a-淀粉酶發(fā)酵的生產(chǎn)工藝-在線(xiàn)瀏覽
2024-12-13 11:24本頁(yè)面
【正文】 本發(fā)酵屬于一級(jí)種子罐擴(kuò)大培養(yǎng)，二級(jí)發(fā)酵。 (2)種子制備 將保藏的菌種接種到馬鈴薯茄子瓶斜面（ 20%馬鈴薯煎出汁加 MgSO4然后接入到 20L種子罐， 37℃攪拌，通風(fēng)培養(yǎng) 12～ 14小時(shí)。 (3)發(fā)酵罐培養(yǎng) 培養(yǎng)基的配制：用麥芽糖液配置成含麥芽糖 6％、豆粕水解液 6％～ 7％、Na2HPO4 發(fā)酵罐培養(yǎng)基經(jīng)消毒滅菌冷卻后接入 3%～ 5%種子培養(yǎng)成熟液。 1℃，罐壓 ／ cm2，風(fēng)量 1～ 20h 為 1： ， 20 h后 1： ，培養(yǎng)時(shí)間為 28～ 36 h。分裝于 100mL錐形瓶中，每瓶 50mL， 121℃ 滅菌 20min。 37℃ 振蕩培養(yǎng) 48 h。 2 α淀粉酶的菌種選育 α淀粉酶生產(chǎn)：以枯草芽孢桿菌 14140 為出發(fā)菌株 ,經(jīng)亞硝基胍反 復(fù)多次處理10 10 10 和篩選生產(chǎn) α淀粉酶。最佳反應(yīng)條件為：萃取溫度 40℃，水相組成為 NaCl0. 03 mol/L， pH 12. 0，有機(jī)相：無(wú)機(jī)相 =1∶ 2，振蕩時(shí)間 10 min；反萃取最佳條件為：溫度 60℃，水相組成為 KCl3 mol/L， pH 4. 0，有機(jī)相∶無(wú)機(jī)相 =2∶ 1，反萃取振蕩時(shí)間 10 min。 菌株與培養(yǎng)方法 培養(yǎng)基 BY 斜面培養(yǎng)基每 100 g 含可溶性淀粉 1 g ，牛肉膏 1 g，蛋白胨 1 g，酵母膏 g， NaCl g，瓊脂 2 g. BY 發(fā)酵培養(yǎng)基每 100 g 含可溶性淀粉 5 g，牛肉膏 1 g，蛋白胨 g，酵母膏 g， NaCl ， CaCl21 g。 儀器設(shè)備 全自動(dòng)高壓滅菌鍋、培養(yǎng)皿、恒溫培養(yǎng)箱、超凈工作臺(tái)、恒溫?fù)u床、離心機(jī)、分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、移液管、 PH 試紙、吸耳球、玻璃棒、量筒、試管、試管架、酒精燈、電子天平、三角燒瓶、洗瓶、接種針、接種環(huán)、直尺、記號(hào)筆等。將細(xì)菌從斜面接種到淀粉培養(yǎng)基培養(yǎng) 2 天，用碘液染色，記錄透明 圈大小和菌落直徑，計(jì)算 D/d 值。 2． 2． 2 紫外線(xiàn)誘變育種： 取活化后的菌種配成 菌懸液、稀釋?zhuān)坏沟矸叟囵B(yǎng)基平板，將菌懸液涂布其表面；用紫外線(xiàn)處理平板 0、 2min、 4min、 6min、 8min、 10min，每個(gè)處理 2 次重復(fù)；放到黑暗中倒置培養(yǎng)， 37℃培養(yǎng) 48h，分別計(jì)數(shù)誘變組和對(duì)照組平板上的菌落數(shù)，并計(jì)算致死率；加入碘液，分別測(cè)量誘變組和對(duì)照組菌落的透明圈直徑和菌落直徑，計(jì)算 D/d 值；將 D/d 值最大的菌種保存到斜面培養(yǎng)基上。 ② 以 NTG為誘變劑，按一定處理劑量 (μg/ml)，在一定 pH值的緩沖液中 30℃恒溫振蕩處理 1~4 h。 ④經(jīng)稀釋涂布在含有 1%淀粉 BY 固體培養(yǎng)基上，經(jīng) 24 h 培養(yǎng)形成小菌落。 ⑥用 2定性濾紙制成 5 mm disc(小圓紙片 )，并用 2%瓊脂 BY 培養(yǎng)基滅菌后加入較大劑量青霉素 (抑菌 )。然后把 5 mm disc 紙順序放在培養(yǎng)基表面。把 disc 培養(yǎng)皿經(jīng)37℃， 24h 分別培養(yǎng)。把各種斜面菌株經(jīng)活化培養(yǎng)，接種于 1%淀粉培養(yǎng)基的三角瓶中，進(jìn)行搖瓶比較實(shí)驗(yàn)。經(jīng)菌種誘變選育 α淀粉酶高產(chǎn)菌株為誘變的出發(fā)菌株，經(jīng) NTG 反復(fù)多次處理，并經(jīng)淀粉水解圈初篩和搖瓶復(fù)篩，來(lái) 選育 α淀粉酶高產(chǎn)菌株。在經(jīng) 5 次 NTG 處理之后，其變異株 α淀粉酶活達(dá)到 34 200 (U/ml)，較出發(fā)菌株提高了 倍以上，說(shuō)明該誘變處理及選育方法
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