生物制品的制備ppt課件-在線瀏覽
2025-06-29 12:35本頁面
【正文】 根據(jù)活性物質(zhì)的性質(zhì) ， ① 選擇提取試劑 。 ② 考慮提取溶劑的 用量 及提取 次數(shù) 、 提取時間 。 三、蛋白質(zhì)類制品的分離純化方法 （Isolation and depuration of protein production） 包括蛋白質(zhì)、多肽和酶類等藥物。原理是使蛋白質(zhì)膠體顆粒破壞，從而沉淀蛋白質(zhì)。 蛋白質(zhì) 中性鹽 中和電荷 水化層減弱 溶解度下降，沉淀 鹽析法原理 等電點(diǎn)沉淀法 在等電點(diǎn)時，蛋白質(zhì)分子以兩性離子形式存在，其分子凈電荷為零 (即正負(fù)電荷相等 )，此時蛋白質(zhì)分子顆粒在溶液中因沒有相同電荷的相互排斥，分子相互之間的作用力減弱，其顆粒極易碰撞、凝聚而產(chǎn)生沉淀，所以蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時，其溶解度最小，最易形成沉淀物。其中膜分離法可用于生物大分子物質(zhì)的濃縮、分級和脫鹽。凝膠顆粒具有多孔性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，小分子易進(jìn)入凝膠網(wǎng)孔，流程長而移動速度慢，而大分子物質(zhì)不能進(jìn)入凝膠網(wǎng)孔，沿凝膠顆粒間隙流動，流程短移動快。 (3)按分子所帶電荷進(jìn)行分離的方法 氨基酸 、 多肽 、 蛋白質(zhì) 、 酶均為兩性電解質(zhì) 。 例如某蛋白質(zhì)等電點(diǎn)為 ， 當(dāng)溶液 pH為 ， 分子則帶有正電荷 。 利用電學(xué)性質(zhì)進(jìn)行分離的方法有 離子交換柱層析法 （ionexchange chromatography ） 、 電 泳 法 （electrophoresis ） 、 等電聚焦法 （ isoelectric focusing） 等 。 ?親和層析 分離專一性強(qiáng)，操作簡便，是當(dāng)前應(yīng)用很廣泛的分離方法之一。 ?配基（ ligand） ： 被固定在基質(zhì)上的分子稱為配基，配基和基質(zhì)是以共價鍵結(jié)合的。 ?2）親和層析有如下特點(diǎn)（ Characteristics of Affinity Chromatography） ? 純化 過程簡單 、迅速； ? 分離 效率 高； ? 產(chǎn)物 純度 高； ? 必須針對某一分離對象制備專一的配基及尋求穩(wěn)定的層析條件。 ?3）親和層析的基本原理 （ Mechanism of Affinity Chromatography） ?① 親和的一對分子中的一方以共價鍵形式與不溶性載體相連作為 固定相吸附劑 。 ?③ 然后改變流動相成份，將結(jié)合的親和物洗脫下來。 （ Fig1. Mechanism of AC） （ Fig2. Mechanism of AC） 抗原 專一抗體 基質(zhì) 具有特異性親和作用的生物分子 ?4）配基的種類 (sorts of ligand) ?抗原與抗體。 ?酶與其底物。 ?維生素與結(jié)合蛋白。 ?5）親和層析載體的性質(zhì)與選擇 ?親和層析載體的選擇 （ selection of vectors） ?多孔的立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，能使被親和吸附的大分子自由通過。 ?具有惰性，盡量減少非專一性吸附。 ?6）常用的親和層析載體 （ Vectors of Affinity Chromatography） ?纖維素（ cellulose） ?葡聚糖凝膠（ Sephadex） ?瓊脂糖凝膠（ Sepharose） ?聚丙烯酰胺凝膠（ Biogel） ?多孔玻璃珠（ BioGlass） ?其它新型載體（ Other gels） ?7） 親和層析配基的選擇 （ Selection of ligand） ?。 ?，可用于和 載體相連，同時又不影響配基與生物分子之間的親和力。用上樣Buffer沖洗柱體，雜質(zhì)被沖洗下來。 ③ 洗脫（ Elution） 選擇適當(dāng)?shù)臈l件，將吸附在親和介質(zhì)上的目的物解吸下來（見下圖）。 提取法 生產(chǎn) DNA和 RNA，先提取核酸和蛋白質(zhì)復(fù)合物，再解離核酸與蛋白質(zhì)，然后分離 RNA與 DNA。 高 RNA含量酵母 搖瓶發(fā)酵 種子培養(yǎng)物 連續(xù)發(fā)酵 發(fā)酵液 過濾 酵母菌體 NaOH 20℃攪拌 破壁 氨水處理 離心 上清液 沉淀蛋白 三氯乙酸 酸調(diào)pH 核酸粗品 乙醇洗滌 干燥 RNA干品 五 、 糖類制品的分離純化方法 （ Isolation and depuration of sugar ） 由于各種糖類制品的性質(zhì)和原料來源不同 ， 沒有統(tǒng)一規(guī)范的提取和純化工藝 。 （ 1）提取方法 （ extraction） 非降解法 適用于從含一種粘多糖的動物組織中提取粘多糖 ， 提取采用的溶劑是水或鹽溶液 。 如從軟骨中分離提取硫酸軟骨素 （ chondroitin sulfate） ， 就是用堿處理進(jìn)行降解 。 （ 2） 分離方法 （ isolation） 常用的分離方法是沉淀法和離子交換層析法 。 45倍體積的乙醇可以使任何結(jié)締組織中的粘多糖完全沉淀 。 粘多糖的聚陰離子能與某些陽離子表面活性劑結(jié)合成不溶于水的鹽 ， 如十六烷基三甲基銨 （ CTA） 等 。洗脫可用 NaC1溶液進(jìn)行梯度洗脫。 非極性脂是與其他脂質(zhì)分子或蛋白質(zhì)分子的疏水區(qū)相結(jié)合的 。 常用的溶劑有組合溶劑 ， 醇是其中的主要成分 ， 此外還有氯仿 、甲醇 、 水等 。 ?吸附層析法 (adsorption chromatography)：常用吸附劑有硅膠、氧化鋁等。洗脫一般是采用極性逐漸增大的洗脫液來進(jìn)行，非極性的先流出，極性的后流出 。根據(jù)它們在一定 pH條件下的解離情況 ， 選擇適當(dāng)?shù)?離子交換劑 可 將它
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