醫(yī)學(xué)]20xx生化與分子生物學(xué)實(shí)用技術(shù)(已修改)
2025-01-16 05:54 本頁面
【正文】 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)總體設(shè)計(jì) ? 時(shí)間：周二 8： 30~10:00 ? 地點(diǎn)： 309室 ? 內(nèi)容：講授： DNA的實(shí)驗(yàn)方案 —— cDNA mRNA 提取、 PCR(酶切位點(diǎn)） 實(shí)驗(yàn)：上午 提取 2. PCR 下午 3. 電泳 (分組操作） ? 時(shí)間：周三 ? 地點(diǎn)： 309室 ? 實(shí)驗(yàn)：上午 （分組操作） （分組操作） 下午 （分組操作） ? 時(shí)間：周四 ? 地點(diǎn)： 309室 ? 實(shí)驗(yàn)：下午：質(zhì)粒提?。ǚ纸M操作） 酶切電泳（略） ? 主要知識(shí)點(diǎn)：基因重組的概念及過程；用于重組 DNA技術(shù)的理想載體應(yīng)該具備的特點(diǎn)；獲得目的基因的途徑；真核表達(dá)體系的優(yōu)點(diǎn)；常用真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法的種類； RTPCR的基本實(shí)驗(yàn)步驟（包括PCR）；限制性內(nèi)切酶的特點(diǎn) 重組 DNA技術(shù) Rebinant DNA Technology ? 重組 DNA技術(shù)相關(guān)概念 克隆 (clone):來自同一始祖的相同副本或 拷貝的集合。 獲取同一拷貝的過程稱為克隆化 (cloning)， 即 無性繁殖 。 ? DNA克隆 技術(shù)水平： 分子克隆 (molecular clone)即 DNA 克隆 細(xì)胞克隆 個(gè)體克?。▌?dòng)物或植物） DNA克隆 應(yīng)用酶學(xué)的方法 ， 在體外將各種來源的遺傳物質(zhì) （ 同源的或異源的 、 原核的或真核的 、 天然的或人工的 DNA） 與載體 DNA接合成一具有自我復(fù)制能力的 DNA分子 —— 復(fù)制子 (replicon)， 繼而通過轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞 ， 篩選出含有目的基因的轉(zhuǎn)化子細(xì)胞 ， 再進(jìn)行擴(kuò)增提取獲得大量同一DNA 分子 ， 也稱基因克隆或重組 DNA (rebinant DNA) 。 目的 ① 分離獲得某一感興趣的基因或 DNA ② 獲得感興趣基因的表達(dá)產(chǎn)物（蛋白質(zhì)） 基因工程 (geic engineering) —— 實(shí)現(xiàn)基因克隆所用的方法及相關(guān)的工作稱 基因工程 ，又稱重組 DNA工藝學(xué)。 重組 DNA 技術(shù)操作的主要步驟 載體 質(zhì)粒 噬菌體 病毒 目的基因（外源基因） 基因組 DNA cDNA 人工合成 PCR 產(chǎn)物 限制酶消化 開環(huán)載體 DNA 目的基因 連接酶 重組體 轉(zhuǎn)化 體外包裝，轉(zhuǎn)染 帶重組體的宿主 篩選 表型篩選 酶切電泳鑒定 菌落原位雜交 目 錄 鑒定（測(cè)序） 以 質(zhì) 粒 為 載 體 的 DNA 克 隆 過 程 目 錄 ?載 體 ? 定義： 能夠攜帶外源基因并且具有自主復(fù)制能力的 DNA,是將目的 DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞的工具。 在重組 DNA技術(shù)中，常用基因載體有兩種類型： 克隆載體 表達(dá)載體 ?載體
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