腫瘤藥理實(shí)驗(yàn)方法與技術(shù)-wenkub
2022-09-15 20:03:36 本頁(yè)面
【正文】 本方法利用分裂 ? 6代以上的克隆原單細(xì)胞子細(xì)胞可形成集 落成簇（每簇細(xì)胞數(shù)＞ 50）的能力，比較藥物對(duì)單個(gè)腫瘤細(xì)胞增殖能力的影響。培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞在初期為指數(shù)增殖期，隨著細(xì)胞密度的增加，因代謝產(chǎn)物的積聚和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消耗，增殖趨于減緩乃至停止，進(jìn)入所謂的平臺(tái)期。 噻唑藍(lán)（ MTT）法 在培養(yǎng)的活細(xì)胞線粒體中與 NADP相關(guān)的脫氫酶可將黃色的四氮唑（ MTT）催化成不溶性的藍(lán)紫色的甲替，將甲替用二甲基亞砜（ DMSO）溶解后，利用酶標(biāo)儀（試驗(yàn)波長(zhǎng) 570nm，參比波長(zhǎng) 450nm）測(cè)定光密度值，按照公式 實(shí)驗(yàn)組光密度值 腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率（ %） =（ 1 ） 100% 對(duì)照組光密度值 計(jì)算藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率。第七節(jié) 腫瘤藥理實(shí)驗(yàn)方法與技術(shù) 腫瘤藥理實(shí)驗(yàn)方法無(wú)外乎體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)兩種。用系列濃度的藥物可制作腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率的量效曲線。在培養(yǎng)后的的即刻、 7 天的細(xì)胞，用臺(tái)盼藍(lán)染色，細(xì)胞計(jì)數(shù)，然后取細(xì)胞對(duì)數(shù)對(duì)培養(yǎng)時(shí)間作圖可獲細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。本方法有貼壁法和半固體培養(yǎng)法兩種。在 16解剖顯微鏡下計(jì)數(shù)直徑大于75μ m的細(xì)胞集落。測(cè)試的細(xì)胞先用 TCA 固定，去除固定液，加入 SRB， 室溫下靜置， 然后去除未結(jié)合的 SRB， 用非緩沖 tris 堿液溶解結(jié)合的 SRB，在自動(dòng)化分光光度平板讀數(shù)儀（ 515nm波長(zhǎng)）測(cè)定 OD 值。 T/C大于 125%，并可重復(fù)，認(rèn)為有抗癌活性， T/C大于 150%，并可重復(fù)，認(rèn)為具有顯著活性。重復(fù)實(shí)驗(yàn) T/C ≤ 42%，認(rèn)為有活性。重復(fù)實(shí)驗(yàn) T/C≤ 42%為有活性。因此，本方法可以得到較純的 S期細(xì)胞。 G1期細(xì)胞體積最小，離出口最近而被最先洗出。 （二）藥物抗微管作用 利用微管蛋白在 37℃聚合，在冰浴上解聚的特點(diǎn)，測(cè)定微管蛋白或微管液的 OD值，分別獲得 S型的聚合曲線和倒 S型的解聚曲線， 比較藥物對(duì)曲線的影響， 用下式計(jì)算抑制率。用熒光分光光度計(jì)測(cè)定激發(fā)光譜和發(fā)射光譜可觀察到這些變化。 （五）藥物對(duì) DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶的影響 DNA 拓?fù)洚悩?gòu)酶是調(diào)節(jié) DNA 空間結(jié)構(gòu)的動(dòng)態(tài)變化的關(guān)鍵性核酶，分成拓?fù)洚悩?gòu)酶 I和 II，抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶 I可以造成 DNA的單鏈斷裂，抑制拓
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