腫瘤藥理實(shí)驗(yàn)方法與技術(shù)(參考版)
2024-09-08 20:03本頁面
【正文】 瓊脂糖電泳分析法 利用該方法可檢測出呈云梯狀的寡聚核小體。凋亡的細(xì)胞對(duì) Hoechst33342 具有高攝取比，加之染色質(zhì)的高度濃縮，呈強(qiáng)藍(lán)色熒光；正常細(xì)胞呈微弱熒光，壞死細(xì)胞則呈紅色熒 光（被 PI染色）。檢查細(xì)胞凋亡的方法有： 熒光顯微鏡的形態(tài)學(xué)檢查 該方法是利用凋亡細(xì)胞染色質(zhì)濃縮， DNA 廣泛裂解的特征和熒光化合物可嵌入 DNA分子或以靜電相互作用與 DNA分子結(jié)合的原理，建立 DNA的熒光探針。 （七）藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用 細(xì)胞凋亡是一種受基因調(diào)控的細(xì)胞程序性死亡過程，細(xì)胞凋亡時(shí)表現(xiàn)為細(xì)胞體縮小，染色質(zhì)濃縮成大小不等的塊狀，并裂解為小片段。方法是選定不能使一定量 DNA完全斷裂量的拓?fù)洚悩?gòu)酶處理 PBR322DNA后電泳可見超螺旋帶，同時(shí)加入不同濃度的藥物，如果藥物抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶，則超螺旋帶增強(qiáng)，若藥物增強(qiáng)拓?fù)洚悩?gòu)酶活性，則見螺旋帶減弱或消失。如果藥物對(duì)拓?fù)洚悩?gòu)酶具有抑制作用，則可見超螺旋帶保留。 （五）藥物對(duì) DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶的影響 DNA 拓?fù)洚悩?gòu)酶是調(diào)節(jié) DNA 空間結(jié)構(gòu)的動(dòng)態(tài)變化的關(guān)鍵性核酶，分成拓?fù)洚悩?gòu)酶 I和 II，抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶 I可以造成 DNA的單鏈斷裂，抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶 II， 可造成雙鏈斷裂，進(jìn)而干擾 DNA的復(fù)制、重組和基因表達(dá)。 DNA受損后鏈斷裂 , 成為一個(gè)松散的結(jié)構(gòu) , 在電場的作用下 ,松散的 DNA離開細(xì)胞核向正極移動(dòng) , 形成彗星似的拖尾 ,變換不同 pH緩沖液可檢測斷裂的是雙鏈還是單鏈。用熒光分光光度計(jì)測定激發(fā)光譜和發(fā)射光譜可觀察到這些變化。利用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行紫外吸收光譜掃描，可觀察到這些改變。 （二）藥物抗微管作用 利用微管蛋白在 37℃聚合，在冰浴上解聚的特點(diǎn)，測定微管蛋白或微管液的 OD值，分別獲得 S型的聚合曲線和倒 S型的解聚曲線， 比較藥物對(duì)曲線的影響， 用下式計(jì)算抑制率。 在上述同步化處理尚需配合以同步化程度的檢測，檢查的方法有兩種：流式細(xì)胞光度技術(shù)和放射性同位素技術(shù)。 G1期細(xì)胞體積最小，離出口最近而被最先洗出。在撤除含羞草氨酸后，細(xì)胞可同步進(jìn)入 S 期。因此，本方法可以得到較純的 S期細(xì)胞。 機(jī)械振蕩法 機(jī)械振蕩法分離同步化細(xì)胞是基于單層貼壁生長的細(xì)胞在進(jìn)入有絲分裂期時(shí) , 胞形變圓，松散地附在支持物上，利用搖晃或拍擊培養(yǎng)瓶可以剝離出這些細(xì)胞，利用此方法可以得到較純的 M 期細(xì)胞。重復(fù)實(shí)驗(yàn) T/C≤ 42%為有活性
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