生化實(shí)驗(yàn)技術(shù)與方法-文庫吧
2025-04-22 16:32 本頁面
【正文】 l/Lβ巰基乙醇） 固體硫酸銨 （ ，含 ，%甘油， 20mmol/Lβ巰基乙醇）； DEAE纖維素 52 操作步驟 酶液提取 （ 1）植物材料 2g，剪成小段，加入 5倍體積的酶提取液，于冰浴上用研缽研磨。 （ 2）將已勻漿的酶液轉(zhuǎn)入離心管， 4000r冷凍離心 30min。 （ 3）取離心后的上清液（酶粗提液），量出其體積，留樣 。 硫酸銨分級(jí)沉淀酶蛋白 （ 1）根據(jù)實(shí)際體積、溫度和硫酸銨飽和度用量表，算出達(dá)到 38%飽和度應(yīng)加入 酶粗提液 中的硫酸銨量，并稱硫酸銨。（ 240g/L) （ 2）將酶液倒入燒杯內(nèi)，邊緩慢攪拌邊緩慢加入稱好的固體硫酸銨，待全部加完后，再緩慢攪拌 10min；然后于 9000r離心 15min，保留上清液于燒杯內(nèi)。 （ 3）根據(jù)硫酸銨飽和度用量表，算出從 38%到 75%飽和度所需硫酸銨用量。 （ 222g/L) （ 4）按上述（ 2）步同法處理，離心后，棄去上清液，保留沉淀。 （ 5）將沉淀溶于 2ml酶抽提液中 ,留樣 。 透析脫鹽 酶液裝入透析袋，放入低鹽溶液中透析過夜 ,留樣 。 銀杏葉 2g +10ml酶提取液研磨 4000rpm、30min 取 上清液 加硫酸銨至飽和度 38% 9000rpm、 15min 取 上清液 加硫酸銨至飽和度 75% 9000rpm、 15min 取 沉淀 溶于2ml酶抽提液 透析 純化 離子交換層析 DEAE纖維素 （ 1）稱取 DEAE纖維素 52干粉 1~，加 20ml的 酸鹽緩沖液（ ）浸泡 4h以上（或浸泡過夜）。 （ 2）裝柱：把預(yù)處理的 DEAE纖維素 52裝柱。裝柱完成后，用 2~3個(gè)床體積的 （ ）洗脫平衡
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