腫瘤藥理實驗方法與技術(shù)-在線瀏覽
2024-11-07 20:03本頁面
【正文】 克隆原細(xì)胞存活曲線，方程為 S=1(1eD/Do)n， S為存活分?jǐn)?shù)， D 為劑量， Do為存活分?jǐn)?shù)每下降 1/ e 時所需的藥物劑量， n為外推值。 硫化若丹明 B法（ SRB）法 硫化若丹明（ sulforhamine B）呈粉紅色，溶于水，可與生物大分子的堿性氨基酸結(jié)合，這種結(jié)合物在波長 515nm 時的讀數(shù)與細(xì)胞表現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，可用于細(xì)胞的定量?？筛鶕?jù)下述公式計算 : T T0 生長率（ %） = 100% C T0 C、 T和 To分別為對照組細(xì)胞，為給藥組細(xì)胞，另外的對照平板加藥時的細(xì)胞的 OD值。取接種于 DBA/2小鼠第 6～7 天之腹水，制成細(xì)胞懸液，每只小鼠（ DBF1 或 CDF1）腹腔接種活細(xì)胞 1 105，觀察體重變化，計算平均存活時間 T/C（ T治療組存活時間， C對 照組存活時間）。 大鼠 Walker256瘤 本瘤細(xì)胞接種在皮下或肌肉成為實體瘤，接種于腹腔則成為腹水瘤。計算瘤重和T/C。 Lewis 肺癌 是一個在 C57BL/6小鼠上發(fā)現(xiàn)的自發(fā)性肺內(nèi)未分化的上皮樣癌。方法是取接種于 C57BL/6小鼠肌肉或腋窩皮下的 13～ 15天的 Lewis肺癌，制成細(xì)胞懸液接種 2 106個細(xì)胞于 BDF1小鼠皮下或腹腔內(nèi)， 12天后處死動物，作皮下接種者直接摘取腫瘤稱重，作腹腔接種者，將雙側(cè)后肢從髖關(guān)節(jié)處剪下，荷瘤肢重減去正常肢重即為瘤重。 二、抗癌作用機(jī)制研究 （一）藥物作用周期特異性研究 進(jìn)行藥物作用細(xì)胞周期性實驗必須首先制備同步化的細(xì)胞，常用的體外培養(yǎng)細(xì)胞同步化的方法有機(jī)械振蕩法、雙胸苷同步法、含羞草氨酸 俘獲法和離心洗脫法。雙胸苷同步法的原理是先以高濃度的 TdR處理細(xì)胞，使細(xì)胞內(nèi)的 dTTP升高，后者抑制 CDP 向 dCDP的轉(zhuǎn)變， DNA復(fù)制受阻， S期細(xì)胞停滯在S 期，其它期細(xì)胞積聚在 G1/S邊界；撤 TdR，讓原處于 S期的細(xì)胞完全越過 S期，再給予TdR，讓越過 S期的細(xì)胞進(jìn)入 G1/S邊界，然后撤去 TdR，讓細(xì)胞重新生長 ，同時進(jìn)入 S期。 含羞草氨酸俘獲法 含羞草氨酸可將細(xì)胞集結(jié)于 G1/S 邊界，阻止細(xì)胞進(jìn)入 S期。 離心洗脫法 離心洗脫法的原理是進(jìn)入細(xì)胞周期的的體積呈線性增加。 G2/M細(xì)胞體積最大離進(jìn)氣口最
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