生化實(shí)驗(yàn)技術(shù)與方法(已修改)
2025-05-28 16:32 本頁(yè)面
【正文】 糖的薄層層析 ? 實(shí)驗(yàn)原理 ? 薄層層析是一種微量而快速的層析方法。該法是把吸附劑或支持劑涂布在玻璃板上成為一薄層，將要分析的樣品滴加到薄層上，然后用合適的溶劑進(jìn)行展開(kāi)，使樣品各個(gè)成分分離，然后進(jìn)行定性鑒定和定量測(cè)定。 ? 根據(jù)原理的不同薄層層析通常有 4種類(lèi)型：吸附薄層層析，分配薄層層析，離子交換薄層層析和薄層電泳。 實(shí)驗(yàn)操作 ：注意膠要均勻。 g硅膠 H加 %CMC溶液，研磨數(shù)分鐘后，倒在預(yù)先準(zhǔn)備好的玻璃板上，鋪開(kāi)，使?jié){液分部均勻，放在水平臺(tái)上，自然晾干。 2. 板的處理 ： 薄板的活化： 105℃ ， 薄板的刮分：徑向?qū)游龅膬?yōu)點(diǎn)是：樣品展層后圖譜呈弧形帶狀，使 Rf值相近的化合物也能清楚地分開(kāi)。 3. 點(diǎn)樣： 樣品為鼠李糖、木糖和葡萄糖。點(diǎn)樣量810μl。注意：點(diǎn)樣點(diǎn)的直徑小于 5mm，點(diǎn)樣要少量多次，吹風(fēng)機(jī)風(fēng)力不能過(guò)大。 4. 展層： 展層溶劑為：乙酸乙酯：甲醇：乙酸：水 =12： 3： 3： 2（體積比），新鮮配制。 5. 顯色 ：顯色劑：苯胺 二苯胺 磷酸試劑。 20mm 10mm 30mm 8mm 苯丙氨酸解氨酶的提取純化 ? 實(shí)驗(yàn)原理 ? 苯丙氨酸解氨酶（ Lphenylalanine： ammonia lyase，簡(jiǎn)稱 PAL； ）是植物體內(nèi)苯丙烷類(lèi)代謝的關(guān)鍵酶，與一些重要的次生物質(zhì)如木質(zhì)素、異黃酮類(lèi)植保素、黃酮類(lèi)色素等合成密切有關(guān)，在植物正常生長(zhǎng)發(fā)育和抵御病菌侵害過(guò)程中起重要作用。 ? 本次實(shí)驗(yàn)是以銀杏葉為原料采用分步鹽析、透析脫鹽、離子交換等方法得到苯丙氨酸解氨酶。 儀器 高速冷凍離心機(jī)；恒溫水?。浑娮犹炱?；柱層析系統(tǒng) 試劑 酶提取液： （含1mmol/LEDTA、 20mmo
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