腫瘤藥理實(shí)驗(yàn)方法與技術(shù)-資料下載頁
2024-09-04 20:03本頁面
【導(dǎo)讀】腫瘤藥理實(shí)驗(yàn)方法無外乎體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)兩種。從實(shí)驗(yàn)?zāi)康纳峡?，又可以分成抗癌作用。（一）體外實(shí)驗(yàn)法：用培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞系進(jìn)行。計(jì)算藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率。用系列濃度的藥物可制作腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率的量。等染料，在室溫下放置5分鐘后，在15分鐘用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞。于減緩乃至停止，進(jìn)入所謂的平臺(tái)期。對(duì)增殖細(xì)胞的殺傷力。以集落形成抑制百分率對(duì)對(duì)數(shù)劑量作圖，可得“S”型曲線，從曲線上。線性關(guān)系，可用于細(xì)胞的定量。取Walker-256瘤體制成瘤細(xì)胞懸液，按106個(gè)細(xì)胞接種于大鼠大腿肌肉。方法是取接種于C57BL/6小鼠肌肉或腋窩皮下的13～15天的Lewis肺癌，制成細(xì)。的方法有機(jī)械振蕩法、雙胸苷同步法、含羞草氨酸俘獲法和離心洗脫法。在撤除含羞草氨酸后，細(xì)胞可同步進(jìn)入S期。前者通過測(cè)定細(xì)胞的熒光強(qiáng)度來定量細(xì)胞的DNA量；后者則利
【正文】 構(gòu)的動(dòng)態(tài)變化的關(guān)鍵性核酶，分成拓?fù)洚悩?gòu)酶 I和 II，抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶 I可以造成 DNA的單鏈斷裂，抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶 II， 可造成雙鏈斷裂，進(jìn)而干擾 DNA的復(fù)制、重組和基因表達(dá)。實(shí)驗(yàn)的原理是用從腫瘤細(xì)胞核提取的拓?fù)洚悩?gòu)酶II處理 PBR322DNA，后者是一種質(zhì)粒 DNA，主要存在有超螺旋、缺口狀和線性 DNA三種形式，瓊脂糖電泳上顯示出三條帶，在拓?fù)洚悩?gòu)酶的作用下超螺旋 DNA解旋、斷裂，電泳時(shí)超螺旋帶減弱或消失，相應(yīng)的缺口環(huán)狀或線性 DNA增加。如果藥物對(duì)拓?fù)洚悩?gòu)酶具有抑制作用，則可見超螺旋帶保留。此方法亦可改進(jìn)為觀察藥物對(duì)拓?fù)洚悩?gòu)酶功能的促進(jìn)和抑制作用。方法是選定不能使一定量 DNA完全斷裂量的拓?fù)洚悩?gòu)酶處理 PBR322DNA后電泳可見超螺旋帶，同時(shí)加入不同濃度的藥物，如果藥物抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶，則超螺旋帶增強(qiáng)，若藥物增強(qiáng)拓?fù)洚悩?gòu)酶活性，則見螺旋帶減弱或消失。 （六）藥物對(duì)細(xì)胞核酸代謝的影響 DNA和 RNA合成均需要特殊氨基酸，用同位素標(biāo)記前體物如 3HTdR， 3HUR可分別摻入到細(xì)胞 DNA 和 RNA中去， 用液閃法測(cè)定其同位素活性則可知細(xì)胞 DNA和 RNA 的合成情況。 （七）藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用 細(xì)胞凋亡是一種受基因調(diào)控的細(xì)胞程序性死亡過程，細(xì)胞凋亡時(shí)表現(xiàn)為細(xì)胞體縮小，染色質(zhì)濃縮成大小不等的塊狀，并裂解為小片段。 DNA 斷裂長(zhǎng)度為 核小體核苷酸長(zhǎng)度 (180～200 堿基對(duì) )的整倍數(shù)，提取后普通的瓊脂糖電泳表現(xiàn)為特殊的云梯狀，凋亡小體形成。檢查細(xì)胞凋亡的方法有： 熒光顯微鏡的形態(tài)學(xué)檢查 該方法是利用凋亡細(xì)胞染色質(zhì)濃縮， DNA 廣泛裂解的特征和熒光化合物可嵌入 DNA分子或以靜電相互作用與 DNA分子結(jié)合的原理，建立 DNA的熒光探針。常用的方法是用 Hoechst33342和 PI聯(lián)合染色，然后在熒光顯微下用紫外光激發(fā)。凋亡的細(xì)胞對(duì) Hoechst33342 具有高攝取比，加之染色質(zhì)的高度濃縮，呈強(qiáng)藍(lán)色熒光；正常細(xì)胞呈微弱熒光，壞死細(xì)胞則呈紅色熒 光（被 PI染色）。 流式細(xì)胞光度術(shù) 該方法的原理是用 DNA結(jié)合性的熒光染料標(biāo)記 DNA， 因?yàn)榧?xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶降解、斷裂 DNA，斷裂生成的小分子量 DNA 溢出細(xì)胞外，細(xì)胞內(nèi) DNA總量降低，利用流式細(xì)胞光度術(shù)可以檢測(cè)出 DNA的這種結(jié)構(gòu)和量的變化。 瓊脂糖電泳分析法 利用該方法可檢測(cè)出呈云梯狀的寡聚核小體。
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