腫瘤藥理實驗方法與技術(shù)-wenkub.com
2024-08-31 20:03 本頁面
【正文】 流式細胞光度術(shù) 該方法的原理是用 DNA結(jié)合性的熒光染料標記 DNA， 因為細胞發(fā)生凋亡時，內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶降解、斷裂 DNA，斷裂生成的小分子量 DNA 溢出細胞外，細胞內(nèi) DNA總量降低，利用流式細胞光度術(shù)可以檢測出 DNA的這種結(jié)構(gòu)和量的變化。 DNA 斷裂長度為 核小體核苷酸長度 (180～200 堿基對 )的整倍數(shù)，提取后普通的瓊脂糖電泳表現(xiàn)為特殊的云梯狀，凋亡小體形成。此方法亦可改進為觀察藥物對拓撲異構(gòu)酶功能的促進和抑制作用。 堿洗脫法 收集細胞于濾膜上，用細胞溶解液裂解細胞并洗去 RNA 和蛋白質(zhì)，暴露DNA，用洗脫液進行洗脫，若 DNA發(fā)生鏈斷裂，則易于經(jīng)濾膜洗出。 熒光光譜移動法 原理是在激發(fā)光的激發(fā)下， DNA藥物復(fù)合物的熒光發(fā)射光譜發(fā)生改變，譜峰向短波方向移動，熒光強度增強，同時激發(fā)光譜說發(fā)生改變。前者通過測定細胞的熒光強度來定量細胞的 DNA 量； 后者則利用測定摻入到 DNA中的 3H胸苷（ 3HTdR）或溴脫氧尿苷（ BrdU）的量來獲知處于 S 期的細胞量。 離心洗脫法 離心洗脫法的原理是進入細胞周期的的體積呈線性增加。雙胸苷同步法的原理是先以高濃度的 TdR處理細胞，使細胞內(nèi)的 dTTP升高，后者抑制 CDP 向 dCDP的轉(zhuǎn)變， DNA復(fù)制受阻， S期細胞停滯在S 期，其它期細胞積聚在 G1/S邊界；撤 TdR，讓原處于 S期的細胞完全越過 S期，再給予TdR，讓越過 S期的細胞進入 G1/S邊界，然后撤去 TdR，讓細胞重新生長 ，同時進入 S期。方法是取接種于 C57BL/6小鼠肌肉或腋窩皮下的 13～ 15天的 Lewis肺癌，制成細胞懸液接種 2 106個細胞于 BDF1小鼠皮下或腹腔內(nèi)， 12天后處死動物，作皮下接種者直接摘取腫瘤稱重，作腹腔接種者，將雙側(cè)后肢從髖關(guān)節(jié)處剪下，荷瘤肢重減去正常肢重即為瘤重。計算瘤重和T/C。取接種于 DBA/2小鼠第 6～7 天之腹水，制成細胞懸液，每只小鼠（ DBF1 或 CDF1）腹腔接種活細胞 1 105，觀察體重變化，計算平均存活時間 T/C（ T治療組存活時間， C對 照組存活時間）。 硫化若丹明 B法（ SRB）法 硫化若丹明（ sulforhamine B）呈粉紅色，溶于水，可與生物大分子的堿性氨基酸結(jié)合，這種結(jié)合物在波長 515nm 時的讀數(shù)與細胞表現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，可用于細胞的定量。移入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 集落形成法
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