【正文】 　　單克隆抗體以它明顯的優(yōu)越性得到迅速的發(fā)展，全世界研制成功的單克隆抗體有上萬(wàn)種，主要用于臨床診斷、治療試劑、特異。我國(guó)目前生產(chǎn)的基因工程乙肝疫苗，主要采用酵母表達(dá)系統(tǒng)產(chǎn)生疫苗?；蚬こ桃呙缡菍⒉≡w的某種蛋白基因重組到細(xì)菌或真核細(xì)胞內(nèi)，利用細(xì)菌或真核細(xì)胞來(lái)大量生產(chǎn)病原體的蛋白，把這種蛋白作為疫苗。注射或口服疫苗可以激活體內(nèi)的免疫系統(tǒng)，產(chǎn)生專門針對(duì)病原體的特異性抗體。生物技術(shù)在醫(yī)藥方面的應(yīng)用　　目前，醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域是現(xiàn)代生物技術(shù)應(yīng)用得最廣泛、成績(jī)最顯著、發(fā)展最迅速、潛力也最大的一個(gè)領(lǐng)域。而磺胺類藥的基本結(jié)構(gòu)與對(duì)氨苯甲酸相似，能和對(duì)氨苯甲酸互相競(jìng)爭(zhēng)二氫葉酸合成酶，阻礙葉酸及核酸的合成而發(fā)揮抑菌作用?；前匪幣c抗菌增效劑的抗菌機(jī)制磺胺類藥物的作用機(jī)理為干擾細(xì)菌的葉酸代射，使細(xì)菌的生長(zhǎng)、繁殖受到抑制。青霉素的抗菌機(jī)制青霉素藥理作用是干擾細(xì)菌細(xì)胞壁的合成。 　　乙酰CoA只要通過(guò)檸檬酸丙酮酸循環(huán)出線粒體就可進(jìn)行脂肪酸合成。 　　乙酰輔酶A也是膽固醇代謝中非常重要的原料，全身各組織幾乎均可合成膽固醇。 　　乙酸輔酶A在人體內(nèi)有很多功用，例如，它既然是脂肪來(lái)的，也可以作為原來(lái)在脂肪組織中逆向合成脂肪酸。 　　它在具有線粒體的組織中可以進(jìn)入三羧酸循環(huán)進(jìn)行徹底氧化轉(zhuǎn)化為二氧化碳、水和能量。但是,由于包埋物或半透膜具有一定的空間或立體阻礙作用,因此對(duì)一些反應(yīng)不適用。物理方法包括物理吸附法、包埋法等。便于運(yùn)輸和貯存，有利于自動(dòng)化生產(chǎn)。是用物理的或化學(xué)的方法使酶與水不溶性大分子載體結(jié)合或把酶包埋在水不溶性凝膠或半透膜的微囊體中制成的。在催化反應(yīng)中以固相狀態(tài)作用于底物。 (4)結(jié)構(gòu)參數(shù)螺旋直徑2nm；螺旋周期包含10對(duì)堿基；；。這是由于連接于兩條主鏈糖基上的配對(duì)堿基并非直接相對(duì), 從而使得在主鏈間沿螺旋形成空隙不等的大溝和小溝。 (3)大溝和小溝　　大溝和小溝分別指雙螺旋表面凹下去的較大溝槽和較小溝槽。 也就是說(shuō)雙螺旋結(jié)構(gòu)在滿足二條鏈堿基互補(bǔ)的前提下，DNA的一級(jí)結(jié)構(gòu)產(chǎn)并不受限制。堿基對(duì)具有二次旋轉(zhuǎn)對(duì)稱性的特征，即堿基旋轉(zhuǎn)180176。從立體化學(xué)的角度看,只有嘌呤與嘧啶間配對(duì)才能滿足螺旋對(duì)于堿基對(duì)空間的要求, 而這二種堿基對(duì)的幾何大小又十分相近,具備了形成氫鍵的適宜鍵長(zhǎng)和鍵角條件。堿基對(duì)以氫鍵維系，A與T 間形成兩個(gè)氫鍵，G與C間形成三個(gè)氫鍵。同一平面的堿基在二條主鏈間形成堿基對(duì)。所謂雙螺旋就是針對(duì)二條主鏈的形狀而言的。主鏈有二條,它們似“麻花狀”繞一共同軸心以右手方向盤旋, 相互平行而走向相反形成雙螺旋構(gòu)型。如蛋白質(zhì)的α螺旋、β片層、β轉(zhuǎn)角、無(wú)規(guī)卷曲及DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)。 一般是大分子先流出來(lái)，小分子后流出來(lái)。也叫做分子排阻層析（molecularexclusion chromatography）。凝膠過(guò)濾　　凝膠過(guò)濾層析(gel filtration chromatography)法又稱排阻層析或分子篩方法，主要是根據(jù)蛋白質(zhì)的大小和形狀，即蛋白質(zhì)的質(zhì)量進(jìn)行分離和純化。樣品中待分離的溶質(zhì)離子，與固定相上所結(jié)合的離子交換，不同的溶質(zhì)離子與離子交換劑上離子化的基團(tuán)的親和力和結(jié)合條件不同，洗脫液流過(guò)時(shí)，樣品中的離子按結(jié)合力的弱強(qiáng)先后洗脫。 利用共價(jià)連接有特異配體的層析介質(zhì)分離蛋白質(zhì)混合物中能特異結(jié)合配體的目的蛋白或其它分子的層析技術(shù)。將具有特殊結(jié)構(gòu)的親和分子制成固相吸附劑放置在層析柱中，當(dāng)要被分離的蛋白混合液通過(guò)層析柱時(shí)，與吸附劑具有親和能力的蛋白質(zhì)就會(huì)被吸附而滯留在層析柱中?？梢赃x用生物化學(xué)、免疫化學(xué)或其他結(jié)構(gòu)上吻合等親和作用而設(shè)計(jì)的各種層析分離方法?？偟鞍走M(jìn)行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳，后將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)至尼龍膜，用特定蛋白質(zhì)抗體進(jìn)行免疫反應(yīng)，顯色后可顯示該特定蛋白的存在與表達(dá)量。 【舉例說(shuō)明】　　當(dāng)變性DNA恢復(fù)成天然構(gòu)象時(shí)，對(duì)紫外光的吸收又可下降，這種現(xiàn)象稱為減色效應(yīng)。若變性不徹底，兩條鏈沒(méi)有完全分開(kāi)，則復(fù)性過(guò)程很快。 【原因】　?。?）變性后核酸的粘度明顯降低。 【原因】　　核酸變性后常能觀察到的改變：　?。?）紫外吸收值增高。C。 DNA熱變性的溫度一般為70176。核酸變性時(shí)，并不涉及核苷酸間磷酸二酯鍵的斷裂，后者稱為核酸降解，核酸降解伴有核酸分子量降低，而核酸變性作用則無(wú)此改變。核酸復(fù)性DNA芯片　DNA芯片：DNA芯片技術(shù)是指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接將大量的DNA探針以顯微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后與標(biāo)記的樣品雜交，通過(guò)對(duì)雜交信號(hào)的檢測(cè)分析，即可獲得樣品的遺傳信息。目前用于基因敲除和基因嵌入的技術(shù)有Cre/Lox P系統(tǒng)、FLPI系統(tǒng)等。此法可產(chǎn)生精確的基因突變，也可正確糾正機(jī)體的基因突變?；蚯贸腔虼虬屑夹g(shù)的一種，類似于基因的同源重組。敲除的基因用以觀察生物或細(xì)胞的表型變化，是研究基因功能的重要手段。廣義的基因敲除包括某個(gè)或某些基因的完全敲除、部分敲除、基因調(diào)控序列的敲除以及成段基因組序列的敲除。將細(xì)胞基因組中某基因去除或使基因失去活性的技術(shù)。實(shí)際上任何由遺傳原因引起的蛋白質(zhì)功能異常所帶來(lái)的疾病都是分子病，但習(xí)慣上把酶蛋白分子催化功能異常引起的疾病歸屬于先天性代謝缺陷而把除了酶蛋白以外的其他蛋白質(zhì)異常引起的疾病稱為分子病。蛋白質(zhì)分子是由基因編碼的，即由脫氧核糖核酸 (DNA)分子上的堿基順序決定的。分子病待測(cè)核酸序列為性病病原體基因組或質(zhì)粒DNA。核酸雜交的原理：具有一定同源性的兩條核酸單鏈在一定條件下（適宜的溫度及離子強(qiáng)度等）可按堿基互補(bǔ)原則形成雙鏈，此雜交過(guò)程是高度特異的。核酸的雜交cDNA文庫(kù)單克隆細(xì)胞將合成針對(duì)一種抗原決定簇的抗體，稱為單克隆抗體。被激活的B細(xì)胞分裂增殖形成效應(yīng)B細(xì)胞（漿細(xì)胞）和記憶B細(xì)胞，大量的漿細(xì)胞克隆合成和分泌大量的抗體分子分布到血液、體液中。動(dòng)物脾臟有上百萬(wàn)種不同的B淋巴細(xì)胞系，重排后具有不同基因不同的B淋巴細(xì)胞合成不同的抗體。生物藥物，包括生物技術(shù)藥物和原生物制藥。生物技術(shù)藥物 在醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)學(xué)中應(yīng)用正逐步推廣。此類生長(zhǎng)因子的結(jié)構(gòu)類似物又稱為抗代謝物。 　　蛋白質(zhì)合成形式，是指核糖體大小亞基在需要的時(shí)候組合形成核糖體，合成蛋白質(zhì)后解體并在需要的時(shí)候重新組合形成核糖體的過(guò)程 　　核蛋白體循環(huán)ribosomal cycle：廣義的核蛋白體循環(huán)是指氨基酸活化后，在核蛋白體上縮合形成多肽鏈的過(guò)程，該過(guò)程包括肽鏈合成的起始，肽鏈的延長(zhǎng)，肽鏈合成的終止和釋放，狹義的核蛋白體循環(huán)指多肽鏈合成過(guò)程中肽鏈延長(zhǎng)階段，它由進(jìn)位，成肽和轉(zhuǎn)位3個(gè)步驟循環(huán)進(jìn)行，直至終止階段。多次復(fù)制后形成多個(gè)DNA雙鏈,然后以這些DNA雙鏈中的每雙鏈的其中的單條(該條與原始病毒RNA鏈互補(bǔ))為模板,復(fù)制出RNA(該RNA與原始病毒RNA相同,不考慮遺傳變異)基因表達(dá)基因表達(dá)(gene expression)是指細(xì)胞在生命過(guò)程中，把儲(chǔ)存在DNA順序中遺傳信息經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)錄和翻譯，轉(zhuǎn)變成具有生物活性的蛋白質(zhì)分子。）逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄reverse transcription：也稱反轉(zhuǎn)錄以RNA為模板合成DNA的過(guò)程，是RNA病毒的復(fù)制形式，需逆轉(zhuǎn)錄酶的催化。轉(zhuǎn)錄（Transcription）是遺傳信息從DNA到 RNA的轉(zhuǎn)移。轉(zhuǎn)錄是遺傳信息由DNA轉(zhuǎn)換到RNA的過(guò)程。轉(zhuǎn)錄岡崎片斷由3個(gè)連續(xù)的核苷酸組成的密碼子所構(gòu)成，編碼20種氨基酸和多肽鏈起始及終止的一套64個(gè)三聯(lián)體密碼子。在某些病毒中的RNA自我復(fù)制（如煙草花葉病毒等）和在某些病毒中能以RNA為模板逆轉(zhuǎn)錄成DNA的過(guò)程（某些致癌病毒）是對(duì)中心法則的補(bǔ)充。也可以從DNA傳遞給DNA，即完成DNA的復(fù)制過(guò)程。這種復(fù)制方式稱為半保留復(fù)制。合成的子代DNA，一股單鏈從親代完整地接受過(guò)來(lái)，另一股單鏈則完全從新合成。所以一碳單位缺乏時(shí)對(duì)代謝較強(qiáng)的組織影響較大，例如：紅細(xì)胞，導(dǎo)致巨幼性貧血。指某些氨基酸分解代謝過(guò)程中產(chǎn)生含有一個(gè)碳原子的基團(tuán)，包括甲基、亞甲基、甲烯基、甲炔基、甲酚基及亞氨甲基等。門冬氨酸又可將此氨基轉(zhuǎn)移到次黃嘌呤核苷酸上生成腺嘌呤核苷酸（通過(guò)中間化合物腺苷酸代琥珀酸）但骨骼肌和心肌中含豐富的腺苷酸脫氨酶（adenylate deaminase），能催化腺苷酸加水、脫氨生成次黃嘌呤核苷酸（IMP）。聯(lián)合脫氨反應(yīng)是可逆的，因此也可稱為聯(lián)合加氨。主要有兩種反應(yīng)途徑： 　?。劝彼崦摎涿负娃D(zhuǎn)氨酶聯(lián)合催化的聯(lián)合脫氨基作用：先在轉(zhuǎn)氨酶催化下，將某種氨基酸的α氨基轉(zhuǎn)移到α酮戊二酸上生成谷氨酸，然后，在L谷氨酸脫氫酶作用下將谷氨酸氧化脫氨生成α酮戊二酸，而α酮戊二酸再繼續(xù)參加轉(zhuǎn)氨基作用。轉(zhuǎn)氨酶與谷氨酸氧化脫氨或是嘌呤核苷酸循環(huán)聯(lián)合脫氨，以滿足機(jī)體排泄含氮廢物的需求。其實(shí)可以看成是氨基酸的氨基與α酮酸的酮基進(jìn)行了交換。轉(zhuǎn)氨基作用指的是一種α氨基酸的α氨基轉(zhuǎn)移到一種α酮酸上的過(guò)程。轉(zhuǎn)氨基作用由于精氨酸水解在尿素生成后又重新反復(fù)生成，故稱尿素循環(huán)。肝臟是動(dòng)物生成尿素的主要器官，由于精氨酸酶的作用使精氨酸水解為鳥(niǎo)氨酸及尿素。β氧化脂肪酸的β氧化：飽和脂肪酸在一系列酶的作用下，羧基端的β位C原子發(fā)生氧化，C鏈在α位C原子與β位C原子間發(fā)生斷裂，每次生成一個(gè)乙酰CoA和較原來(lái)少兩個(gè)C單位的脂肪酸，這個(gè)不斷重復(fù)進(jìn)行的脂肪酸氧化過(guò)程稱為脂肪酸的β 氧化。對(duì)成人來(lái)說(shuō)，這類氨基酸有8種，包括賴氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、蘇氨酸、纈氨酸、色氨酸、苯丙氨酸?；ㄉ南┧崾谴蠖鄶?shù)前列腺素的前體，前列腺素是能調(diào)節(jié)細(xì)胞功能的激素樣物質(zhì)。必需脂肪酸動(dòng)物能合成所需的飽和脂肪酸和亞油酸這類只含1個(gè)雙鍵的不飽和脂肪酸，含有2個(gè)或2個(gè)以上雙鍵的多雙鍵脂肪酸則必須從植物中獲取，故后者稱為必需脂肪酸，其中亞麻酸和亞油酸最重要。 酮體是脂肪分解的產(chǎn)物，而不是高血糖的產(chǎn)物。酮體在肝臟中，脂肪酸氧化分解的中間產(chǎn)物乙酰乙酸、β羥基丁酸及丙酮，三者統(tǒng)稱為酮體。 生物體將多種非糖物質(zhì)轉(zhuǎn)變成糖的過(guò)程。這個(gè)循環(huán)過(guò)程稱為可立氏循環(huán)（Cori Cycle）。通過(guò)生成的乙酰輔酶A與草酰乙酸縮合生成檸檬酸(三羧酸)開(kāi)始，再通過(guò)一系列氧化步驟產(chǎn)生CONADH及FADH2，最后仍生成草酰乙酸，進(jìn)行再循環(huán)，從而為細(xì)胞提供了降解乙?；峁┊a(chǎn)生能量的基礎(chǔ)。也稱為糖胺聚糖。粘多糖是含氮的不均一多糖，是構(gòu)成細(xì)胞間結(jié)締組織的主要成分，也廣泛存在于哺乳動(dòng)物各種細(xì)胞內(nèi)。粘多糖 底物水平磷酸化這是糖酵解過(guò)程中第一個(gè)產(chǎn)生ATP的反應(yīng)。主要在線粒體中進(jìn)行。呼吸鏈(respiratory chain)是由一系列的遞氫反應(yīng)(hydrogen transfer reactions)和遞電子反應(yīng)(eletron transfer reactions)按一定的順序排列所組成的連續(xù)反應(yīng)體系，它將代謝物脫下的成對(duì)氫原子交給氧生成水，同時(shí)有ATP生成。主要為機(jī)體提供可利用的能量。生物氧化是在生物體內(nèi)，從代謝物脫下的氫及電子﹐通過(guò)一系列酶促反應(yīng)與氧化合成水﹐并釋放能量的過(guò)程。 生物氧化競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑通常與正常的底物或配體競(jìng)爭(zhēng)同一個(gè)蛋白質(zhì)的結(jié)合部位。這一區(qū)域稱為酶的活性中心（active center）或活性部位（active site）必需基團(tuán)酶的活性中心：酶分子中氨基酸殘基的側(cè)鏈有不同的化學(xué)組成。其中一些與酶的活性密切相關(guān)的化學(xué)基團(tuán)稱作酶的必需基團(tuán)（essential group）。催化同一化學(xué)反應(yīng)而化學(xué)組成不同的一組酶。是用物理的或化學(xué)的方法使酶與水不溶性大分子載體結(jié)合或把酶包埋在水不溶性凝膠或半透膜的微囊體中制成的。1961年國(guó)際酶學(xué)會(huì)議規(guī)定：1個(gè)酶活力單位是指在特定條件（25℃，其它為最適條件）下，在1min 內(nèi)能轉(zhuǎn)化1μmol底物的酶量，或是轉(zhuǎn)化底物中1μmol的有關(guān)基團(tuán)的酶量。變構(gòu)效應(yīng)別構(gòu)效應(yīng)（allosteric effect）:又稱為變構(gòu)效應(yīng)，是寡聚蛋白與配基結(jié)合改變蛋白質(zhì)的構(gòu)象，導(dǎo)致蛋白質(zhì)生物活性改變的現(xiàn)象。有些酶除了活性中心外，還有一個(gè)或幾個(gè)部位，當(dāng)特異性分子非共價(jià)地結(jié)合到這些部位時(shí)，可改變酶的構(gòu)象，進(jìn)而改變酶的活性，酶的這種調(diào)節(jié)作用稱為變構(gòu)調(diào)節(jié)(allosteric regulation)，受變構(gòu)調(diào)節(jié)的酶稱變構(gòu)酶(allosteric enzyme)，這些特異性分子稱為效應(yīng)劑(effector)。米氏常數(shù)（Michaelis constant）:對(duì)于一個(gè)給定的反應(yīng)，使酶促反應(yīng)的起始速度（υ0）達(dá)到最大反應(yīng)速度（υmax）一半時(shí)的底物濃度。變構(gòu)酶米氏方程米氏常數(shù)結(jié)構(gòu)域是在蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu)內(nèi)的獨(dú)立折疊單元，其通常都是幾個(gè)超二級(jí)結(jié)構(gòu)單元的組合。堿基間的這種一一對(duì)應(yīng)的關(guān)系叫做堿基互補(bǔ)配對(duì)原則。有兩個(gè)奇特的例子，看37號(hào)反密碼子相鄰的堿基，位于甲硫氨酸t(yī)RNA（1yfg）或苯丙氨酸t(yī)RNA(4tna和6tna)的起始部位。三葉草結(jié)構(gòu)的其余兩環(huán)被包裹成肘狀，在那里它們提供整個(gè)分子的結(jié)構(gòu)。氨基酸在箭頭示意的位置被連接。上圖中有兩種不同的分子，苯丙氨酸t(yī)RNA(4tna)和天冬氨酸t(yī)RNA(2tra)。 在大溝和小溝內(nèi)的堿基對(duì)中的N 和O 原子朝向分子表面。小溝位于雙螺旋的互補(bǔ)鏈之間,而大溝位于相毗鄰的雙股之間。這一特征能很好的闡明DNA作為遺傳信息載體在生物界的普遍意義。并不影響雙螺旋的對(duì)稱性。每對(duì)堿基處于各自自身的平面上，但螺旋周期內(nèi)的各堿基對(duì)平面的取向均不同。DNA結(jié)構(gòu)中的堿基對(duì)與Chatgaff的發(fā)現(xiàn)正好相符。配對(duì)堿基總是A與T和G與C。 (2)堿基對(duì)(base pair)　　堿基位于螺旋的內(nèi)則,它們以垂直于螺旋軸的取向通過(guò)糖苷鍵與主鏈糖基相連。主鏈處于螺旋的外則,這正好解釋了由糖和磷酸構(gòu)成的主鏈的親水性。 (1)主鏈(backbone)　　由脫氧核糖和磷酸基通過(guò)酯鍵交替連接而成。平行折疊片比反平行折疊片更規(guī)則且一般是大結(jié)構(gòu)而反平行折疊片可以少到僅由兩個(gè)β股組成。α－碳原子位于折疊線上,由于其四面體性質(zhì),連續(xù)的酰氨平面排列成折疊形式。β－折疊(β－sheet)也是一種重復(fù)性的結(jié)構(gòu),可分為平行式和反平行式兩種類型，它們是通過(guò)肽鏈間或肽段間的氫鍵維系。α螺旋 α螺旋：蛋白質(zhì)分子中多個(gè)肽鍵平面通過(guò)氨基酸α碳原子的旋轉(zhuǎn)，使多肽鏈