蛋白質(zhì)的分離純化ppt課件-在線瀏覽
2025-06-24 13:48本頁(yè)面
【正文】 質(zhì)（親水膠體） 帶負(fù)電荷蛋白質(zhì)（親水膠體） 脫水 脫水 脫水 帶負(fù)電荷蛋白質(zhì)（疏水膠體） 不穩(wěn)定蛋白顆粒 陰離子 陽(yáng)離子 堿 酸 酸 蛋白質(zhì) 聚集 沉淀 帶正電荷蛋白質(zhì)（親水膠體） 堿 + + 水化膜 帶正電荷蛋白質(zhì)（疏水膠體） 19 ⑵ 中性鹽的選擇 ? 常用的中性鹽中最重要的是 （ NH4） 2SO4，因?yàn)樗c其他常用鹽類相比有十分突出的優(yōu)點(diǎn)： 1) 溶解度大：尤其是在低溫時(shí)仍有相當(dāng)高的溶解度 ， 這是其他鹽類所不具備的 。 由下表可以看到 ， 硫酸銨在 0℃ 時(shí)的溶解度 ， 遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其它鹽類： 20 幾種鹽在不同溫度下的溶解度 （克 /100毫升水） ? 0℃ 20℃ 80℃ 100 ℃ （ NH4)2SO4 103 Na2SO4 NaH2PO4 101 ? 硫酸銨在 0℃ 時(shí)的溶解度 ， 遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其它鹽類： 21 ? 2) 分離效果好：有的提取液加入適量硫酸銨鹽析 ， 一步就可以除去 75％ 的雜蛋白 ，純度提高了四倍 。 有的酶或蛋白質(zhì)用 2～ 3mol/L濃度的 （ NH4） 2SO4保存可達(dá)數(shù)年之久 。 22 （ 3）分段鹽析 ? 不同的蛋白質(zhì)分子，由于其分子表面的極性基團(tuán)的種類、數(shù)目以及排布的不同，其水化層厚度不同，故鹽析所需要的鹽濃度也不一樣，因此調(diào)節(jié)鹽濃度，可以使不同的蛋白質(zhì)分別沉淀。低濃度的蛋白質(zhì)，共沉淀作用小，但回收率降低。 ? 2) pH值：在等電點(diǎn)處溶解度小 ， 因此溶液的 pH值常選在該蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)附近 。 但對(duì)于某些對(duì)溫度敏感的蛋白質(zhì) ， 要求在 0℃ ～ 4℃ 下操作 ， 以避免活力喪失 。 ②由于使用的有機(jī)溶劑與水互溶，它們?cè)谌芙庥谒耐瑫r(shí)從蛋白質(zhì)分子周圍的水化層中奪走了水分子，破壞了蛋白質(zhì)分子的水膜，因而發(fā)生沉淀作用。 ② 沉淀不用脫鹽 ， 過(guò)濾比較容易 （ 如有必要 ， 可用透析袋除去有機(jī)溶劑 ） 。 其缺點(diǎn)是對(duì)某些具有生物活性的大分子容易引起變性失活 ， 操作需在低溫下進(jìn)行 。蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)，可以利用此法進(jìn)行初步的沉淀分離。 27 5. 有機(jī)聚合物沉淀法 ? 有機(jī)聚合物是六十年代發(fā)展起來(lái)的一類重要的沉淀劑 ， 最早應(yīng)用于提純免疫球蛋白和沉淀一些細(xì)菌和病毒 。 ? 28 ? 本方法的優(yōu)點(diǎn)是： ? ① 操作條件溫和 ， 不易引起生物大分子變性 。 ? ③ 沉淀后有機(jī)聚合物容易去除 。 透析已成為最簡(jiǎn)便最常用的分離純化技術(shù)之一 。 ? 透析只需要使用專用的半透膜即可。 30 7. 超濾 ? 超過(guò)濾即超濾 ， 自 20年代問(wèn)世后 ， 直至 60年代以來(lái)發(fā)展迅速 ， 很快由實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的分離手段發(fā)展成重要的工業(yè)操作技術(shù) 。 ? 超濾是一種加壓膜分離技術(shù) ， 即在一定的壓力下 ，使小分子溶質(zhì)和溶劑穿過(guò)一定孔徑的特制的薄膜 ，
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