蛋白質(zhì)純化色譜技術(shù)-在線瀏覽
2025-06-19 05:27本頁面
【正文】 nt 196。KTAFPLC 196。KTApilot 18 Downstream setup STREAMLINE? 200 column, containing 5 L of STREAMLINE rProtein A in expanded mode 100 L scale fermentor 19970616 19 196。KTAdesign an evolving platform 1996: 196。KTApurifier peptide and nucleic acid purification 1998: 196。KTAprime simple protein purification 2022: New fraction collector, sample pump and software 19970616 21 196。KTApurifier High performance purification and characterisation of peptides and nucleic acids Options: ?Autosampler ?Sample pump ?Valves ?Air sensors ?Optimised for high performance purification 19970616 23 196。KTA prime ?Reliable, well proven technology Options: ?Valves ?Sample Pump ?Air sensors 色譜操作一般過程 裝柱 緩沖溶液 平衡 上樣 收集 洗脫 活性檢測 色譜分離的基本概念 ? 分配系數(shù) ? 可由 Langmuir方程得出 ? Kd分配系數(shù) ? q、 c溶質(zhì)在固相和液相中的濃度 cqK d ?分配系數(shù) 蛋白質(zhì)實驗技術(shù)－層析純化 ? 指一定溫度下 ,處于平衡狀態(tài)時，組分在固定相中的濃度和在流動相中的濃度之比，以 K表示。 ? 保留時間（ tR） 和 保留體積（ VR） ? 反應(yīng)樣品在柱子中的保留或阻滯能力，是色譜 過程的基本熱力學參數(shù)之一 ? 阻滯因子 Rf ? 阻滯因子是在色譜系統(tǒng)中溶質(zhì)的 移動速度 和 標準物 （與固定相沒有親和力的流動相 Kd=0）的遷移率之比 其意義在于 體現(xiàn)某一種溶質(zhì)與固定相之間的親和力大小 遷移距離流動相在色譜系統(tǒng)中的溶質(zhì)的遷移距離?fRsdmmf AKAAR??理論塔板數(shù) 蛋白質(zhì)實驗技術(shù)－層析純化 ? number of theoretical plates ? 色譜的柱效參數(shù) ,用于定量表示色譜柱的分離效率（簡稱柱效）。 ? 色譜柱的理論塔板數(shù)、塔板高度 反應(yīng)不同時刻溶質(zhì)在色譜柱中的分布以及分離度與柱高之間的關(guān)系 ? 理論塔板數(shù)的計算方法： N理論塔板數(shù) tR保留時間 W1/2半峰寬 Wb峰底寬度 理論塔板高度： L柱長 22/1)(WtN R? 2)(16bRWtN ?NLH ?分辨率 (Resolution) 蛋白質(zhì)實驗技術(shù)－層析純化 ? 分離度 (Rs)。 Rs= 2(θR1－ θR2) W1＋ W2 相關(guān)視頻 ? Tricorn柱裝填 ； ? XK柱裝填； ? 柱效檢測。不同的蛋白質(zhì)分子通過凝膠微孔時因遷移能力不同而被分離。大分子先被洗脫，小分子后被洗脫。 ? 經(jīng)典的凝膠介質(zhì) ? Sepharose系 : 經(jīng)過純化的瓊脂糖，含極少的帶電集團。 ? 經(jīng)濟高效 ? Superdex系 ： 是葡聚糖與瓊脂糖共聚而成的復(fù)合凝膠。微粒越小，柱效越高，峰形越狹窄，分離度越高。 ? 上樣：上樣量；樣品濃度 70mg/ml。 三、離子交換色譜 Ion Exchange Chromatography， IEX 分離原理 ： 根據(jù)蛋白質(zhì)的帶電類型（陽離子或陰離子），以離子交換樹脂作為固定相，選擇合適的溶劑作為流動相，使溶質(zhì)按照其離子交換親合力的不同而得到分離的方法 DEAECl 蛋白質(zhì) － DEAECl + DEAE 蛋白質(zhì) NaCl 蛋白質(zhì) Cl 陰離子交換色譜原理 基質(zhì) 基質(zhì) 基質(zhì) 官能團 二乙氨乙基（ Dicthylaminoethyl， DEAE） 原理 蛋白質(zhì)實驗技術(shù)－層析純化 分離譜 蛋白質(zhì)實驗技術(shù)－層析純化 色譜條件 ? pH：
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