖，得到的典型DNA變性曲線呈S型(如下圖)。通常將核酸加熱變性過程中，紫外光吸收值達(dá)到最大值的50%時的溫度稱為核酸的解鏈溫度，由于這一現(xiàn)象和結(jié)晶的融解相類似，又稱融解溫度(Tm,melting temperature)。特定核酸分子的Tm值與其G＋C所占總堿基數(shù)的百分比成正相關(guān)，兩者的關(guān)系可表示為：?Tm=＋*(G+C)%一定條件下(相對較短的核酸分子)，Tm值大小還與核酸分子的長度有關(guān)，核酸分子越長，Tm值越大；另外，溶液的離子強(qiáng)度較低時，Tm值較低，融點范圍也較寬，反之亦然，因此DNA制劑不應(yīng)保存在離子強(qiáng)度過低的溶液中。β折疊可以把它們想象為由折疊的條狀紙片側(cè)向并排而成,每條紙片可看成是一條肽鏈, 稱為β折疊股或β股(β－strand),肽主鏈沿紙條形成鋸齒狀,處于最伸展的構(gòu)象,氫鍵主要在股間而不是股內(nèi)。需要注意的是在折疊片上的側(cè)鏈都垂直于折疊片的平面,并交替的從平面上下二側(cè)伸出。DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)主鏈有二條,它們似“麻花狀”繞一共同軸心以右手方向盤旋, 相互平行而走向相反形成雙螺旋構(gòu)型。所謂雙螺旋就是針對二條主鏈的形狀而言的。同一平面的堿基在二條主鏈間形成堿基對。堿基對以氫鍵維系，A與T 間形成兩個氫鍵，G與C間形成三個氫鍵。從立體化學(xué)的角度看,只有嘌呤與嘧啶間配對才能滿足螺旋對于堿基對空間的要求, 而這二種堿基對的幾何大小又十分相近,具備了形成氫鍵的適宜鍵長和鍵角條件。堿基對具有二次旋轉(zhuǎn)對稱性的特征，即堿基旋轉(zhuǎn)180176。 也就是說雙螺旋結(jié)構(gòu)在滿足二條鏈堿基互補(bǔ)的前提下，DNA的一級結(jié)構(gòu)產(chǎn)并不受限制。 (3)大溝和小溝　　大溝和小溝分別指雙螺旋表面凹下去的較大溝槽和較小溝槽。這是由于連接于兩條主鏈糖基上的配對堿基并非直接相對, 從而使得在主鏈間沿螺旋形成空隙不等的大溝和小溝。 (4)結(jié)構(gòu)參數(shù)螺旋直徑2nm；螺旋周期包含10對堿基；；。tRNA的三葉草結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)運(yùn)RNA分子由一條長70~90個核苷酸并折疊成三葉草形的短鏈組成的。tRNA鏈的兩個末端在圖上方指出的L形結(jié)構(gòu)的末端互相接近。在這條鏈的中央形成了L形臂，如圖下方所示，露出了形成反密碼子的三個核苷酸。四個常見RNA堿基腺嘌呤，尿嘧啶，鳥嘌呤和胞嘧啶顯然不能提供足夠的空間以形成一個堅固的結(jié)構(gòu)，因為這些堿基大部分被修飾過以延長它們的結(jié)構(gòu)。 堿基互補(bǔ)原則　在DNA分子結(jié)構(gòu)中，由于堿基之間的氫鍵具有固定的數(shù)目和DNA兩條鏈之間的距離保持不變，使得堿基配對必須遵循一定的規(guī)律，這就是Adenine（A，腺嘌呤）一定與Thymine（T，胸腺嘧啶）配對，Guanine（G，鳥嘌呤）一定與Cytosine（C，胞嘧啶）配對，反之亦然。 　　腺嘌呤與胸腺嘧啶之間有兩個氫鍵，鳥嘌呤與胞嘧啶之間有三個氫鍵，即A＝T, G≡C結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)域是位于超二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)間的一個層次。在較大的蛋白質(zhì)分子中，由于多肽鏈上相鄰的超二級結(jié)構(gòu)緊密聯(lián)系，進(jìn)一步折疊形成一個或多個相對獨(dú)立的致密的三維實體，即結(jié)構(gòu)域。蛋白質(zhì)的超二級結(jié)構(gòu)　超二級結(jié)構(gòu)：是指在多肽鏈內(nèi)順序上相互鄰近的二級機(jī)構(gòu)常常在空間折疊中靠近，彼此相互作用，形成規(guī)則的二級結(jié)構(gòu)聚集體