腫瘤藥理實(shí)驗(yàn)方法與技術(shù)(已修改)
2024-09-20 20:03 本頁面
【正文】 第七節(jié) 腫瘤藥理實(shí)驗(yàn)方法與技術(shù) 腫瘤藥理實(shí)驗(yàn)方法無外乎體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)兩種。從實(shí)驗(yàn)?zāi)康纳峡矗挚梢苑殖煽拱┳饔煤涂拱┳饔脵C(jī)制研究?jī)煞N。 一、抗癌作用研究 （一）體外實(shí)驗(yàn)法： 用培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞系進(jìn)行。 噻唑藍(lán)（ MTT）法 在培養(yǎng)的活細(xì)胞線粒體中與 NADP相關(guān)的脫氫酶可將黃色的四氮唑（ MTT）催化成不溶性的藍(lán)紫色的甲替，將甲替用二甲基亞砜（ DMSO）溶解后，利用酶標(biāo)儀（試驗(yàn)波長(zhǎng) 570nm，參比波長(zhǎng) 450nm）測(cè)定光密度值，按照公式 實(shí)驗(yàn)組光密度值 腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率（ %） =（ 1 ） 100% 對(duì)照組光密度值 計(jì)算藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率。用系列濃度的藥物可制作腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率的量效曲線。 染料排斥法 本方法是根據(jù)活細(xì)胞具有排斥某些染料的功能，而死細(xì)胞因胞膜破壞而易于被染料著色的原理，在培養(yǎng)的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞懸液中加入伊紅、臺(tái)盼藍(lán)、或苯胺黑等染料，在室溫下放置 5分鐘后，在 15分鐘用 血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù) 200個(gè)細(xì)胞。根據(jù)公式 未染細(xì)胞數(shù) 活細(xì)胞率（ %） = 100% 細(xì)胞總數(shù) 生長(zhǎng)曲線法 本方法是根據(jù)腫瘤的 Gompertzian 生長(zhǎng)曲線而設(shè)計(jì)。培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞在初期為指數(shù)增殖期，隨著細(xì)胞密度的增加，因代謝產(chǎn)物的積聚和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消耗，增殖趨于減緩乃至停止，進(jìn)入所謂的平臺(tái)期。在培養(yǎng)后的的即刻、 7 天的細(xì)胞，用臺(tái)盼藍(lán)染色，細(xì)胞計(jì)數(shù)，然后取細(xì)胞對(duì)數(shù)對(duì)培養(yǎng)時(shí)間作圖可獲細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。 1）將生長(zhǎng)曲線外延 至 Y軸可獲得截距 No`，用公式 %100No N o`No ??對(duì)增殖細(xì)胞的殺傷力 計(jì)算藥物對(duì)增殖細(xì)胞的殺傷力（ No`是對(duì)照組的的截距） 2）用 Nt代表接種后 t小時(shí)的細(xì)胞數(shù)， 用公式 TD = / logNt LogNo 計(jì)算藥物對(duì)細(xì)胞增增時(shí)間（ TD）的影響。 3） 取平臺(tái)期每毫升的細(xì)胞均數(shù)，比較細(xì)胞生長(zhǎng)的飽合密度（ Ns）。 集落形成法 本方法利用分裂 ? 6代以上的克隆原單細(xì)胞子細(xì)胞可形成集 落成簇（每簇細(xì)胞數(shù)＞ 50）的能力，比
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