腫瘤藥理實驗方法與技術(shù)(已改無錯字)
2022-10-17 20:03:36 本頁面
【正文】 界，然后撤去 TdR，讓細胞重新生長 ，同時進入 S期。因此，本方法可以得到較純的 S期細胞。 含羞草氨酸俘獲法 含羞草氨酸可將細胞集結(jié)于 G1/S 邊界，阻止細胞進入 S期。在撤除含羞草氨酸后，細胞可同步進入 S 期。 離心洗脫法 離心洗脫法的原理是進入細胞周期的的體積呈線性增加。 G1期細胞體積最小，離出口最近而被最先洗出。 G2/M細胞體積最大離進氣口最近而被后洗出。 在上述同步化處理尚需配合以同步化程度的檢測，檢查的方法有兩種：流式細胞光度技術(shù)和放射性同位素技術(shù)。前者通過測定細胞的熒光強度來定量細胞的 DNA 量； 后者則利用測定摻入到 DNA中的 3H胸苷（ 3HTdR）或溴脫氧尿苷（ BrdU）的量來獲知處于 S 期的細胞量。 （二）藥物抗微管作用 利用微管蛋白在 37℃聚合，在冰浴上解聚的特點，測定微管蛋白或微管液的 OD值，分別獲得 S型的聚合曲線和倒 S型的解聚曲線， 比較藥物對曲線的影響， 用下式計算抑制率。 實驗組光密度值 抑制率（ %） =（ 1 ） 100% 對照組光密度值 （三）藥物與 DNA結(jié)合能力檢查 吸收光譜移動法 原理是 DNA與藥物形成復(fù)合物后吸收光譜發(fā)生改變，吸收峰產(chǎn)生位移，位移波長隨 DNA/ 藥物復(fù)合物的量增加而增加。利用紫外分光光度計進行紫外吸收光譜掃描，可觀察到這些改變。 熒光光譜移動法 原理是在激發(fā)光的激發(fā)下， DNA藥物復(fù)合物的熒光發(fā)射光譜發(fā)生改變，譜峰向短波方向移動，熒光強度增強，同時激發(fā)光譜說發(fā)生改變。用熒光分光光度計測定激發(fā)光譜和發(fā)射光譜可觀察到這些變化。 （四）藥物造成的 DNA損傷 彗星（ Comet）微凝膠單細胞電泳法 正常的 DNA為負超螺旋結(jié)構(gòu)， 在 pH雙鏈形式存在 , 在 pH。 DNA受損后鏈斷裂 , 成為一個松散的結(jié)構(gòu) , 在電場的作用下 ,松散的 DNA離開細胞核向正極移動 , 形成彗星似的拖尾 ,變換不同 pH緩沖液可檢測斷裂的是雙鏈還是單鏈。 堿洗脫法 收集細胞于濾膜上，用細胞溶解液裂解細胞并洗去 RNA 和蛋白質(zhì)，暴露DNA，用洗脫液進行洗脫，若 DNA發(fā)生鏈斷裂，則易于經(jīng)濾膜洗出。 （五）藥物對 DNA拓撲異構(gòu)酶的影響 DNA 拓撲異構(gòu)酶是調(diào)節(jié) DNA 空間結(jié)
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