腫瘤藥理實驗方法與技術-資料下載頁
2025-08-26 20:03本頁面
【導讀】腫瘤藥理實驗方法無外乎體內和體外實驗兩種。從實驗目的上看，又可以分成抗癌作用。（一）體外實驗法：用培養(yǎng)的腫瘤細胞系進行。計算藥物對腫瘤細胞生長的抑制率。用系列濃度的藥物可制作腫瘤細胞生長抑制率的量。等染料，在室溫下放置5分鐘后，在15分鐘用血球計數(shù)板計數(shù)200個細胞。于減緩乃至停止，進入所謂的平臺期。對增殖細胞的殺傷力。以集落形成抑制百分率對對數(shù)劑量作圖，可得“S”型曲線，從曲線上。線性關系，可用于細胞的定量。取Walker-256瘤體制成瘤細胞懸液，按106個細胞接種于大鼠大腿肌肉。方法是取接種于C57BL/6小鼠肌肉或腋窩皮下的13～15天的Lewis肺癌，制成細。的方法有機械振蕩法、雙胸苷同步法、含羞草氨酸俘獲法和離心洗脫法。在撤除含羞草氨酸后，細胞可同步進入S期。前者通過測定細胞的熒光強度來定量細胞的DNA量；后者則利
【正文】 構的動態(tài)變化的關鍵性核酶，分成拓撲異構酶 I和 II，抑制拓撲異構酶 I可以造成 DNA的單鏈斷裂，抑制拓撲異構酶 II， 可造成雙鏈斷裂，進而干擾 DNA的復制、重組和基因表達。實驗的原理是用從腫瘤細胞核提取的拓撲異構酶II處理 PBR322DNA，后者是一種質粒 DNA，主要存在有超螺旋、缺口狀和線性 DNA三種形式，瓊脂糖電泳上顯示出三條帶，在拓撲異構酶的作用下超螺旋 DNA解旋、斷裂，電泳時超螺旋帶減弱或消失，相應的缺口環(huán)狀或線性 DNA增加。如果藥物對拓撲異構酶具有抑制作用，則可見超螺旋帶保留。此方法亦可改進為觀察藥物對拓撲異構酶功能的促進和抑制作用。方法是選定不能使一定量 DNA完全斷裂量的拓撲異構酶處理 PBR322DNA后電泳可見超螺旋帶，同時加入不同濃度的藥物，如果藥物抑制拓撲異構酶，則超螺旋帶增強，若藥物增強拓撲異構酶活性，則見螺旋帶減弱或消失。 （六）藥物對細胞核酸代謝的影響 DNA和 RNA合成均需要特殊氨基酸，用同位素標記前體物如 3HTdR， 3HUR可分別摻入到細胞 DNA 和 RNA中去， 用液閃法測定其同位素活性則可知細胞 DNA和 RNA 的合成情況。 （七）藥物對腫瘤細胞凋亡的誘導作用 細胞凋亡是一種受基因調控的細胞程序性死亡過程，細胞凋亡時表現(xiàn)為細胞體縮小，染色質濃縮成大小不等的塊狀，并裂解為小片段。 DNA 斷裂長度為 核小體核苷酸長度 (180～200 堿基對 )的整倍數(shù)，提取后普通的瓊脂糖電泳表現(xiàn)為特殊的云梯狀，凋亡小體形成。檢查細胞凋亡的方法有： 熒光顯微鏡的形態(tài)學檢查 該方法是利用凋亡細胞染色質濃縮， DNA 廣泛裂解的特征和熒光化合物可嵌入 DNA分子或以靜電相互作用與 DNA分子結合的原理，建立 DNA的熒光探針。常用的方法是用 Hoechst33342和 PI聯(lián)合染色，然后在熒光顯微下用紫外光激發(fā)。凋亡的細胞對 Hoechst33342 具有高攝取比，加之染色質的高度濃縮，呈強藍色熒光；正常細胞呈微弱熒光，壞死細胞則呈紅色熒 光（被 PI染色）。 流式細胞光度術 該方法的原理是用 DNA結合性的熒光染料標記 DNA， 因為細胞發(fā)生凋亡時，內源性核酸內切酶降解、斷裂 DNA，斷裂生成的小分子量 DNA 溢出細胞外，細胞內 DNA總量降低，利用流式細胞光度術可以檢測出 DNA的這種結構和量的變化。 瓊脂糖電泳分析法 利用該方法可檢測出呈云梯狀的寡聚核小體。
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