chap糖類藥物ppt課件-文庫(kù)吧在線文庫(kù)
【正文】 處理。 ? （ 1）堿解法 多糖與蛋白質(zhì)結(jié)合的 糖肽鍵 對(duì)堿不穩(wěn)定，故可用堿解法使糖與蛋白質(zhì)分開(kāi)。 B: NaCl, mol TrisHCl PH=。 ? 二、粗多糖的純化 ? 粗多糖溶液加入 Sevag試劑 (氯仿：正丁醇＝ 3： 1混合搖勻 )后，置恒溫振蕩器中震蕩過(guò)夜，使蛋白質(zhì)充分沉淀，離心 (3000r／ min)分離，去除蛋白質(zhì)。薄層層析顯色后，比較多糖水解所得單糖斑點(diǎn)的顏色和 Rf值與不同單糖標(biāo)樣參考斑點(diǎn)的顏色和 Rf值，確定樣品多糖的單糖組分。 ? 單糖標(biāo)準(zhǔn)品。 ? 3．展開(kāi)：展開(kāi)室如需預(yù)先用展開(kāi)劑飽和，將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開(kāi)室的展開(kāi)劑中，浸入展開(kāi)劑的深度為距薄層板底邊 — （切勿將樣點(diǎn)浸入展開(kāi)劑中），密封室蓋，等展開(kāi)至規(guī)定距離（一般為 10— 15cm），取出薄層板，晾干。 ? 操作方法 ? 一、單糖組分分析 ? 1．薄層板制備：稱取硅膠 5g于 50ml燒杯中，加入用 12 mL ／ L 磷酸二氫鈉水溶，用玻璃棒慢慢攪拌至硅膠分散均勻，鋪在玻璃板上 (7． 5cm 10cm)， 110℃ 活化 1h。 ? 薄層顯色后，將樣品圖譜與標(biāo)準(zhǔn)樣圖譜進(jìn)行比較，參考斑點(diǎn)顏色、相對(duì)位置及 Rf值，確定樣品中有哪幾種糖。用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣于薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底邊 ，點(diǎn)樣直徑為 2— 4mm，點(diǎn)間距離約為 — ，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜。 ? 展開(kāi)劑 :正丁醇：乙酸乙酯：異丙醇：醋酸：乙醇：水：吡啶＝ 7： 20： 12：7： 6： 6。 ? 2．點(diǎn)樣：稱取少許的多糖 (0． 1克 )于 2． 0mL離心管中，加入 1M的硫酸 1mL，沸水浴水解 2h，然后加氫氧化鋇中和至中性，過(guò)濾除去硫酸鋇沉淀，得多糖水解澄清液。 0— H的吸收峰在 3650— 3590cm－ 1， C— H的 I申縮振動(dòng)的吸收峰在
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