腫瘤藥理實驗方法與技術(shù)(已修改)
2024-09-20 20:03 本頁面
【正文】 第七節(jié) 腫瘤藥理實驗方法與技術(shù) 腫瘤藥理實驗方法無外乎體內(nèi)和體外實驗兩種。從實驗?zāi)康纳峡矗挚梢苑殖煽拱┳饔煤涂拱┳饔脵C制研究兩種。 一、抗癌作用研究 （一）體外實驗法： 用培養(yǎng)的腫瘤細胞系進行。 噻唑藍（ MTT）法 在培養(yǎng)的活細胞線粒體中與 NADP相關(guān)的脫氫酶可將黃色的四氮唑（ MTT）催化成不溶性的藍紫色的甲替，將甲替用二甲基亞砜（ DMSO）溶解后，利用酶標儀（試驗波長 570nm，參比波長 450nm）測定光密度值，按照公式 實驗組光密度值 腫瘤細胞生長抑制率（ %） =（ 1 ） 100% 對照組光密度值 計算藥物對腫瘤細胞生長的抑制率。用系列濃度的藥物可制作腫瘤細胞生長抑制率的量效曲線。 染料排斥法 本方法是根據(jù)活細胞具有排斥某些染料的功能，而死細胞因胞膜破壞而易于被染料著色的原理，在培養(yǎng)的對數(shù)生長期的細胞懸液中加入伊紅、臺盼藍、或苯胺黑等染料，在室溫下放置 5分鐘后，在 15分鐘用 血球計數(shù)板計數(shù) 200個細胞。根據(jù)公式 未染細胞數(shù) 活細胞率（ %） = 100% 細胞總數(shù) 生長曲線法 本方法是根據(jù)腫瘤的 Gompertzian 生長曲線而設(shè)計。培養(yǎng)的腫瘤細胞在初期為指數(shù)增殖期，隨著細胞密度的增加，因代謝產(chǎn)物的積聚和營養(yǎng)物質(zhì)的消耗，增殖趨于減緩乃至停止，進入所謂的平臺期。在培養(yǎng)后的的即刻、 7 天的細胞，用臺盼藍染色，細胞計數(shù)，然后取細胞對數(shù)對培養(yǎng)時間作圖可獲細胞生長曲線。 1）將生長曲線外延 至 Y軸可獲得截距 No`，用公式 %100No N o`No ??對增殖細胞的殺傷力 計算藥物對增殖細胞的殺傷力（ No`是對照組的的截距） 2）用 Nt代表接種后 t小時的細胞數(shù)， 用公式 TD = / logNt LogNo 計算藥物對細胞增增時間（ TD）的影響。 3） 取平臺期每毫升的細胞均數(shù)，比較細胞生長的飽合密度（ Ns）。 集落形成法 本方法利用分裂 ? 6代以上的克隆原單細胞子細胞可形成集 落成簇（每簇細胞數(shù)＞ 50）的能力，比
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