生化實(shí)驗(yàn)技術(shù)與方法-wenkub.com
2025-05-08 16:32 本頁面
【正文】 脫色：先用蒸餾水沖洗凝膠，再用脫色液（冰醋酸：蒸餾水：甲醇 =75： 875： 50）脫色 1h。 2. 電荷異常的蛋白質(zhì)（如組蛋白，帶大量正電荷） ，不于分子量呈線性關(guān)系（如膠原蛋白） （如糖蛋白） 實(shí)驗(yàn)操作 編號(hào) 溶液名稱 12%分離膠 4%濃縮膠 1 30% Acr –% Bis 2 pH Tris HCI 3 pH HCI 4 10%SDS 50ul 15ul 5 TEMED 5ul 5ul 6 10%AP 50ul 15ul 7 H2O 總體積 約 5 mL 約 mL 膠的制備 標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì) 分子量 兔磷酸化酶 B 97 400 牛血清白蛋白 66 200 兔肌動(dòng)蛋白 43 000 牛碳酸酐酶 31 000 胰蛋白酶抑制劑 20 100 雞蛋清溶菌酶 14 400 樣品的處理：按 /1mL溶液的比例向標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)或待測樣品中加入樣品溶解液（小試管），充分溶解后，置沸水浴 3min，取出冷至室溫。 操作如同 PAGE。 因此在進(jìn)行電泳時(shí)，蛋白質(zhì)分子的遷移速度取決于分子大小。 SDS的作用： ，破壞蛋白質(zhì)的二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)，強(qiáng)還原劑（巰基乙醇）能使二硫鍵斷裂，使蛋白質(zhì)完全變性。 蛋白質(zhì)測定（考馬斯亮藍(lán)染色法） 取酶液 ，用蒸餾水稀釋至 5ml 取試管 8支，按下表加入各溶液： 將上述各試管混勻，靜置 2min，測定各管的 A595。 ? 取試管 2支，按表中所述（ 0號(hào)為調(diào)零管， 1號(hào)為測定管。 （ 4）洗柱：約用 2倍床體積的 A液（ ）及 B液（含 1mol/LNaCl 的 ）洗柱， 按洗脫管編號(hào)，取 A280值高的管中洗脫液測其 PAL的活力；合并主要含有 PAL活力的各管洗脫液，并量出其體積（
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