表達產(chǎn)物的分離純化-在線瀏覽
2025-07-17 06:06本頁面
【正文】 的溶質(zhì)濃度不同 ， 在濃度差的作用下 ， 左側(cè)中的小分子溶質(zhì)透向右側(cè) ， 右側(cè)中的水或緩沖液透向左側(cè) 。 脫鹽； 去除小分子雜質(zhì)； 置換緩沖液 。 加壓 蛋白質(zhì)溶液 半透膜 支持膜的柵板 超濾液 超濾： 具有一定孔徑的半透膜在一定壓力下 ， 膜內(nèi)小分子能通過膜孔滲透到膜外 ， 而大分子不能通過 ， 使大小不同的分子達到分離的目的 。 超濾的用途： 脫鹽； 去除小分子雜質(zhì)； 濃縮； 除菌。 不結(jié)合的先被洗脫下來， 結(jié)合力弱的其次 ， 結(jié)合力強的后被洗脫下來 。 2） 所含 可解離基團 在水溶液中能與其它陰 、 陽離子起交換作用 。 4） 通過 改變 pH， 可使吸附在離子交換劑上的蛋白質(zhì)失去電荷而解離下來 。 離子交換劑的分類 帶正電荷，結(jié)合帶負電荷的蛋白質(zhì) 強堿型 弱堿型 陽離子交換劑： 陰離子交換劑： 選擇陰離子還是陽離子交換劑，決定于被分離物質(zhì)所帶的電荷性質(zhì)。 電離率基本不受 pH影響 ， 離子交換作用的 pH范圍寬 。 弱陰離子交換劑： 弱陽離子交換劑： pH升高時，電離率逐漸降低，離子 交換能力逐漸減弱。 優(yōu)點： 流速快 ， 對小分子物質(zhì)的交換容量大 ，適于氨基酸 、 核苷酸等 小分子 物質(zhì)的純化 。 陽離子型： 羥甲基纖維素 (CM纖維素 )； 陰離子型： 二乙基氨基乙基纖維素 (DEAE纖維素 )。 1） 親水性強 ， 不會引起生物分子的變性 、 失活 ，母鏈對蛋白質(zhì) 、 核酸等的非特異性吸附小 。 3）既有離子交換作用，又有分子篩效應(yīng)。 DEAESepharose 陰離子型 ： 陽離子型 ： 離子交換介質(zhì)的選擇原則 堿性物質(zhì) ：用陽離子交換劑分離。 兩性電解質(zhì) （如氨基酸、核苷酸、蛋白質(zhì)）： 根據(jù)其 pI值及離子化曲線來選擇。 在 ，蛋白質(zhì)為陽離子， 首選 CM纖維素。 離子交換層析的基本操作 樣品進柱 交換容量： 離子交換劑中可交換的離子或功能基團的總數(shù)。 為避免進樣溶液中的離子強度過高 ， 樣品 濃度不宜太高 。 小分子物質(zhì) 要通過凝膠網(wǎng)孔進入凝膠顆粒內(nèi)部 ， 遷移速度慢 。 分子直徑比凝膠最小孔隙直徑小的 ， 能進入凝膠顆粒的全部孔隙 ， 即使大小不同 ， 也不能分開 ， 它們的下行速度慢 。 1）葡聚糖凝膠 種類有 Sephadex G G1 G2 G50、G7 G100、 G150、 G200， G50表示 1g干凝膠吸水量為 5ml。 Sepharose： Sepharose 2B、 4B、 6B （ 數(shù)字代表干膠的百分比 ） BioGelA： BioGelA 、 、 5M、 15M、 50M、 150M （ 數(shù)字 106代表排阻限度 ） 2） 瓊脂糖凝膠 瓊脂糖凝膠是從瓊脂中分離出的天然凝膠 ，常見的有： 溫度高于 50℃ 時 ， 瓊脂糖凝膠融化 ， 只能在較低溫度下使用 。 Sepharose CL是二溴丙醇交聯(lián)瓊脂糖
黨政相關(guān)相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1