dns法測定α-淀粉酶活力的方法-在線瀏覽
2025-02-22 02:55本頁面
【正文】 定淀粉酶作用于淀粉后生成的還原糖的量，以單位樣品（重量或體積）在一定時間內(nèi)生成的麥芽糖的量表示酶活力。 注意： 去除 β淀粉酶的干擾（ β淀粉酶不熱耐，在 70℃ 15min鈍化 ） —— 植物材料來源需要注意。 檢測的原理： 酶解的產(chǎn)物之一 —— 麥芽糖具有還原性，可以使試劑中的 3， 5二硝基水楊酸還原，形成紅色的物質(zhì)，在 540nm下有吸收峰，并和濃度呈一定線性關(guān)系。 3， 5二硝基水楊酸（ DNS）試劑 配制說明 21g 氫氧化鈉（先加入溶解）； 182g 酒石酸鉀鈉（同上）； DNS（ 3， 5二硝基水楊酸），加熱完全溶于上述溶液中； 5g 重蒸苯酚（冷卻后加入）； 5g 無水亞硫酸鈉（冷卻后加入）； 完全溶解后定容至 1000ml，貯存時間越長越穩(wěn)定。 理想的標(biāo)準(zhǔn)曲線滿足以下條件： 至少 5個點(diǎn)，一般不超過 7個點(diǎn)； 2個以上重復(fù)值； 重復(fù)值誤差小于 5%； 點(diǎn)與線的垂直距總和最??； 注意： 標(biāo)準(zhǔn)曲線不能任意延長?。ㄓ幸欢y定范圍） 理想標(biāo)準(zhǔn)曲線的特點(diǎn) 過原點(diǎn)的直線； 斜率為 1（ 45176。 mg/ml 麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 取 6支干凈的具塞刻度 25mL比色管，編號，按下表中加入相關(guān)試劑； 混勻后，置沸水浴中煮沸 5min。以 1號管作為空白調(diào)零點(diǎn)，在 540nm波長下比色測定光密度。 —— 沸水浴時不要加塞！ 利用 Excel中相關(guān)統(tǒng)計(jì)分析工具，完成回歸方程的計(jì)算及分析，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。 ： 稱取檸檬酸（ C6H8O72H2O） ，用蒸餾水溶解并定容至 1000mL。 相關(guān)試劑（第二種） 標(biāo)準(zhǔn)麥芽糖溶液（ 1mg/mL）： 精確稱取
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