核酸的分離純化ppt課件-在線瀏覽
2024-12-21 23:11本頁面
【正文】 以及和其他生物大分子結合的方式。 3） 保持一定 離子強度 。 所用器械和一些試劑需高溫 滅菌 ，提取緩沖液中需加 核酸酶抑制劑 。如 EDTANa2(乙二胺四乙酸二鈉 )、 8羥基喹啉； (2） 陰離于型表面活性劑： 如 SDS，該試劑除對核酸酶有抑制作用外，還能使蛋白質變性，并與變性蛋白結合成帶負電荷的復合物，該復合物在高鹽溶液中沉淀。 (1) 皂土（ bentonite ） 作用機制： 皂土帶負電荷，能 吸附 RNase，使其失活。 作用機制： 與蛋白質中 His結合使蛋白變性。但濃度比使蛋白質變性的濃度大 100～ 1000倍。 4）劇毒 。 分離核酸 最困難 的是將與核酸緊密結合的蛋白質分開，同時避免核酸降解。 氯仿比重大，能加速有機相與水相分層，減少殘留在水相中的酚，同時氯仿具有去除植物色素和蔗糖的作用。 (1）使用注意 酚通常是透明無色的結晶，如果酚結晶呈現(xiàn)粉紅色或黃色，表明其中含有酚的氧化產(chǎn)物，例如醌、二酸等。 (2）安全操作 酚腐蝕性很強，并可引起嚴重的灼傷，操作時應戴手套。 優(yōu)點 ： ①改變核酸的溶解緩沖液； ②重新調整核酸的濃度； ③去除溶液中某些鹽離子與雜質。 有機沉淀劑 （ 1）乙醇 優(yōu)點： 對鹽類沉淀少，沉淀中所含跡量乙醇易揮發(fā)除去，不影響以后實驗。 （ 2）異丙醇 優(yōu)點： 需體積小，速度快，適于濃度低、體積大的DNA樣品沉淀。 缺點 ： 易使鹽類、蔗糖與 DNA共沉淀．異丙醇難以揮發(fā)除去。 （ 3）聚乙二醇（ PEG） 優(yōu)點： 可用不同濃度的 PEG選擇沉淀不同相對分子質量的 DNA片段。
教學課件相關推薦
鄂ICP備17016276號-1