分子生物學(xué)課件cha(已修改)
2025-01-30 00:54 本頁(yè)面
【正文】 . 三股螺旋 DNA (Trible Helix DNA, DNA) 潛在的專一與 DNA (蛋白質(zhì) ) 結(jié)合的能力 ※ DNA 的發(fā)現(xiàn)與證實(shí) l 1953 年以前 Pauling (Chemist) 提出 DNA 存在的可能性 l 1953 年 Watson amp。 Crick DNA model 證明沿大溝存在多余的氫鍵給體與受體 形成 DNA 可能性 DNA結(jié)構(gòu)領(lǐng)域與 Watson競(jìng)爭(zhēng)，支流 ?主流 ? l 1957年 Davis , Felsenfeld , Rich 發(fā)現(xiàn) poly(U) + poly(U) + poly(A) RNA DNA的概念 l 1966年 Miller amp。 Sobell 實(shí)現(xiàn) RNA + DNATrible polyNt as Repressor 關(guān)閉基因 但由于 DNA的提出而被忽視 但因證明 LacI 產(chǎn)物為 Repressor 而被忽視 ● 1975年 Perlgut 人工 合成 DNA并證明其 Tm 值 , 沉降系數(shù) (S) l 1987 年 Mirkin . S . M Nature 330 (495) 證明 plasmid DNA 在 pH= , 有 DNA的存在 ● 1987年 Dervan . Moser Science 238 (645) 合成 DNA + DNA → DNA ? 實(shí)現(xiàn) DNA的定點(diǎn)切割 ? 研究 Xray photograph ? 核磁共振 → 結(jié)構(gòu)功能 繼 Davis（ 1957）后 30年 第一次證明 DNA 在生物體內(nèi)的存在 ※ . DNA的類型 PolyT/A TTTTTTTTTTT AAAAAAAAAA PolyT/A TTTTTTTTTTT AAAAAAAAAA TTTTTTTTTTT AAAAAAAAAA TTTTTTTTTTT AAAAAAAAAA ● . DNA + . DNA + . DNA ● Homologous palindromic sequence in a D. S. DNA (mirror image structure) TTCCCTCTTTCCCCCCTTTCTCCCTT AAGGGAGAAAGGGGGGAAAGAGGGAA Mirkin (1987) pGG332 plasmid DNA TTCCCTCTTTCCC AAGGGAGAAAGGG TTCCCTCTTTCCC AAGGGAGAAAGGG Nodule DNA Hinged DNA free DNA Homologous palindromic sequence in a D. S. DNA Nodule DNA or Hinged DNA 三鏈螺旋 雙鏈螺旋 Hinged DNA Hinged DNA l S. S. DNA + D. S. DNA T. S. DNA ☆ PU + PU/PY (偏堿性介質(zhì)中穩(wěn)定 ) ☆ PY + PU/PY (偏酸性介質(zhì)中穩(wěn)定 ) 常見(jiàn)類型 l第三條鏈位于 BDNA的 Major groove中 l與 D. S. DNA一起旋轉(zhuǎn) T. S. DNA 的連接鍵 Watson bonding A ＝ T G ≡ C (D. S. DNA) H+ Hoogsteen bonding 第二鏈的 pu 6‘,7’與 第三鏈的 py4‘,3’形成 H 鍵 G ＝ C+ (pH 小于 7) 第三鏈 質(zhì)子化 G (6,7) ＝ G (1,2) A ＝ A G ＝ A + A ＝ T ? 三股螺旋 DNA形成的條件及結(jié)構(gòu)特點(diǎn) 第三條單鏈 DNA分子 ? 位于 BDNA大溝內(nèi) ? 與 BDNA以 Hoogsteen 鍵連接 ? 在 Py / Pu (A,G): Pu (A,G) 結(jié)構(gòu)中 有多種配對(duì)方式， 鏡向結(jié)構(gòu) , 非必需條件 Trible helix Major groove Py : Pu : Py 3ed ? 在 Py / Pu : Py 結(jié)構(gòu)中 A T , G C兩氫鍵配對(duì) C質(zhì)子化 鏡相結(jié)構(gòu) 必需條件 l無(wú)論何種形式的三螺旋 DNA, 第二股中間 鏈必須是 Purin鏈 l 第三股鏈至少長(zhǎng)于 8 dNt l 真核生物基因組內(nèi) , 約 1%左右的序列為 大于 100 bp 的 homologous cluster (重復(fù)序 列與調(diào)控序列 ) T. S. DNA多存在于其中 T. S. DNA可能的功能 a) 可阻止調(diào)節(jié)蛋白與 DNA結(jié)合 , 關(guān)閉基因轉(zhuǎn)錄過(guò)程 micro－ RNA Epigeic! b) 與基因重組 , 交換有關(guān) c) 加入第三條 S. S. DNA 作為分子剪刀 (molecular scissors), 定點(diǎn)切割 DNA分子 d) 加入反義的第三條鏈 (antisence polydNt) 終止基因的表達(dá) . 四股螺旋 DNA ( tetraplex DNA, tetrable Helix DNA， quadruplex DNA) 發(fā)現(xiàn) 1958. Poly(I) Xray photograph 堿基形成環(huán)狀氫鍵連接結(jié)構(gòu) Tetrable Helix DNA均有形成 四股螺旋 DNA 的可能 5’TTAGGGTTAGGGTTAGGG3’ 3’AATCCCAATCCC5’ ? Poly (G), 4 (dG) ? 染色體端粒高度重復(fù)的 DNA序列 ? 著絲點(diǎn)附近的高度重復(fù)
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