蛋白質(zhì)分離技術(shù)ppt課件-在線瀏覽
2025-03-06 09:11本頁(yè)面
【正文】 in一次），至達(dá)到透析平衡為止。 ? 層析法也稱色譜法，是 1906年俄國(guó)植物學(xué)家Michael Tswett發(fā)現(xiàn)并命名的。 2022/2/11 Biochemistry Experiments 13 名稱 操作方式 固定相 流動(dòng)相 分離依據(jù) 分配層析 紙層析 薄層層析 液體 液體 溶解度 離子交換層析 離子交換柱層析 固體 液體 帶電性 靜電引力 吸附層析 吸附薄層層析 氣體吸附層析 固體 固體 液體 氣體 吸附力 親和層析 酶與底物 抗原與抗體 固體 液體 配體專一性 凝膠層析 凝膠過(guò)濾 固體 液體 分子大小 2022/2/11 Biochemistry Experiments 14 常用的層析原理 分配層析 原理： 溶質(zhì)在互不相溶的兩相中溶解度不同，在終點(diǎn)時(shí)達(dá)到一種平衡，其比值為一個(gè)常數(shù)，即分配系數(shù)（ α）。 2022/2/11 Biochemistry Experiments 16 常用的層析原理 離子交換層析 低鹽濃度 洗脫液 高鹽濃度 洗脫液 各試管進(jìn)行連續(xù)收集 混合蛋白質(zhì) + + + + + + + + + + + + + + + + 離子交換層析分離蛋白質(zhì)示意圖 2022/2/11 Biochemistry Experiments 17 離子交換層析分離蛋白質(zhì)示意圖 用 高 濃 度 的陰 離 子 洗 脫— 帶 負(fù) 電 荷 少 的蛋 白 質(zhì) 先 洗 脫 下 來(lái)++++ ++++++———————————————+++++++++++——————用 低 濃 度 的陰 離 子 洗 脫++++ ++++++———————————————+++++++++++++++ ++++ +++++++++++++———————————————————————— 帶 負(fù) 電 荷 多 的蛋 白 質(zhì) 后 洗 脫 下 來(lái)陰 離 子 交 換 劑———————常用的層析原理 離子交換層析 用低濃度的 陰離子洗脫 用高濃度的 陰洗脫離子 陰離子交換劑 帶負(fù)電荷的蛋白 少的先洗脫下來(lái) 帶負(fù)電荷的蛋白 多的后洗脫下來(lái) 2022/2/11 Biochemistry Experiments 18 常用的層析原理 吸附層析 ? 原理： 利用吸附劑對(duì)混合試樣各組分吸附力不同而使各組分分離。 2022/2/11 Biochemistry Experiments 19 常用的層析原理 吸附層析 吸附劑 易吸附分子 不易吸附分子 吸附劑： 氧化鋁、活性炭、硅膠；纖維素、 淀粉、聚酰胺；滑石、陶土、粘土。 ? 專一親和力分子對(duì)： 酶與底物、特異性抗原與抗體、 DNA和 RNA、激素和其受體。當(dāng)一混合溶液通過(guò)凝膠過(guò)濾層析柱時(shí)，溶液中的物質(zhì)就按不同分子量篩分開。大分子物質(zhì)直徑大無(wú)法進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)，只能分布于顆粒間隙中向下移動(dòng)快，而小分子物質(zhì)可擴(kuò)散到凝膠顆粒內(nèi)，因此向下移動(dòng)慢。 相對(duì)分子質(zhì)量較小 的物質(zhì)由于直徑小于凝膠網(wǎng)孔，可 完全滲透 進(jìn)入凝膠顆粒的網(wǎng)孔，在向下移動(dòng)過(guò)程中，因此流程較長(zhǎng)，移動(dòng)速率慢；所以 最后流出 。 這樣樣品經(jīng)過(guò)凝膠層析后，各個(gè)組分便按分子從大到小的順序依次流出，從而達(dá)到了分離的目的。其定義為： Kd=（ Ve一 V0） / Vi Ve，某一被分離物成分被洗脫時(shí)所用洗脫液的體積 Vo，凝膠顆粒間自由空間的總體積 Vi，膠顆粒內(nèi)部孔穴的總?cè)莘e 大分子物質(zhì)，其 Kd=0，小分子能全部進(jìn)人膠粒內(nèi)的Kd=1，中等大
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