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2025-02-22 03:18本頁面
【正文】 堿解法 合用。 ? （二）多糖的純化 試劑和器材 一、試劑 平衡緩沖溶液： , PH=。 B: NaCl, mol TrisHCl PH=。 二、材料 灰樹花子實體。真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，濃縮一倍體積。在濃縮液中加入 3倍體積的乙醇攪拌，沉淀為多糖和蛋白質(zhì)的混合物，此為粗多糖。 ? 二、粗多糖的純化 ? 粗多糖溶液加入 Sevag試劑 (氯仿：正丁醇＝ 3： 1混合搖勻 )后，置恒溫振蕩器中震蕩過夜，使蛋白質(zhì)充分沉淀，離心 (3000r／ min)分離，去除蛋白質(zhì)。 ? 取樣品 10ml , PH=。 Buffer B: NaCl, mol TrisHCl PH= 進行線性洗脫，分部收集。合并多糖高峰部分，濃縮后透析，凍干，即得多糖級分。薄層層析顯色后，比較多糖水解所得單糖斑點的顏色和 Rf值與不同單糖標(biāo)樣參考斑點的顏色和 Rf值，確定樣品多糖的單糖組分。 ? 本實驗利用紅外光譜對多糖進行鑒定。 0— H的吸收峰在 3650— 3590cm－ 1， C— H的 I申縮振動的吸收峰在 2962— 2853cm－ 1， C＝ O的振動峰為 1510— 1670－ 1之間的吸收峰， C— H的彎曲振動吸收峰為 1485— 1445cm－ 1，毗喃環(huán)結(jié)構(gòu)的 C— 0的吸收峰為 1090cm－ 1。 ? 展開劑 :正丁醇：乙酸乙酯：異丙醇：醋酸：乙醇：水：吡啶＝ 7： 20： 12： 7： 6： 6。 ? 單糖標(biāo)準品。 ? 操作方法 ? 一、單糖組分分析 ? 1．薄層板制備：稱取硅膠 5g于 50ml燒杯中，加入用 12 mL ／ L 磷酸二氫鈉水溶，用玻璃棒慢慢攪拌至硅膠分散均勻，鋪在玻璃板上(7． 5cm 10cm)， 110℃ 活化 1h。 ? 2．點樣：稱取少許的多糖 (0． 1克 )于 2． 0mL離心管中，加入 1M
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